抗菌肽制造技术

技术编号:12516670 阅读:145 留言:0更新日期:2015-12-16 14:52
本发明专利技术涉及一种抗菌肽,该抗菌肽的序列为Phe-Lys-X1-Gly-Gly-Phe-X2-Lys-Lys-X3-Trp-Arg-Ser-X4-X5-Ala,其中,X1、X2、X3、X4和X5各自独立地为Leu、Ile或Val,该抗菌肽具有广谱的抗菌特性,不仅活性更高,而且稳定不易失活。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗菌肽,具体涉及一种具有16个氨基酸的抗菌肽。
技术介绍
抗菌肽是一类具有抗菌活性的小分子蛋白。自瑞典科学家Boman等从蚕蛹身上分 离得到第一个抗菌肽天蚕素以来,人们又在昆虫、两栖类、水产动物,以及包括人在内的哺 乳动物甚至植物及细菌等广泛的生物谱中发现了 1〇〇〇余种抗菌肽。内源性的抗菌肽在生 物体内经诱导而合成,在抵抗病原入侵方面起着重要的作用,是生物体非特异性免疫的重 要组成部分。 抗菌肽的抗菌活性具有选择性高、杀菌快速、作用广谱和难以形成抗性的特点,这 使其成为研究和开发新型抗生素的理想候选。目前,从生物体内提取天然抗菌肽是抗菌肽 产品开发的主要思路,但天然抗菌肽具有结构不稳定,易失活等缺点。
技术实现思路
本专利技术提供了一种抗菌肽,其来源于一种名为Scorpion Androctonus的蝎子所分 泌的毒性蛋白Mauriporin,该毒性蛋白质含有48个氨基酸。我们选择性地缩短了该毒性蛋 白的肽链长度并优化了序列,最终得到了本专利技术的抗菌肽。本专利技术抗菌肽具有广谱的抗菌 特性,不仅活性更高,而且稳定不易失活。 根据本专利技术的一个方面,本专利技术涉及一种抗菌肽,所述抗菌肽的序列为:Phe-Lys-XfGly-Gly-Phe-Xz-Lys-Lys-Xu-Trp-Arg-Ser-XfXs-Ala,其中,X!、X 2、X3、X4和 X 5各自独立 地为1^11、116或¥&1;优选3 1和乂2各自独立地为116,父334和乂5各自独立地为1^11 ;在优 选的技术方案中,所述抗菌肽的序列为Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala ;Phe-Lys-Val-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Val-Trp-Arg-Ser-Ile_V al-Ala ;Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Val-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Val-Leu_Ala ;或 Phe -Lys-Leu-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-Lys-Ile-Trp-Arg-Ser-Leu-Ile-Ala〇 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术涉及一种组合物,含有本专利技术的抗菌肽或其任 意混合物,所述组合物包括但不限于洗手液、洗面奶、洗发香波、沐浴液、女性护理洗液、漱 口水、牙膏、香皂、化妆品、洗衣皂、洗衣液、洗涤灵、消毒液或洁厕液等。 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术涉及一种织物,含有本专利技术的抗菌肽或其任意 混合物,所述织物包括但不限于衣物、床上用品、消毒纸巾、敷料或绷带等。 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术涉及一种卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿 垫,含有本专利技术的抗菌肽或其任意混合物。 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术的抗菌肽可以作为饲料添加剂,从而本专利技术涉 及一种饲料,含有本专利技术的抗菌肽或其任意混合物。 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术涉及一种用于预防和/或治疗细菌感染的药物 组合物,含有预防和/或治疗有效量的本专利技术的抗菌肽或其任意混合物。本专利技术进一步涉 及本专利技术的抗菌肽或其任意混合物在制备用于预防和/或治疗细菌感染的药物中的应用。 根据本专利技术的另一个方面,本专利技术涉及本专利技术的抗菌肽或其任意混合物在制备各 种具有抑菌和/或杀菌性能的产品中的应用。这些产品包括但不限于洗手液、洗面奶、洗发 香波、沐浴液、女性护理洗液、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、洗衣皂、洗衣液、洗涤灵、消毒液、 洁厕液、衣物、床上用品、消毒纸巾、敷料、绷带、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、成人用尿垫或饲 料等等。总之,本专利技术的抗菌肽可以应用于一切需要杀菌或者抑菌的产品中。 本领域技术人员知晓在本专利技术的各种组合物、饲料和药物组合物中,可进一步含 有常规的各种辅料和/或活性成分,并且能够根据本领域的常规方法确定本专利技术的抗菌肽 以及各种辅料和/或活性成分的合适的含量。本领域技术人员同样知晓如何制备含有本 专利技术的抗菌肽的织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿垫,包括但不限于将织物、卫生 巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿垫,或者制造织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿 垫的材料在含有本专利技术抗菌肽的溶液中浸渍。 本专利技术的抗菌肽可以采用本领域技术人员已知的方法合成,例如固相合成,并采 用本领域技术人员已知的方法进行纯化,例如高效液相色谱法。 本专利技术的抗菌肽抗菌谱广,抗菌活性更高,而且稳定不易失活。【附图说明】 图1为本专利技术抗菌肽的高效液相色谱图。 图2为本专利技术抗菌肽的质谱图。 具体实施方案 为了更好地理解本专利技术,下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步的详细说明, 但本领域技术人员了解,下述实施例不是对本专利技术保护范围的限制,任何在本专利技术基础上 做出的改变和变化,都在本专利技术的保护范围之内。 实施例1抗菌肽的固相合成、切割、纯化及鉴定 1. 1抗菌肽的固相合成 本专利技术利用多肽合成仪采用固相合成法合成抗菌肽: 1)以DMF为溶剂,各种a -氨基被Fmoc保护的氨基酸溶液的浓度为0. 25M,HBTU 溶液、HOBt溶液的浓度为0. 33M,哌啶溶液的浓度为200ml/L,DIEA溶液的浓度为174. 2ml/ L〇 2)称取0? 05mmol Fmoc-Ala-Wang树脂(官能团含量0? 33mmol/g)置于固相反 应器中,加8ml DCM溶胀过夜,减压抽去溶剂。加入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml,室温 下反应5min,抽干;再加入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml,室温下反应20min,抽干;依次 用8ml的DMF洗涤3次,每次lmin。准确量取0. 2mmol的a -氨基被Fmoc保护的氨基酸 溶液、0. 2mmol的HBTU溶液、0. 195mmol的HOBt溶液加入固相反应器中,反应5min后加入 0. 4mmol的DIEA,室温下氮气气泡振荡反应2h。依次用8ml的DMF洗涤3次,每次lmin。加 入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml,室温下反应5min,抽干;再加入浓度为200ml/L的哌啶 溶液8ml,室温下反应20min,抽干;依次以8ml的DMF洗涤3次,每次lmin。按照如上步骤 从肽链的碳端到氮端逐一连续合成了本专利技术的抗菌肽Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys -Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala (多肽 1) 〇 3)待合成完毕后,分别用DMF和DCM先后清洗连有多肽链的树脂,后将树脂至于真 空干燥箱内干燥备用。 1.2抗菌肽的切割 1)待树脂干燥后,用刮刀将树脂尽量打散,转移至鸡心瓶中,加入磁子,在冰水浴 下缓慢加入用于脱除树脂的切割液l〇ml (切割液中TFA :纯水:苯甲硫醚:苯酚:乙二硫醇 比例为82. 5:5:5:5:2. 5),冰水浴下反应2h。 2)待反应完成,将反应液连同树脂一同转移至过滤器中,用水栗抽滤,将得到的滤 液置于圆底烧瓶中,并在氮气流下吹干。 3)待圆底烧瓶中的样品吹至粘稠,撤下氮气管,在圆底烧瓶中倒入约20ml的4°C 冰乙醚,混合后充分打散,然后于冷冻离心机内,4°C下8000r/min离心15min,弃上清,再于本文档来自技高网...
抗菌肽

