在某些实施例中，本披露涉及呼吸道合胞病毒(RSV)的多核苷酸序列。在某些实施例中，本披露涉及包含在此披露的所希望的核酸序列和突变体的分离或重组的核酸和多肽。在某些实施例中，还提供包含在此披露的核酸和多肽的分离或重组的RSV(例如，减毒重组RSV)，还提供适合用作疫苗的包含这类核酸、多肽和RSV基因组的免疫原性组合物。还涵盖含有呈拷贝的核酸(例如，cDNA)形式的这些核酸和突变体的减毒或灭活的RSV。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】具有沉默突变的重组RSV、疫苗及其相关方法相关申请的交叉引用本申请要求2013年3月14日提交的美国临时申请号61/781，228和2013年10月14日提交的美国临时申请号61/890，500的优先权，两者均通过引用以其全文结合。背景呼吸道合胞病毒(RSV)导致下呼吸道感染。免疫功能低下的患者、早产儿和儿童尤其处于严重疾病的风险。RSV是婴儿中病毒性死亡的主要原因。RSV治疗集中于预防感染和改善呼吸。帕利珠单抗是可以预防性地给药的一种人源化单克隆抗体。帕利珠单抗在RSV感染之后是无效的，并且保护在治疗停止之后不久终止。疫苗目前不可用于RSV。候选减毒RSV疫苗由于在婴儿中的次最优免疫原性和导致针对不希望的野生型序列的遗传回复的次最优稳定性而已经失败。参见腾(Teng)，传染性病症一一药物靶标(Infect1usDisorders - Drug Targets)，2012，12 (2): 129-3。因此，需要发现为适当免疫源性的、足够稳定的且安全用于婴儿的一种减毒RSV疫苗。由于遗传密码的冗余性，单个氨基酸由密码子的多重序列编码，这些密码子有时被称为同义密码子。在不同物种中，同义密码子或多或少频繁地被使用，有时被称为密码子偏爱。将出现频率过低的同义密码子遗传工程化成一种基因的编码序列已显示导致降低的蛋白质翻译速率，而无蛋白质的氨基酸序列的变化。米勒(Mueller)等人报道通过密码子偏爱的变化进行病毒减毒。参见科学(Science)，2008，320:1784。还参见W0/2008121992、W0/2006042156、伯恩斯(Burns)等人，病毒学杂志(J Virology)，2006，80 (7):3259 以及米勒等人，病毒学杂志，2006，80 (19):9687ο卢昂戈(Luongo)等人报道通过反向遗传学提高一种候选减毒活呼吸道合胞病毒疫苗的遗传和表型稳定性。参见病毒学杂志，2012，86 (19): 10792。道丘(Dochow)等人报道副粘液病毒聚合酶蛋白中的独立结构域。生物化学杂志(J B1l Chem)，2012，287:6878 - 91。美国专利8，580, 270报道RSV F多肽序列。美国专利7，951，384报道它涵盖一种VLP RSV 疫苗。在此引用的参考文献并非对现有技术的承认。概述在某些实施例中，本披露涉及呼吸道合胞病毒(RSV)的多核苷酸序列。在某些实施例中，本披露涉及包含在此披露的所希望的核酸序列和突变体的分离或重组的核酸和多肽。在某些实施例中，还提供包含在此披露的核酸和多肽的分离或重组的RSV(例如，减毒重组RSV)，还提供适合用作疫苗的包含这类核酸、多肽和RSV基因组的免疫原性组合物。还涵盖含有呈拷贝的核酸(例如，cDNA)形式的这些核酸和突变体的减毒或灭活的RSV。在某些实施例中，本披露涉及分离的核酸、具有密码子去优化的重组呼吸道合胞病毒(RSV)、由其产生的疫苗以及与其相关的疫苗接种方法。在某些实施例中，重组RSV病毒包含A2株系的基因NSl、NS2、N、P、M、SH、G、F、M2、以及L，品系19，或其Long株系或变体。在某些实施例中，密码子去优化是在非结构基因NSl和NS2中并且任选地在一种基因G中且任选地在一种基因L中。在其他实施例中，基因SH被缺失。在其他实施例中，基因F被突变，例如，对应于RSV株系19F蛋白的残基557的一种I至V突变。在某些实施例中，本披露涉及编码去优化的基因NSl和/或NS2以及一种野生型人RSV或变体的任选地基因G和任选地基因L的分离的核酸，其中这些核苷酸被取代，这样使得用于产生Gly的密码子是GGT，用于产生Asp的密码子是GAT，用于产生Glu的密码子是GAA，用于产生His的密码子是CAT，用于产生Ile的密码子是ATA，用于产生Lys的密码子是AAA，用于产生Leu的密码子是CTA，用于产生Asn的密码子是AAT，用于产生Gln的密码子是CAA，用于产生Val的密码子是GTA，用于产生Tyr的密码子是TAT或其组合。