天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)药物中的应用。本发明专利技术采用高脂饮食诱导的apoE-/- NAFLD模型，以辛伐他汀作为阳性对照药，给予天目琼花醇提物口服8周后，观察天目琼花醇提物对NAFLD的影响，并探索相应机制，结果显示，天目琼花醇提物明显改善了高脂诱导的肝组织病理学改变，减轻了肝细胞的损伤，降低了肝内脂质蓄积，抑制了肝内氧化应激反应。本发明专利技术既开发了天目琼花醇提物的新用途，又为治疗NAFLD提供了一条新途径。

【技术实现步骤摘要】
天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用
本专利技术涉及天目琼花应用领域，具体为天目琼花醇提物在治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是无过量饮酒史，但肝脏组织学病变与酒精性肝病相似的临床综合症，可发展为肝硬化和肝癌。近年来随着生活水平的提高，NAFLD的发病率逐年攀升，普通人群中约有14％至24％患有NAFLD，已成为最常见的肝脏疾患之一。目前，限制热量摄取和运动是治疗NAFLD唯一有效的手段，但对多数患者而言常难以坚持，因此，寻找有效的药物治疗NAFLD十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对目前非酒精性脂肪肝病缺乏高效又安全的药物，提供传统中药天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝病药物中的新用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用。所述醇提物的提取方法为：将天目琼花果实常温晒干，然后研磨成40目粗粉，取500g粉末于95%的乙醇中提取，所述粉末与乙醇的质量体积比为1：10，醇提物过滤后浓缩成浸膏，每克浸膏相当于3.49g生药，然后将浸膏用5%的羧甲基纤维素钠分别配制成2.5g生药/ml,5.0g生药/ml,10.0g生药/ml，4℃保存备用。天目琼花，为忍冬科(Caprifoliaceae)荚蒾属(ViburnumL.)落叶灌木，生于山坡、灌丛和路旁等地，原产于东北、华北等地。果实及枝叶均可入药，主要用于抗抽搐、抗痉挛、镇静及兴奋子宫。天目琼花果实营养丰富，其中氨基酸、维生素和微量元素含量较高。我国民间流传许多关于天目琼花的配方，用于治疗咳嗽、疮疥和腰腿痛等，因此可大力挖掘其药用价值。研究证实，天目琼花富含多种有效成分，黄酮和萜类物质作为其主要成分，具有显著的抗氧化和抗炎作用。本课题组研究证实：天目琼花富含槲皮素等黄酮类物质，并显著降低高脂饲养apoE-/-小鼠血脂。黄酮类物质可减轻ox-LDL所诱导的Raw264.7细胞内脂质蓄积，提示天目琼花可能具有调控脂质沉积功能。由于肝内脂质沉积、氧化应激和炎症反应与非酒精性脂肪肝密切相关，故推测天目琼花具有防治NAFLD的作用。经我科研团队证实天目琼花对NAFLD有较好的防治效果，明显减轻了肝细胞脂肪病变、坏死和损伤，降低了肝内脂质沉积和氧化应激水平。本专利技术开发了一种防治非酒精性脂肪肝病的新药物：天目琼花醇提物。本专利技术采用高脂饮食诱导的apoE-/-小鼠NAFLD模型，以辛伐他汀作为阳性对照药，给予天目琼花醇提物口服8周后，观察了它对NAFLD的影响，实验结果发现，天目琼花醇提物对防治非酒精性脂肪肝病有明显的效果。本专利技术还发现了天目琼花醇提物的新用途：治疗非酒精性脂肪肝病，进一步挖掘了天目琼花的生物活性，扩大了该中药的应用范围。天目琼花醇提物制备方法简单，成本较低，且毒副作用小，具有良好的治疗非酒精性脂肪肝病的优势。附图说明图1各组apoE-/-小鼠肝组织的HE染色切片和肝损伤情况(n=8)。在高脂喂饲的apoE-/-小鼠中，天目琼花醇提物改善了脂肪肝的病理学变化，减轻了肝损伤。A为HE染色显示各组小鼠肝损伤情况；B和C分别为天目琼花对小鼠肝组织ALT和AST的影响。**P<0.01，和对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，和模型组比较。图2在高脂喂饲的apoE-/-小鼠中，天目琼花醇提物调节了肝内胆固醇代谢，明显减轻了肝内脂质沉积(n=8)。口服天目琼花醇提物8周后，apoE-/-小鼠肝脏内的总胆固醇(TC)，游离胆固醇(FC)，胆固醇酯(CE)和甘油三酯(TG)水平通过酶法测定。