【技术保护点】
一种抗菌肽,其特征在于,所述抗菌肽的序列为:Phe‑Lys‑X1‑Gly‑Gly‑Phe‑X2‑Lys‑Lys‑X3‑Trp‑Arg‑Ser‑X4‑X5‑Ala,其中,X1、X2、X3、X4和X5各自独立地为Leu、Ile或Val;优选,X1和X2各自独立地为Ile,X3、X4和X5各自独立地为Leu;更优选所述抗菌肽的序列为:Phe‑Lys‑Ile‑Gly‑Gly‑Phe‑Ile‑Lys‑Lys‑Leu‑Trp‑Arg‑Ser‑Leu‑Leu‑Ala;Phe‑Lys‑Val‑Gly‑Gly‑Phe‑Ile‑Lys‑Lys‑Val‑Trp‑Arg‑Ser‑Ile‑Val‑Ala;Phe‑Lys‑Ile‑Gly‑Gly‑Phe‑Val‑Lys‑Lys‑Leu‑Trp‑Arg‑Ser‑Val‑Leu‑Ala;或Phe‑Lys‑Leu‑Gly‑Gly‑Phe‑Leu‑Lys‑Lys‑Ile‑Trp‑Arg‑Ser‑Leu‑Ile‑Ala。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:罗施中贾丽丽周希蕊田希博刘竹青
申请(专利权)人:北京化工大学
类型:发明
国别省市:北京;11

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