一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法，将四方藤粉碎，过筛，按照质量体积比为1：8~20加入乙醇溶液回流提取，固液分离得到滤液，将滤液浓缩，向浓缩液中加入大孔树脂静态吸附，将吸附后的大孔树脂上柱，依次先用蒸馏水、乙醇溶液除去杂质、洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩得到岩白菜素粗品，将岩白菜素粗品用乙醇重结晶得到岩白菜素纯品。本发明专利技术原料来源广泛，价格便宜，生产成本低，生产条件温和，对环境污染小。

【技术实现步骤摘要】
一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法
本专利技术涉及一种从四方藤中提取、纯化岩白菜素的方法，属于天然药物开发利用

技术介绍
四方藤（CissusPterocladaHayata）属于葡萄科（Vitaceae）白粉藤属（CissusLinn.）植物，因其茎、枝、叶柄呈锐四方形而得名，又名方藤、宽筋藤、蚂蝗藤等。四方藤主要分布于我国的广西、广东、云南等南方地带，资源丰富，其性酸、涩、甘、平，具有活血散瘀、祛风湿、舒筋络、消炎等功效，在我国民间广泛用于风湿痹痛、腰肌劳损、外伤、出血等病痛的治疗，具有良好疗效。例如百色地区农民直接用四方藤鲜叶捣烂外敷止血；百色医院将四方藤制成粉剂和注射剂，用于治疗内外伤出血，十二指肠出血，胃炎等疾病。四方藤收载于《广西中草药》、《广西药用植物名录》、《中国药典》（1977年版一部）、《中药大辞典》等典籍中，因其来源丰富、价格低廉、疗效广泛而显著，是一种极具有开发利用价值的特色民族药用植物。尽管四方藤在我国少数民族民间具有悠久的药用历史与经验，但由于四方藤化学成分与药理研究的缺乏，在四方藤有效成分的开发利用上，尚未有深度产品的出现，其在市场上仍以原药材的形式出售，价格低廉。岩白菜素的结构：岩白菜素又名虎儿草素、岩白菜内酯，分子式为C14H16O9，是一种具有异香豆素结构的天然化合物。岩白菜素及其衍生物具有抗炎、止咳、镇痛、抑菌、抗氧化等多种药理活性。岩白菜素已作为镇咳祛痰药收载于《中华人民共和国药典》各版本中，在临床上用于支气管炎、肺气肿、胃炎等疾病的治疗，具有良好疗效，是一种药理活性广泛、疗效显著、毒副作用低的天然药物。由于化学合成的困难，岩白菜素主要用从天然药用植物中提取、纯化法制备。目前，岩白菜素提取方法的报道较多，而对于其纯化方法的报道较少。岩白菜素的提取方法主要有索式提取法、超声波提取法、超临界提取法、有机溶剂回流提取法、碱提取法等。然而，目前用于纯化岩白菜素提取物的方法难于规模化制备。如硅胶柱层析法是实验室常用的分离手段，但硅胶不能回收，洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有毒有机溶剂，成本高，操作难度大，不能用于产业化制备；重结晶法，必须是待结晶溶液中岩白菜素的含量高达一定程度时才能使用，普通的岩白菜素提取物，在没有经过其它方法富集之前，比较难于结晶而无法直接用重结晶法纯化。鉴于此，目前有机溶剂提取法尚停留在获得含有岩白菜素粗提物的阶段，而要利用该提取法大批量制备岩白菜素纯品，必须开发出可产业化放大、成本低的纯化方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种适合产业化放大，成本低的从四方藤中制备原料药岩白菜素的方法。本专利技术通过如下技术方案实现的。一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法，包括如下步骤：（1）将四方藤粉碎，过筛，按照质量体积比为1：8~20加入40~60%的乙醇溶液回流提取；（2）固液分离得到滤液，将滤液浓缩至其原体积的1/2~1/3，同时回收溶剂;（3）向浓缩液中加入大孔树脂静态吸附6~8小时，大孔树脂选自AB-8、D3520、D101；（4）将吸附后的大孔树脂上柱，依次先用蒸馏水、10%的乙醇溶液除去杂质；（5）用20%的乙醇溶液洗脱，收集20%乙醇洗脱液；（6）将20%乙醇洗脱液浓缩，得到岩白菜素粗品；（7）将岩白菜素粗品用乙醇重结晶得到岩白菜素纯品。上述步骤（2）中，固液分离的方法为过滤或离心分离，滤液浓缩至岩白菜素浓度2mg/mL。上述步骤（4）中,用2倍柱体积的蒸馏水和2倍柱体积的10%乙醇除去杂质。上述步骤（5）中,用7倍柱体积的20%乙醇洗脱。上述步骤（6）中,所述的浓缩方法为真空浓缩或膜浓缩。上述步骤（7）中,用95%的乙醇进行重结晶。