A，肝脏TG水平；B，肝脏TC水平；C，肝脏FC水平；D，肝脏EC水平。**P<0.01，和对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，和模型组比较。图3在高脂喂饲的apoE-/-小鼠中，天目琼花醇提物降低了血清和肝脏氧化应激水平(n=8)。A，血清MDA含量；B，血清SOD活性；C，肝脏MDA含量；D，肝脏SOD活性。**P<0.01，和对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，和模型组比较。具体实施方式一，材料和方法（一）天目琼花醇提物的制备天目琼花果实采自泰山，由泰山医学院中药学资深专家李同德教授鉴定。天目琼花果实晒干后研磨，取粉末500g于95%的乙醇回流提取（m:v=1:10)。醇提物过滤后浓缩成浸膏(3.49g生药/g)，将浸膏用5%的羧甲基纤维素钠分别配制成2.5g生药/ml，5.0g生药/ml，10.0g生药/ml，4℃保存备用。（二）动物分组及处理40只雄性apoE-/-小鼠(18±22g,7周龄)购自北京华阜康生物科技有限公司，适应性饲养1周后随机分为5组：模型组（高脂饮食：10%猪油+10%蛋黄粉+0.30%胆固醇）；天目琼花低剂量组（高脂饮食+2.5g生药/kg/d）；天目琼花中剂量组（高脂饮食+5g生药/kg/d）；天目琼花高剂量组（高脂饮食+10g生药/kg/d）；辛伐他汀组（高脂饮食+辛伐他汀20mg/kg/d），另取C57BL/6J雄性小鼠8只作为对照组（普通饮食）。天目琼花和辛伐他汀均溶于5%的羧甲基纤维素钠中，其终浓度分别为天目琼花2.5g生药/ml，5.0g生药/ml，10.0g生药/ml和辛伐他汀20.0g生药/ml，药物拌于饲料中喂饲8周。8周后，动物禁食12小时，通过盐酸氯胺酮静脉注射全麻后处死。心脏穿刺取血并离心出血清。肝脏取出后立刻用冰生理盐水清洗，一部分立即放于−80℃保存备用，另一部分放于10%的甲醛溶液中固定进行组织病理学分析。（三）血脂分析天目琼花或辛伐他汀喂饲8周后，通过酶法(Biosino)测定血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白（LDL-C)和甘油三酯(TG)。（四）血浆与肝脏中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性分析血浆ALT、AST的活性反映了肝细胞损伤的程度，根据试剂说明书（南京建成科技有限公司）使用自动生化分析仪(7600-020，Hitachi)检测血浆与肝脏中的ALT和AST。（五）肝组织病理学分析（HE染色）新鲜的肝组织放于10%的甲醛溶液中固定后，进行常规组织学处理，然后石蜡包埋。石蜡切片（5μm）后用苏木素和伊红染色（HE染色）进行组织病理学分析。（六）肝脏脂质含量分析为检测肝脏中胆固醇和甘油三酯的含量，肝组织被匀浆，以1000×g的速度离心15分钟后，取上清液进行分析。肝脏总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、甘油三酯(TG)、胆固醇酯(CE)的浓度通过酶法（ApplygenTechnologiesInc.）检测，CE=TC－FC。（七）血清与肝脏氧化应激水平检测氧化应激是非酒精性脂肪肝发生发展的重要因素，其水平可通过脂质过氧化产物丙二醛（MDA）反映，同时活性氧的毒性作用可被抗氧化剂如超氧化物歧化酶（SOD）拮抗。在此，将血清与肝脏内MDA水平、SOD活性通过相应的试剂盒（南京建成科技有限公司）进行检测。(八）肝脏内诱导型NO合酶（iNOS）活性和NO水平的检测大量研究显示，非酒精性脂肪肝中iNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.天目琼花醇提物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述醇提物的提取方法为：将天目琼花果实常温晒干，然后研磨成40目粗粉，取500g粉末于95%的乙醇中提取，所述粉末与乙醇的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，秦树存，张磊，郭守东，庞晓飞，宋园园，
申请(专利权)人：泰山医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37