本发明专利技术属于食品检测方法技术领域，尤其涉及一种蜂蜜中咖啡因的检测方法。本发明专利技术采用壬酸作为萃取剂，壬酸极性与咖啡因极为相似，能够极大的提高萃取回收率；同时壬酸的密度比水的密度小，更加方便的分离获取萃取剂；本发明专利技术采用涡旋、超声混合萃取技术，能够保证在充分混匀的基础上，更加充分的提取样品中的咖啡因；本方法对检测人员无需接触高毒有机试剂，对人体健康安全有保障，同时对环境友好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品检测方法
，尤其涉及。
技术介绍
蜂蜜，是昆虫蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中酿制的蜜，对人体具有 护肤美容、抗菌消炎、促进组织再生、促进消化、提高免疫力、促进长寿、改善睡眠、保肝作 用、抗疲劳、促进儿童生长发育、保护心血管、润肺止咳等功效。但目前有报道称蜂蜜中含有 咖啡因等有害成分，开发出高效、快捷的检测方法，有助于鉴定蜂蜜的质量，确保食用者的 安全。 现有的检测方法是：将蜂蜜用氢氧化钠水溶液稀释后，加入三氯甲烷涡旋提取，离 心，收集、过滤提取剂，利用高效液相色谱检测。这个方法存在的缺点在于：1、使用的三氯甲 烷和氢氧化钠对人体均具有较大的毒性，同时排放到环境后也会造成很大污染；2、采用涡 旋提取，提取不够充分，萃取效果不好，回收率低；3、操作步骤繁琐，对检测人员技术要求较 高；4、检测过程需要的样品量和有机试剂量均较大，检测经济型差。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术存在的不足，提供。 本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：，步骤 如下： (1)将2. 50g蜂蜜溶于20mL、70-80°C的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程 中颠倒混匀2-3次； (2)将步骤（1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25°C，采用去离子水定容至25mL ; (3)向50mL离心管中加入I. 5mL壬酸，将步骤（2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管 中，涡旋混合lmin，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂； (4)向步骤（3)得到的萃取剂中加入0. 5mL甲醇稀释，并涡旋30s混勾，过0. 22 μπι 有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测； (5)液相色谱检测 仪器条件： a、色谱柱：C18 柱，25cmX 4. 6 μ mX 5 μ m b、流动相：甲醇：水=I: I c、流速：1. OmT,/mi η d、检测波长：273nm e、进样量：20 μ L 1柱温：30°(：。 其中，所述的有机微孔滤膜为醇类或酯类有机微孔滤膜。 本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术采用壬酸作为萃取剂，壬酸极性与咖啡因极为相似，能够极大的提高萃 取回收率；同时壬酸的密度比水的密度小，更加方便的分离获取萃取剂； 2、本专利技术采用涡旋、超声混合萃取技术，能够保证在充分混匀的基础上，更加充分 的提取样品中的咖啡因； 3、本方法对检测人员无需接触高毒有机试剂，对人体健康安全有保障，同时对环 境友好。【附图说明】 图1为咖啡因标准品的液相图谱。【具体实施方式】 以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并 非用于限定本专利技术的范围。 配制含有咖啡因的混合标准品溶液，向蜂蜜中添加纯度彡99.5%的咖啡因 0.025mg/kg( I )、0.05mg/kg( II )和L0mg/kg(III),添加水平均等于或小于我国的限量 标准，每个含量水平重复4次。 实施例1 取上述蜂蜜（I )，检测其咖啡因含量，步骤如下： (1)将2. 50g蜂蜜溶于20mL、70-80°C的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程 中颠倒混匀2-3次； (2)将步骤（1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25°C，采用去离子水定容至25mL ; (3)向50mL离心管中加入I. 5mL壬酸，将步骤（2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管 中，涡旋混合lmin，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂； (4)向步骤（3)得到的萃取剂中加入0. 5mL甲醇稀释，并涡旋30s混勾，过0. 22 μπι 有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测； (5)液相色谱检测 仪器条件： a、色谱柱：C18 柱，25cmX 4. 6 μ mX 5 μ m b、流动相：甲醇：水=I: I c、流速：1. OmT,/mi η d、检测波长：273nm e、进样量：20 μ L 1柱温：30。(：。 蜂蜜中咖啡因含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。 