本专利技术的优点在于：采用40~60%的酒精提取，具有绿色无毒、提取率高、成本低、易回收利用等优点；采用大孔树脂纯化和富集，具有吸附量大、可重复利用、易于产业化放大、成本低等优点，经过大孔树脂纯化后，可获得岩白菜纯度在80%以上的粗品；将大孔树脂纯化后是岩白菜素粗品，经过乙醇溶液重结晶便可获得满足作为原料药使用的岩白菜素纯品；本专利技术原料来源广泛，价格便宜，生产成本低，生产条件温和，对环境污染小。附图说明图1为本专利技术提取纯化工艺流程图；图2不同大孔树脂的静态饱和吸附率；图3不同大孔树脂的静态解吸率。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1将500g的四方藤粉末，加入50%乙醇溶液，使四方藤粉末的质量与乙醇的体积比为1:20，回流提取1次，每次2h，离心、过滤、弃去废渣收集得到滤液，将滤液浓缩，同时回收溶剂。将浓度为2.0mg/mL的浓缩液，按体积与大孔树脂质量为1:1的比例，加入AB-8大孔树脂中进行静态吸附，吸附时间为8h，然后上柱。先用2倍柱体积的蒸馏水和2倍柱体积的10%乙醇除去杂质，然后再用7倍柱体积20%乙醇溶液进行洗脱，收集20%乙醇洗脱部分。将洗脱液浓缩，得到岩白菜素粗品10.3g，95%乙醇重结晶后得到岩白菜素纯品8.9g。实施例2将1Kg的四方藤粉末，加入50%乙醇溶液，使四方藤粉末与乙醇的质量体积比为1:15，回流提取2次，每次2h，离心、过滤、弃去废渣收集得到滤液，将滤液浓缩，同时回收有机溶剂。将浓度为2.0mg/mL的浓缩液，按体积与大孔树脂质量为1:1的比例，加入D3520大孔树脂中进行静态吸附，吸附时间为8h，然后上柱。先用2倍柱体积的蒸馏水和2倍柱体积的10%乙醇除去杂质。然后再用7倍柱体积20%乙醇溶液进行洗脱，收集20%乙醇洗脱部分。将洗脱液浓缩，得到岩白菜素粗品20.5g，95%乙醇重结晶后得到岩白菜素纯品17.6g。实施例3将10Kg的四方藤粉末，加入60%乙醇溶液，使四方藤粉末与乙醇的质量体积比为1:10，回流提取3次，每次2h，离心、过滤、弃去废渣收集得到滤液，将滤液浓缩，同时回收有机溶剂。将浓度为2.0mg/mL的浓缩液，按体积与大孔树脂质量为1:1的比例，加入D101大孔树脂中进行静态吸附，吸附时间为8h，然后上柱。先用2倍柱体积的蒸馏水和2倍柱体积的10%乙醇除去杂质。然后再用20%乙醇溶液进行洗脱，收集20%乙醇洗脱部分。将洗脱液浓缩，得到岩白菜素粗品200.6g，95%乙醇重结晶后得到岩白菜素纯品169.7g。岩白菜素粗品的收率在2%左右，经过HPLC检测纯度均在80%以上，经过95%的乙醇重结晶后即可获得岩白菜素纯品，收率在1.7%左右，因不同产地、季节采收的四方藤中岩白菜素的含量差异较大，收率偏高、偏低均属正常现象。本法采用可重复利用的大孔树脂与重结晶结合的方法制备岩白菜素，具有操作简洁、成本低、易于产业化放大的优点。实施例4大孔树脂选型研究大孔树脂具有极性、弱极性、非极性等多种类型，在本专利技术中，专利技术人选择了LSA-700（极性）、LSA-700B（极性）、D941（极性）、AB-8（弱极性）、D3520（非极性）、D101（非极性）这7种大孔树脂作为考察对象，通过静态与动态吸附、解吸来确定适合用于纯化四方藤中岩白菜素的大孔树脂。静态吸附实验结果如图2所示，可见LSA-700、LSA-700B、AB-8、D101、D941、D3520六种大孔树脂在静态吸附24h后，均已接近饱和吸附，其静态吸附率均超过90%，其中AB-8、D10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将四方藤粉碎，过筛，按照质量体积比为1：8~20加入40~60%的乙醇溶液回流提取；（2）固液分离得到滤液，将滤液浓缩至其原体积的1/2~1/3，同时回收溶剂;（3）向浓缩液中加入大孔树脂静态吸附6~8小时，大孔树脂选自AB‑8、D3520、D101；（4）将吸附后的大孔树脂上柱，依次先用蒸馏水、10%的乙醇溶液除去杂质；（5）用20%的乙醇溶液洗脱，收集20%乙醇洗脱液；（6）将20%乙醇洗脱液浓缩，得到岩白菜素粗品；（7）将岩白菜素粗品用乙醇重结晶得到岩白菜素纯品。

【技术特征摘要】
1.一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将四方藤粉碎，过筛，按照质量体积比为1：8~20加入40~60%的乙醇溶液回流提取；（2）固液分离得到滤液，将滤液浓缩至其原体积的1/2~1/3，同时回收溶剂;（3）向浓缩液中加入大孔树脂静态吸附6~8小时，大孔树脂选自AB-8、D3520、D101；（4）将吸附后的大孔树脂上柱，用2倍柱体积的蒸馏水和2倍柱体积的10...

【专利技术属性】
技术研发人员：覃江克，罗培，林丹丹，李怡杰，杨瑞云，陈家念，唐煌，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：广西;45