一种异叶青兰总多酚的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种异叶青兰总多酚的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴提取：异叶青兰全草粉末经醇提、减压浓缩，即得异叶青兰乙醇提取物；⑵除色素：所述异叶青兰乙醇提取物溶解后萃取得到水部位萃取液；⑶粗制：所述水部位萃取液经萃取、减压浓缩，即得异叶青兰总多酚粗品；⑷精制：所述异叶青兰总多酚粗品溶解成混悬液，并用0.5mol/L的HCl溶液将其调至pH为3~4后，采用湿法上样于处理好的大孔树脂层析柱中洗脱，收集50~70%的乙醇水洗脱液；所述50~70%的乙醇水洗脱液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚精制品。本发明专利技术工艺简单、成本低，且所得的异叶青兰总多酚具有很好的抗氧化作用。

【技术实现步骤摘要】
一种异叶青兰总多酚的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种总多酚的制备方法，尤其涉及一种异叶青兰总多酚的制备方法及其应用。
技术介绍
异叶青兰（DracocephalumheterophyllumBenth）系唇形科（Labiatae）青兰属（Dracocephalum）植物，主要分布于亚洲温带。该植物在民间被广泛应用，具有平肝、清热、治疗高血压、淋巴结炎、肺热咳嗽的作用。现代研究表明异叶青兰中的化学成分主要包括苯丙素类、黄酮类和萜类。至今未见有关异叶青兰多酚类化合物的研究报道。研究表明：自由基的强氧化作用可导致基因突变、细胞损伤、色素形成、组织硬化。人体衰老、心脑血管疾病、糖尿病、肝硬化、炎症、癌症、息肉、肌瘤等80余种疾病都与体内氧化形成自由基密切相关。另外食物的变质、腐烂等也与氧化反应密切相关。因此抗氧化剂成为食品、药品及保健品领域的一个重要的研究内容。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、成本低的异叶青兰总多酚的制备方法。本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供该异叶青兰总多酚的应用。为解决上述问题，本专利技术所述的一种异叶青兰总多酚的制备方法，包括以下步骤：⑴提取：异叶青兰全草粉末用其质量5~20倍且体积浓度为50~90%的乙醇水溶液在50~70℃温度下回流提取1~3次，每次3~5h，合并得到提取液，该提取液经减压浓缩，即得异叶青兰乙醇提取物；⑵除色素：所述异叶青兰乙醇提取物用其质量30~50倍的蒸馏水溶解后加入与溶解液等体积的石油醚，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，弃去有色素的石油醚部位萃取液，得到水部位萃取液；⑶粗制：所述水部位萃取液中加入等体积的乙酸乙酯，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，合并得到乙酸乙酯部位萃取液，该乙酸乙酯部位萃取液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚粗品；⑷精制：所述异叶青兰总多酚粗品用其质量5~10倍的蒸馏水溶解成混悬液，并用0.5mol/L的HCl溶液将其调至pH为3~4后，采用湿法上样于处理好的大孔树脂层析柱中，先用2~3倍柱体积的浓度为20%的乙醇水溶液洗脱，以除去多糖及其他杂质；然后用50~70%的乙醇水溶液洗脱，收集50~70%的乙醇水洗脱液；所述50~70%的乙醇水洗脱液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚精制品。所述步骤⑴中异叶青兰全草粉末是指将采自青海省海北州、果洛州、玉树州、海东地区的异叶青兰经阴干粉碎后，过40~60目筛所得的粉末。所述步骤⑴、步骤⑶、步骤⑷中减压浓缩的条件均是指温度为50~70℃、压力为0.05~0.07MPa。所述步骤⑷中大孔树脂层析柱是指NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂、D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、HPD-500型大孔吸附树脂中的一种，该大孔树脂层析柱尺寸为80mm~100mm×100cm~200cm。所述步骤⑷中上样流速为1~2Bv/h。所述步骤⑷中洗脱流速为3~5Bv/h。如上所述的一种异叶青兰总多酚的制备方法制得的异叶青兰总多酚作为抗氧化剂在制备抗氧化药物或保健食品中的应用，其特征在于：该异叶青兰总多酚作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗氧化药用制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可接受的任何载体制成各类保健类食品。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：1、本专利技术采用乙醇水溶液回流提取，操作简便，提取率高，乙醇可回收重复利用，提取成本低。2、本专利技术采用石油醚萃取除色素，溶剂价格低廉，易于获取，且溶剂可以重复利用，易于规模化生产。3、本专利技术采用液液分配萃取对异叶青兰总多酚进行富集，富集效率高，杂质少，且成本低廉。4、本专利技术采用大孔树脂层析柱对异叶青兰总多酚进行纯化，大孔树脂可再生重复利用，进一步降低了制备成本，且所用大孔树脂对总多酚的纯化效果好，所得总多酚纯度高。5、本专利技术具有良好的稳定性和重复性，每批异叶青兰浸膏提取物的得率可达20%~30%，异叶青兰总多酚精制品的总多酚含量可达到60%以上，为异叶青兰总多酚工业化生产以及相关健康产品的开发提供科学依据。6、本专利技术所获得的异叶青兰总多酚经测试，具有很好的抗氧化作用。⑴异叶青兰总多酚清除DPPH自由基的活性：DPPH法是体外检测抗氧化剂清除自由基最常见的方法。该方法的基本原理是DPPH在溶液中生成一个稳定的含氮自由基，且该溶液呈典型的紫色在波长517nm处具有最大的吸收光谱。当DPPH溶液中加入抗氧化剂时，由于其自由基清除作用使DPPH紫色消退导致吸收光谱强度减小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，以此评价抗氧化剂的抗氧化能力。即抗氧化剂的清除能力越强，吸光度越小，其抗氧化能力越强。异叶青兰总多酚清除DPPH自由基实验以α-生育酚、BHT、BHA作为阳性对照，以无水乙醇加DPPH作为阴性对照，以无水乙醇作为空白，在试管中分别加入2mL待测样品和2mLDPPH溶液，在室温下暗处放置30min后，在517nm处测量吸光度值（A）。按照下列公式计算DPPH自由基的清除率（%）：DPPH自由基清除率（%）=（A阴性对照-A待测样品）/A阴性对照×100%结论：50ug/mL的异叶青兰总多酚、α-生育酚、BHT、BHA对于DPPH自由基的清除率分别为88.8%、81.63%、57.35%、80.35%（参见图1）。⑵异叶青兰总多酚清除ABTS自由基的活性：ABTS法测定总抗氧化能力的原理是ABTS在氧化剂K2S2O8作用下氧化成绿色的ABTS▪+自由基，ABTS▪+自由基在734nm下具有最大吸收值。在有自由基清除剂存在的情况下，ABTS▪+自由基会被捕捉，在最大吸收波长下的吸光度值会降低，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，以此评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用清除率来表示，清除率越大，抗氧化性越强。异叶青兰总多酚清除ABTS自由基实验以α-生育酚、BHT、BHA作为阳性对照，以无水乙醇加ABTS作为阴性对照，以无水乙醇作为空白，在试管中加入1mL待测样品和4mLABTS▪+工作液，振摇均匀后，静置6min，在734nm处测量实验组和控制组的吸光度值，按照下列公式计算ABTS自由基的清除率（%）：ABTS自由基清除率（%）=（A阴性对照-A待测样品）/A阴性对照×100%结论：100ug/mL的异叶青兰总多酚、α-生育酚、BHT、BHA对于ABTS自由基的清除率分别为99.3%、99.56%、93.07%、99.56%。异叶青兰总多酚对于ABTS自由基具有较好的清除作用（参见图2）。⑶异叶青兰总多酚Fe3+离子还原能力测定：基于氧化还原反应的比色法，在低pH溶液中，Fe3+-TPTZ（Fe3+-三吡啶三嗪）被抗氧化剂还原成Fe2+-TPTZ，使反应液变成深蓝色，在593nm处有最大光吸收，通过测定样品吸光度的变化来衡量其抗氧化能力。吸光值愈高表示样品的还原力越强。异叶青兰总多酚Fe3+离子还原能力测定实验以α-生育酚、BHT、BHA为阳性对照，在3mLFRAP工作液中加入100uL不同浓度的样品溶液，在室温下反应10min后，测定溶液在波长593nm处的吸光度值。以FeSO4为标准物质绘制标准曲线，样品的抗氧化能力以FRAP值表示：1FRAP单位=1mmol/LFeSO4，即样品的抗氧化能力相当于F本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种异叶青兰总多酚的制备方法，包括以下步骤：⑴提取：异叶青兰全草粉末用其质量5~20倍且体积浓度为50~90%的乙醇水溶液在50~70℃温度下回流提取1~3次，每次3~5h，合并得到提取液，该提取液经减压浓缩，即得异叶青兰乙醇提取物；⑵除色素：所述异叶青兰乙醇提取物用其质量30~50倍的蒸馏水溶解后加入与溶解液等体积的石油醚，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，弃去有色素的石油醚部位萃取液，得到水部位萃取液；⑶粗制：所述水部位萃取液中加入等体积的乙酸乙酯，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，合并得到乙酸乙酯部位萃取液，该乙酸乙酯部位萃取液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚粗品；⑷精制：所述异叶青兰总多酚粗品用其质量5~10倍的蒸馏水溶解成混悬液，并用0.5mol/L的HCl溶液将其调至pH为3~4后，采用湿法上样于处理好的大孔树脂层析柱中，先用2~3倍柱体积的浓度为20%的乙醇水溶液洗脱，以除去多糖及其他杂质；然后用50~70%的乙醇水溶液洗脱，收集50~70%的乙醇水洗脱液；所述50~70%的乙醇水洗脱液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚精制品。

