血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法，属于柱色谱法领域。本发明专利技术将血府逐瘀汤粉末或胶囊内容物和对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析。色谱条件为：以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：280nm，柱温：30～50℃，流速：0.3～0.5mL·min-1，进样量：2μL。分析血府逐瘀汤和胶囊指纹图谱信息共获得30个共有峰，以野漆树苷为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积，再通过标准品比对的方法，鉴定了16个共有峰。本发明专利技术方法全面、快速、可靠，通过该方法获得比较全面的多种成分的指纹图谱信息，从而为血府逐瘀汤及胶囊质量控制提供参考依据。

【技术实现步骤摘要】
血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法
本专利技术属于柱色谱法领域，具体是一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法。
技术介绍
指纹图谱是建立在中药化学成分研究的基础上，通过多种分析技术对中药复杂体系进行系统研究，从而表征药品质量的一种方法。中药指纹图谱研究从药材的生产、粗加工、中间体、成品等各个方面开展相似性和相关性分析，发现质量的变异和缺陷，从而全面、特异地控制中药的质量，特别适用于中药及复方制剂复杂体系的质量控制研究。中药及中药制剂组方药味多，成分复杂，很难用其中一个或几个有效成分的含量来控制中药制剂的质量。截至目前，在中药的生产和流通中，中药产品质量控制主要通过单成分定量，并不能对产品的质量进行全面控制。因此建立一种综合评价中药质量的方法是必然趋势。血府逐瘀汤源自清代王清任的《医林改错》，是诸活血化瘀方中最具代表性的经方，具有活血化瘀，行气止痛的功效，临床应用广泛。原方由当归、地黄、桃仁、枳壳、牛膝、赤芍、柴胡、甘草、川芎、桔梗、红花十一味药组成，是在桃红四物汤（活血化瘀而养血）、四逆散（行气和血而舒肝）基础上加桔梗、牛膝而成。方中当归、桃仁、红花活血化瘀兼和血，为君药；赤芍、川芎增强君药活血化瘀作用，地黄滋阴养血为臣药；桔梗能载药上行入血府（胸中）；柴胡疏肝解郁，升举清阳，与枳壳配伍，理气散结之力尤著；牛膝行血逐瘀，引瘀血下行，同为佐药；甘草缓急和中，为使药；全方体现了血药与气药的配伍、升药与降药的有机结合。血府逐瘀汤作为经典名方，临床疗效确切，基于血府逐瘀汤研究开发了多个现代制剂，包括血府逐瘀片、泡腾片、丸、颗粒、口服液、胶囊、软胶囊等剂型。
技术实现思路
本专利技术就是为了解决现有技术不能全面、科学评价血府逐瘀汤及胶囊的质量的问题，所提出的一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法。本专利技术是按照以下
技术实现思路
实现的。一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC(超高效液相色谱)指纹图谱检测方法，包括以下步骤：a．对照品溶液的制备分别称取芍药苷、野漆树苷、芍药内酯苷、甘草素、柚皮素、竹节参皂苷IVa、柚皮苷、没食子酸、甘草苷、甘草酸、绿原酸、蜕皮甾醇、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、羟基红花黄色素A对照品并溶于50%甲醇水溶液，制成1mg•mL-1的对照品储备液；取各对照品储备液100μL，置于2mL棕色量瓶中，加入50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液；b．供试品溶液的制备分别取血府逐瘀汤粉末或胶囊内容物，用50%甲醇水溶液溶解，超声处理后，再加入50%甲醇水溶液，制成0.02g·mL-1的供试品溶液；c.色谱条件色谱柱：2.1×100mm，1.7μm，ACQUITYUPLC®BEHC18；流动相以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸水溶液为流动相B，其体积比为流动相A占3～97%，流动相B占97%～3%，进行梯度洗脱；检测波长：280nm，柱温：30～50℃，流速：0.3～0.5mL·min-1，进样量：2μL；d.将步骤a和b所制备的溶液按照步骤c的色谱条件进行超高效液相色谱测定。本专利技术获得了如下有益效果。本专利技术有效的解决了现有技术不能全面、科学评价血府逐瘀汤及胶囊质量的问题。本专利技术建立的血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱的检测方法符合指纹图谱方法学研究要求，进一步阐明了血府逐瘀汤及胶囊的化学物质基础；本专利技术所述方法可用于血府逐瘀汤及胶囊的质量控制与评价，有效的保证了血府逐瘀产品的质量，对血府逐瘀汤及胶囊的质量控制具有重要意义。本专利技术所述方法精密度高、重现性及稳定性好，对血府逐瘀汤及胶囊质量进行了全面评价，具有广阔的应用前景。附图说明图1是本专利技术血府逐瘀汤对照指纹图谱；图2是本专利技术标准品色谱图；图3是本专利技术3批血府逐瘀汤的指纹图谱；图4是本专利技术13批血府逐瘀胶囊的指纹图谱。具体实施方式下面结合附图与实施例对本专利技术做进一步说明。本专利技术所述血府逐瘀胶囊，由天津宏仁堂药业有限公司提供；本专利技术所述血府逐瘀汤，由本实验室自制。具体的制备方法如下：血府逐瘀汤：当归9克、生地9克、桃仁12克、枳壳6克、牛膝9克、赤芍6克、柴胡3克、甘草6克、川芎4.5克、桔梗4.5克、红花9克，8倍量蒸馏水浸泡1小时，加热回流提取2小时，冷却后倒出提取液；药渣加8倍量蒸馏水再加热回流提取2小时；合并两次提取液，减压浓缩得浸膏；浸膏40℃真空干燥得血府逐瘀汤干浸膏，粉碎，即可。