一种检测梭梭种子的生活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测梭梭种子的生活力的方法。本发明专利技术提供的检测梭梭种子生活力的方法，包括如下步骤：采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液对梭梭种子进行染色，梭梭种子的生活力＝所检测的种子中胚被染上红色的种子的数量/所检测的种子的数量×100％。本发明专利技术所提供的检测梭梭种子的生活力的方法，克服了现有方法中通过检测萌发率来测定梭梭种子生活力时用时较长的技术难题，具有操作方便、快速、省时省力的特点。本方法具有重要的经济和应用推广价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测梭梭种子的生活力的方法
本专利技术涉及一种检测梭梭种子的生活力的方法。
技术介绍
梭梭是亚洲荒漠区中分布最广泛的荒漠植被类型之一，也是一种超旱生植物、极为抗旱耐盐，在防风固沙以及生态修复中起重要的作用。梭梭种子是一种短寿命的种子，在室温贮藏条件下只有10个月的寿命。在梭梭种子贮藏、种质资源保存和种子质量评价过程中，梭梭种子生活力的测定是一项关键技术。目前梭梭种子生活力的测定大多采用萌发的方法，随着梭梭种子贮藏时间的延长，其萌发活性降低，通常需要3-7天才能检测梭梭种子的生活力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测梭梭种子的生活力的方法。本专利技术提供了一种检测梭梭种子生活力的方法，包括如下步骤：采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液对梭梭种子进行染色，梭梭种子的生活力＝所检测的种子中胚被染上红色的种子的数量/所检测的种子的数量×100％。所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液的溶剂可为磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.0的磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液具体可为磷酸二氢钾-磷酸二氢钠缓冲液。所述磷酸二氢钾-磷酸二氢钠缓冲液的制备方法具体为：将2体积份0.1M磷酸二氢钾水溶液与3体积份0.1M磷酸氢二钠水溶液混合。所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液中，2，3，5-氯化三苯基四氮唑的质量百分含量可为0.5％-2％。所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液中，2，3，5-氯化三苯基四氮唑的质量百分含量优选为1％。所述梭梭种子可为未除去种皮的梭梭种子，所述染色的条件可为：25℃-40℃黑暗条件下静置染色12-36小时。所述染色的条件优选为：30℃黑暗条件下静置染色24小时。所述梭梭种子可为除去种皮的梭梭种子，所述染色的条件为：25℃-40℃黑暗条件下静置染色2-12小时。所述染色的条件优选为：30℃黑暗条件下静置染色4小时。本专利技术还保护2，3，5-氯化三苯基四氮唑的一种新用途，即2，3，5-氯化三苯基四氮唑在检测梭梭种子生活力中的应用。本专利技术所提供的检测梭梭种子的生活力的方法，克服了现有方法中通过检测萌发率来测定梭梭种子生活力时用时较长的技术难题，具有操作方便、快速、省时省力的特点。本方法具有重要的经济和应用推广价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中的％，如无特殊说明，均指的是质量百分含量。实施例中的梭梭(Haloxylonammodendron)为梭梭属(HaloxylonBunge)植物梭梭Haloxylon.ammodendron(C.A.Mey.)Bunge。2，3，5-氯化三苯基四氮唑：北京索莱宝科技有限公司，CAS298-96-4。磷酸盐缓冲液(pH7.0的PBS缓冲液)的制备方法：将2体积份0.1M磷酸二氢钾水溶液与3体积份0.1M磷酸氢二钠水溶液混合，得到pH7.0的磷酸二氢钾-磷酸二氢钠缓冲液。TTC溶液的制备方法：将2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶于pH7.0的PBS缓冲液，得到TTC溶液。种子的生活力＝所检测的种子中胚被染上红色的种子的数量/所检测的种子的数量×100％。实施例1、梭梭种子生活力测定的优化实验梭梭种子采自内蒙古阿拉善盟左旗的野生梭梭林。进行试验的梭梭种子分为两种，除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子。一、除去种皮和未除去种皮梭梭种子的染色效果比较1、取梭梭种子，置于1％TTC溶液中30℃、黑暗条件下静置染色12h。2、完成步骤1后，取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(除去种皮的种子直接进行观察统计，未除去种皮的种子先除去种皮再观察统计)。