一种快速鉴定镜鲤的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速鉴定镜鲤的方法，该方法包括以下步骤：1)提取组织DNA；2)PCR扩增；3)电泳检测。该方法运用了较少的试剂以及方便快捷容易操作的实验过程，可以在较短时间内、不处死鱼种的基础上，只需剪去少量鳍条或肌肉，就能快速准确的鉴别镜鲤。该方法更加有利于实际生产部门，科研部门快速鉴定所取样本，增加了鉴定结果的准确性和可信度，极大提高了工作效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种快速鉴定镜經的方法。
技术介绍
镜經隶属于硬骨鱼纲（Osteichthyes)、經型目（切priniformes)，經科 (切prinidae)。镜經具有生长速度快、含肉率高、肉质好的优点，已被全国水产良种审定委 员会审定为适合在我国推广的水产优良养殖品种。在合理的放养密度和较优的饲养条件 下，镜經生长速度非常快，在黑龙江地区（生产期120天）当年可育成规格达150克的鱼种， 2龄商品鱼规格可达1公斤W上。饲养成活率达98%左右，越冬成熟率达96%。在镜經的 养殖密度与其它經鱼的养殖密度相同的条件下，德国镜經的生长速度超过其它經鱼的生长 速度。 因此，对于镜經的种质资源的保护及鉴定就尤为重要。W前对镜經的鉴定主要是 通过形态学方面，然而，形态学鉴定并不能鉴定出镜經基因组是否被其他种經鱼污染。提供 一种能够快速鉴定镜經的方法势在必行。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种镜經体内缺失的序列，本专利技术的另一个目的是提供 一种依据上述缺失序列快速鉴定镜經的方法。 为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 一种快速鉴定镜經的方法，包括如下步骤： 本专利技术提供了镜經基因组的一段序列如SEQNO;1所示。[000引本专利技术还提供了一种用于扩增上述序列的引物。 上述引物的序列如沈QNO;2和沈QNO;3所示。 将上述引物用于快速鉴定镜經，包括如下步骤： 1)提取组织DNA;[001 引 2)PCR扩增；[001引扣电泳检测。 上述方法包括的步骤，可优化为：[001引 1)从待测的镜經组织中提取DNA;[001引 。W提取的DNA为模板，WSEQNO;2和SEQNO;3所示的引物进行PCR扩增； 3)琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果。 其中，上述步骤1)中所述經鱼组织为鶴条或肌肉。 其中，上述步骤1)中所述DNA提取方法是使用肥B的DNA提取试剂盒。 其中，上述步骤2)中PCR扩增的反应体系为15y1反应体系，由下列成分组成： TaqDNA聚合酶 0. 1y1 ;10Xbufferl. 5y1;DNTPmixturel. 5y1 ;DNA2y1 ;上游引物 0. 5y1 ;下游引物0. 5y1 ;无菌水8. 9yL。[002。 步骤。中PCR扩增的条件为；94°C4min变性， 本专利技术还提供一种包含上述引物的试剂盒。 本专利技术提供的方法是依据镜經基因组的一段序列缺失，而其他品种的經鱼内存在 此段序列，因此设计了一种特异性强的引物对各經鱼内的基因组进行扩增。该方法运用了 较少的试剂W及方便快捷容易操作的实验过程，可W在较短时间内、不处死鱼种的基础上， 只需剪去少量鶴条或肌肉，就能快速准确的鉴别镜經。该方法更加有利于实际生产部口，科 研部口快速鉴定所取样本，增加了鉴定结果的准确性和可信度，极大提高了工作效率。[002引此外，本专利技术在PCR扩增时使用的引物设计特异性很强，即使总DNA降解很厉害， 也对后续的鉴别试验没有影响，大大增加了本实验方法的可行性。 说明书附图 图1为琼脂糖凝胶检测PCR扩增结果的电泳条带图。【具体实施方式】W下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本 专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术所作的修饰或者替换，均属于本专利技术的范畴。 实施例1 通过二代测序技术测得镜經W及其他經鱼品种的基因序列，通过分析上述基因组 测序数据，比对經鱼各品系的序列差异，发现该缺失序列，如SEQNO;1所示；引物设计直接 在缺失序列的上下游2(K)bp内设计，设计的引物序列如SEQNO;2和SEQNO;3所示。 