血府逐瘀胶囊：当归81克、生地81克、桃仁108克、枳壳54克、牛膝81克、赤芍54克、柴胡27克、甘草27克、川芎40克、桔梗40克、红花81克，以上十一味，取桃仁半量，当归、赤芍、麸炒枳壳、川芎、柴胡，粉碎成细粉，过筛，混匀；其余红花等五味及剩余桃仁加水煎煮三次，煎液滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，与上述粉末混匀，制成颗粒，干燥，粉碎，过筛，装入胶囊，制成1000粒即得。实施例1：血府逐瘀汤指纹图谱测定方法的建立1.1仪器ACQUITY超高效液相色谱仪（美国Waters公司，包括WatersACQUITY二元泵，DAD检测器，自动进样器，在线脱气机，柱温箱，Empower色谱工作站）；超纯水仪（Milli-Q，美国Millipore公司）；Vortex-5涡旋振荡器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；J25低温高速离心机（美国ThermoForma公司）；十万分之一天平（METTLERTOLEDOXS205，瑞士METTLER公司）；万分之一天平（METTLERTOLEDOAL204，瑞士METTLER公司）；SCIENTZSB25-12DTN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；JSP-200粉粹机（浙江永康金穗机械制造厂）。1.2试药与试剂样品：血府逐瘀胶囊：天津宏仁堂药业有限公司，批号为E03051、E03052、E03053、E03054、E03055、E03056、E03057、E03058、E03059、E03060、E03061、E03062、E03063。血府逐瘀汤：实验室自制。标准品：芍药苷（RS0453）、野漆树苷（THB-TS40S）、芍药内酯苷（RS0042）、柚皮素（THB-2S340）、竹节参皂苷IVa（THB-1S375）购自于天津拓海生物科技有限公司；柚皮苷（110722-200610）、没食子酸（110831-200803）、甘草苷（111610-201106）、甘草酸（110731-201317）购自中国食品药品检定研究院；绿原酸（WOZ-4-2）、蜕皮甾醇、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、甘草素（纯度≥98%）购自天津中新药业研究中心；羟基红花黄色素A（Q-008-14073）购自成都瑞芬思生物科技有限公司。试剂：乙腈（美国Sigma-Aldrich有限公司），甲酸（天津市大茂化学试剂厂），纯净水（实验室自制）。1.3供试品溶液的制备取血府逐瘀汤粉末适量，研细，取约0.5g，精密称定，置于25mL棕色量瓶中，加入50%甲醇水溶液适量，超声20min，取出，放凉，加入50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，即可。1.4对照品溶液的制备：取芍药苷、野漆树苷、芍药内酯苷、甘草素、柚皮素、竹节参皂苷IVa、柚皮苷、没食子酸、甘草苷、甘草酸、绿原酸、蜕皮甾醇、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、羟基红花黄色素A对照品适量，精密本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：包括以下步骤：a．对照品溶液的制备分别称取芍药苷、野漆树苷、芍药内酯苷、甘草素、柚皮素、竹节参皂苷IVa、柚皮苷、没食子酸、甘草苷、甘草酸、绿原酸、蜕皮甾醇、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、羟基红花黄色素A对照品并溶于50%甲醇水溶液，制成1 mg•mL‑1的对照品储备液；取各对照品储备液100 μL，置于2 mL棕色量瓶中，加入50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液;b．供试品溶液的制备分别取血府逐瘀汤粉末或胶囊内容物，用50%甲醇水溶液溶解，超声处理后，再加入50%甲醇水溶液，制成0.02g·mL‑1的供试品溶液；c. 色谱条件色谱柱：2.1×100 mm，1.7 μm ，ACQUITY UPLC® BEH C18；流动相以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸水溶液为流动相B，其体积比为流动相A占3～97%，流动相B占97%～3%，进行梯度洗脱；检测波长：280 nm，柱温：30～50℃，流速：0.3～0.5 mL·min‑1，进样量：2 μL；d. 将步骤a和b所制备的溶液按照步骤c的色谱条件进行超高效液相色谱测定。

【技术特征摘要】
1.一种血府逐瘀汤及胶囊的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：包括以下步骤：a．对照品溶液的制备分别称取芍药苷、野漆树苷、芍药内酯苷、甘草素、柚皮素、竹节参皂苷IVa、柚皮苷、没食子酸、甘草苷、甘草酸、绿原酸、蜕皮甾醇、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、羟基红花黄色素A对照品并溶于50%甲醇水溶液，制成1mg•mL-1的对照品储备液；取各对照品储备液100μL，置于2mL棕色量瓶中，加入50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液;b．供试品溶液的制备分别取血府逐瘀汤粉末或胶囊内容物，用50%甲醇水溶液溶解，超声处理后，再加入50%甲醇水溶液，制成0.02g·mL-1的供试品溶液；c.色谱条件色谱柱：2.1×100mm，1.7μm，ACQUITYUPLC®BEH...

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃飞，朱晓晶，杨龙，杨欣莹，江振作，张蕾，杨静，
申请(专利权)人：天津宏仁堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12