进行3次重复试验，每次重复试验中除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子各取200粒。除去种皮的梭梭种子的生活力为85.3±1.6％，未除去种皮的梭梭种子的生活力为35.3±0.3％。结果表明，除去种皮有利于梭梭种子的生活力的测定。二、不同浓度的TTC溶液对梭梭种子染色的效果比较1、取梭梭种子，置于TTC溶液(0.1％TTC溶液、0.5％TTC溶液、1％TTC溶液或2％TTC溶液)中，30℃、黑暗条件下静置染色12h。2、完成步骤1后，取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(除去种皮的种子直接进行观察统计，未除去种皮的种子先除去种皮再观察统计)。进行3次重复试验，每次重复试验中除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子各取200粒。对于除去种皮的梭梭种子来说：采用0.1％TTC溶液的染色结果较低，生活力为76.0±1.6％，与采用其他浓度的TTC溶液的差异显著；采用0.5％-2％TTC溶液处理的染色结果差异不显著，生活力为85.3±1.6％。对于未除去种皮的种子来说：采用0.1％TTC溶液的染色结果较低，生活力仅为16±0.3％，与采用其他浓度的TTC溶液的差异显著；采用0.5％-2％TTC溶液处理的染色结果差异不显著，生活力为36.0±0.3％。三、TTC溶液染色时间对梭梭种子的染色效果比较1、取除去种皮的梭梭种子，置于1％TTC溶液中，30℃、黑暗条件下静置染色2小时、4小时、6小时或12小时，然后取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(直接进行观察统计)。2、取未除去种皮的梭梭种子，置于1％TTC溶液中，30℃、黑暗条件下静置染色12小时、24小时或36小时，然后取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(先除去种皮再观察统计)。进行3次重复试验，每次重复试验中除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子各取200粒。对于除去种皮的梭梭种子来说，染色2h后生活力为54.0±0.3％，与其他处理差异显著；染色4-12h的结果差异不显著；染色4小时的种子颜色较深且用时较短，为染色最佳时间，生活力为84.0±0.3％。对于未除去种皮的梭梭种子来说：染色12h的种子生活力为36.0±0.3％，与其他处理差异显著；染色24和36h的结果差异不显著；染色24小时的种子颜色较深且用时较短，为染色最佳时间，种子生活力为88.3±1.1％。四、TTC溶液染色温度对梭梭种子的染色效果比较1、取除去种皮的梭梭种子，置于1％TTC溶液中，在某一温度(20℃、30℃或40℃)、黑暗条件下静置染色4小时，然后取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(直接进行观察统计)。2、取未除去种皮的梭梭种子，置于1％TTC溶液中，在某一温度(20℃、30℃或40℃)、黑暗条件下静置染色24小时，然后取种子，用无菌水冲洗，观察并计算种子的生活力(先除去种皮再观察统计)。进行3次重复试验，每次重复试验中除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子各取200粒。实验结果表明，各处理间差异不显著，但在20℃下的染色较浅，在30℃、40℃条件下，梭梭种子的生活力都达到86.0±0.3％，30℃温度为最佳温度。实施例2、采用实施例1中优化的各个参数进行梭梭种子生活力的检测梭梭种子采自内蒙古阿拉善盟左旗的野生梭梭林。进行试验的梭梭种子分为两种，除去种皮的梭梭种子和未除去种皮的梭梭种子。1、取除去种皮的梭梭种子，置于1％TTC溶液中，在30℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测梭梭种子生活力的方法，包括如下步骤：采用2，3，5‑氯化三苯基四氮唑溶液对梭梭种子进行染色，梭梭种子的生活力＝所检测的种子中胚被染上红色的种子的数量/所检测的种子的数量×100％。

【技术特征摘要】
1.一种检测梭梭种子生活力的方法，包括如下步骤：采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液对梭梭种子进行染色，梭梭种子的生活力＝所检测的种子中胚被染上红色的种子的数量/所检测的种子的数量×100％；所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液中，2，3，5-氯化三苯基四氮唑的质量百分含量为0.5％-2％；所述梭梭种子为未除去种皮的梭梭种子；所述染色的条件为：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张红，宋松泉，多伟，白生玉，唐庆立，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11