本专利技术提供的上述引物，在PCR反应时效率高，且对于缺失的序列扩增的特异性 强。[00础 实施例2 1)取镜經、荷包红經、彩經、黄河經和兴国红經的活鱼鱼鶴，每种鱼设4组重复，使 用肥B的DNA提取试剂盒提取上述活鱼鱼鶴的DNA，具体操作步骤参见试剂盒的说明书。 2)分别W上述镜經、荷包红經、彩經、黄河經和兴国红經的DNA为模板，W下述引 物（SEQNO;2和SEQNO;3所示）对其进行PCR的扩增，上游引物 5' -TGCACGTTACTTTATAAACACTCC-3'下游引物 5' -AAAAAGCAGCATGCCTTACAA-3' 该引物是专利技术人自行设计，由Invitrogen公司合成，PCR反应体系为15U1的反 应体系，包括；l〇Xbufferl.5ul;DNTPmixturel.5ul(2. 5ym/yl) ;DNA2ul;上游引物 (浓度l〇pm)0. 5y1 ;下游引物（浓度10pm)0. 5y1 ;无菌水8. 9yL。 PCR扩增条件为：[00川如用1-2%的琼脂糖凝胶检测PCR扩增结果，实验结果见图1，通过观察图1中的 电泳条带可W看出，镜經的基因组由于缺失该段序列，该序列如SEQIDNO;1所示，PCR扩 增后出现的是218bp的条带，序列如SEQIDN0;4所示，而其他四种經鱼的PCR扩增的条带 出现的位置在52化P，序列如SEQIDNO;5所示。通过上述方法进可W将镜經快速的从其 他品种的鱼中鉴定出来。 此外，每组經鱼的条带均清晰且没有拖带，可见本专利技术使用的引物的特异性非常 好，适用于镜經的鉴定。且每种經鱼组内的条带基本一致，说明该实验方法非常稳定。【主权项】1. 一段镜鲤基因组上的序列，其特征在于，序列如SEQNO:1所示。2. -种用于权利要求1所述的序列扩增的引物。3. 如权利要求2所述的引物，其特征在于，序列如SEQNO:2和SEQNO:3所示。4. 权利要求2所述的引物在快速鉴定镜鲤上的应用。5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于，包括如下步骤： 1) 提取组织DNA; 2. PCR扩增； 3) 电泳检测。6. 如权利要求5所述的，其特征在于，包括如下步骤： 1) 从待测的镜鲤组织中提取DNA; 2) 以提取的DNA为模板，以SEQNO:2和SEQNO:3所示的引物进行PCR扩增； 3) 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果。7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述鲤鱼组织为鳍条或肌肉。8. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述DNA提取方法是使用NEB的DNA提取试 剂盒。9. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR扩增的反应体系为15ill反应 体系，由下列成分组成：TaqDNA聚合酶 0?IuI;10Xbufferl. 5uI;DNTPmixturel. 5u1 ; DNA2iil;上游弓丨物0.5iil;下游弓丨物0.5iil;无菌水8.9iiL。10. 含有权利要求2所述引物的试剂盒。【专利摘要】本专利技术提供了，该方法包括以下步骤：1)提取组织DNA；2)PCR扩增；3)电泳检测。该方法运用了较少的试剂以及方便快捷容易操作的实验过程，可以在较短时间内、不处死鱼种的基础上，只需剪去少量鳍条或肌肉，就能快速准确的鉴别镜鲤。该方法更加有利于实际生产部门，科研部门快速鉴定所取样本，增加了鉴定结果的准确性和可信度，极大提高了工作效率。【IPC分类】C12Q1/68, C12N15/11【公开号】CN105200042【申请号】CN201410276992【专利技术人】许建, 崔军,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一段镜鲤基因组上的序列，其特征在于，序列如SEQ NO：1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许建，崔军，徐鹏，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11