【技术特征摘要】
1.一种异叶青兰总多酚的制备方法，包括以下步骤：⑴提取：异叶青兰全草粉末用其质量5~20倍且体积浓度为50~90%的乙醇水溶液在50~70℃温度下回流提取1~3次，每次3~5h，合并得到提取液，该提取液经减压浓缩，即得异叶青兰乙醇提取物；所述异叶青兰全草粉末是指将采自青海省海北州、果洛州、玉树州、海东地区的异叶青兰经阴干粉碎后，过40~60目筛所得的粉末；⑵除色素：所述异叶青兰乙醇提取物用其质量30~50倍的蒸馏水溶解后加入与溶解液等体积的石油醚，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，弃去有色素的石油醚部位萃取液，得到水部位萃取液；⑶粗制：所述水部位萃取液中加入等体积的乙酸乙酯，在室温下萃取1~3次，每次3~5h，合并得到乙酸乙酯部位萃取液，该乙酸乙酯部位萃取液经减压浓缩，即得异叶青兰总多酚粗品；⑷精制：所述异叶青兰总多酚粗品用其质量5~10倍的蒸馏水溶解成混悬液，并用0.5mol/L的HCl溶液将其调至pH为3~4后，采用湿法上样于处理好的大孔树脂层析柱中，先用2~3倍柱体积的浓度为20%的乙醇水溶液洗脱，以除去多糖及其他杂质；然后用50~70%的乙醇水...

【专利技术属性】
技术研发人员：王启兰，史强强，党军，张莉，陶燕铎，王蒲，卢晓华，郑威，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海;63