实施例2 取上述蜂蜜（II )，检测其咖啡因含量，步骤如下： (1)将2. 50g蜂蜜溶于20mL、70-80°C的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程 中颠倒混匀2-3次； (2)将步骤（1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25°C，采用去离子水定容至25mL ; (3)向50mL离心管中加入I. 5mL壬酸，将步骤（2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管 中，涡旋混合lmin，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂； (4)向步骤（3)得到的萃取剂中加入0. 5mL甲醇稀释，并涡旋30s混勾，过0. 22 μπι 有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测； (5)液相色谱检测 仪器条件： a、色谱柱：C18 柱，25cmX 4. 6 μ mX 5 μ m b、流动相：甲醇：水=I: I c、流速：1. OmT,/mi η d、检测波长：273nm e、进样量：20 μ L 1柱温：30°(：。 蜂蜜中咖啡因含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。 实施例3 取上述蜂蜜（III )，检测其咖啡因含量，步骤如下： (1)将2. 50g蜂蜜溶于20mL、70-80°C的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程 中颠倒混匀2-3次； (2)将步骤（1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25°C，采用去离子水定容至25mL ; (3)向50mL离心管中加入I. 5mL壬酸，将步骤（2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管 中，涡旋混合lmin，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂； (4)向步骤（3)得到的萃取剂中加入0. 5mL甲醇稀释，并涡旋30s混勾，过0. 22 μπι 有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测； (5)液相色谱检测 仪器条件： a、色谱柱：C18 柱，25cmX 4. 6 μ mX 5 μ m b、流动相：甲醇：水=I: I c、流速：1. OmT,/mi η d、检测波长：273nm e、进样量：20 μ L 1柱温：30。(：。 蜂蜜中咖啡因含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。 表 1 由表1中数据可以看出，蜂蜜中咖啡因的平均回收率均在90~100%，相对标准偏 差RSD均不大于3%，回收率及相对标准偏差均符合咖啡因残留检测标准。 以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。【主权项】1. ，其特征在于，步骤如下： (1) 将2. 50g蜂蜜溶于20mL、70-80°C的热去离子水，超声溶解5-10min，超声过程中颠 倒混匀2-3次； (2) 将步骤（1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20-25°C，采用去离子水定容至25mL; (3) 向50mL离心管中加入1.5mL壬酸，将步骤（2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管中，涡 旋混合lmin，然后超声提取5-8min，去除下层水相，保留萃取剂； (4) 向步骤（3)得到的萃取剂中加入0.5mL甲醇稀释，并涡旋30s混匀，过0.22 ixm有 机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测； (5) 液相色谱检测 仪器条件： a、 色谱柱：C18 柱，25cmX4.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蜂蜜中咖啡因的检测方法，其特征在于，步骤如下：(1)将2.50g蜂蜜溶于20mL、70‑80℃的热去离子水，超声溶解5‑10min，超声过程中颠倒混匀2‑3次；(2)将步骤(1)完全溶解的蜂蜜放置冷却至20‑25℃，采用去离子水定容至25mL；(3)向50mL离心管中加入1.5mL壬酸，将步骤(2)的蜂蜜溶解液全部倒入离心管中，涡旋混合1min，然后超声提取5‑8min，去除下层水相，保留萃取剂；(4)向步骤(3)得到的萃取剂中加入0.5mL甲醇稀释，并涡旋30s混匀，过0.22μm有机微孔滤膜，采用外标法定容，待检测；(5)液相色谱检测仪器条件：a、色谱柱：C18柱，25cm×4.6μm×5μmb、流动相：甲醇：水＝1:1c、流速：1.0mL/mind、检测波长：273nme、进样量：20μLf、柱温：30℃。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：齐国良，
申请(专利权)人：齐国良，
类型：发明
国别省市：山东;37
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