在某些实施例中，分离的核酸中的一种基因进一步包含这些单独密码子中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或全部的一种组合。在某些实施例中，分离的核酸中的一种基因包含这些密码子中的至少20个、30个、40个或50个或更多个。在某些实施例中，本披露涉及如在此披露的分离的核酸，其中核苷酸被取代，这样使得用于产生Ala的密码子是GCG，用于产生Cys的密码子是TGT，用于产生Phe的密码子是TTT，用于产生Pro的密码子是CCG，用于产生Arg的密码子是CGT，用于产生Ser的密码子是TCG，或用于产生Thr的密码子是ACG或其组合。在某些实施例中，含有该核酸的一种基因包含这些单独密码子中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个或全部的一种组合。在某些实施例中，分离的核酸中的一种基因进一步包含这些密码子中的至少20个、30个、40个或50个或更多个。在某些实施例中，本披露涉及在此披露的核酸，这些核酸编码具有SEQ ID N0:5MGXiNx2Lsx3Ikx4Rlqnlx5X6Ndevallkitcyx7Dklix8Ltnalakax9Ihtiklngivfx1HvitssXiiX12CPX13Nx14ivvksnfttmpx15lx16nggyix17ex18x19elthcsqx20ngx21x22x23dnceikfsx24x25lx26dsx27mtx28yx29x3°QX31SX32LLGX33DLX34X35的 NS1，其中 X 1-X35是任何氨基酸或 X 1是 S 或 C ;X 2是 S 或 T ;X 3是 M或V ;x4是V或I ;X 5是F或L ;X 6是D或N ;X 7是T或A ;X 8是H、L或Q ;X 9是V或T ;X 1(]是V或 I ;Xn是 D 或 E ;X 12是 1、A 或 V ;X 13是 N 或 D ;X 14是 N 或 S ;X 15是 V、I 或 A ;X 16是 Q 或 R ;X17是W或任何氨基酸；x 18是M或L ;X 19是M或I ;X 2°是P或L ;X 21是L或V ;X 22是L、M或I ;X23是D或V ;X 24是K或R ;X 25是K或R ;X 26是S或任何氨基酸；X 27是T或V ;X 28是N或D ;X29是M或I ;X 3°是N或S ;X 31是L或I ;X 32是E或D ；X 33是F或L ；X 34是N或H ;并且X 35是P或S或缺失。在某些实施例中，本披露涉及在此披露的核酸，这些核酸编码RSV的NS1，如以NCBI 登录号 ΝΡ_044589.1、ΝΡ_056856.UP04544.UAEQ63513.UAFM55237.UAFV32554.1、Q86306.1、AFV32528.1、AFM55248.1、AFM95358.1、AFV32568.1、ACY68428.1、CBW45413.1、AC083290.UAFM55347.UCBW45433.UAEQ63459.UAFM55204.UAFV32572.UA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种编码野生型人RSV或变体的NS1和/或NS2的分离的重组核酸，其中核苷酸被取代，这样使得用于产生Gly的密码子是GGT，用于产生Asp的密码子是GAT，用于产生Glu的密码子是GAA，用于产生His的密码子是CAT，用于产生Ile的密码子是ATA，用于产生Lys的密码子是AAA，用于产生Leu的密码子是CTA，用于产生Asn的密码子是AAT，用于产生Gln的密码子是CAA，用于产生Val的密码子是GTA，或用于产生Tyr的密码子是TAT，或其组合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·L·摩尔，佳·孟，安妮·霍泰德，伊丽莎白·利陶尔，克里斯多佛·斯托巴特，
申请(专利权)人：爱默蕾大学，亚特兰大儿童医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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