一种基于初次卵裂时间和囊胚基因表达水平筛选检测山羊克隆胚胎质量的相关基因的方法技术

本发明专利技术公开一种基于初次卵裂时间和囊胚基因表达水平筛选检测山羊克隆胚胎质量的相关基因的方法，包括以下步骤：(1)构建重组胚并激活后卵裂、发育至囊胚；第7.5d收集早卵裂胚胎组和晚卵裂胚胎组囊胚；(2)提取步骤(1)中所收集的两组囊胚的RNA并反转录合成cDNA；(3)以步骤(2)合成的cDNA为模板进行荧光定量PCR扩增目的基因；(4)用SPSS18.0软件中的单因素方差分析两组实验结果的差异显著性筛选评估山羊克隆胚胎质量的相关基因。本研究将胚胎的初次卵裂时间和特异性基因的表达差联系起来，寻找能评价胚胎质量的分子，对评估山羊克隆胚胎体外发育潜能的研究有重要的借鉴作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种基于初次卵裂时间和囊胚基因表达 水平筛选检测山羊克隆胚胎质量的相关基因的方法。
技术介绍
克隆（体细胞核移植）技术能将体细胞在体外去分化，发育成具有全能性的胚胎， 这在临床上有巨大的应用前景。然而，SCNT技术过程复杂、影响因素多，通过SCNT技术获 得出生个体的效率也非常低，严重制约转基因大家畜的研究与应用。研究发现，缺乏有效的 胚胎评估体系，不能筛选出优质的移植胚胎是影响SCNT效率低下的主要原因之一。因此， 寻找一种更为客观、全面的评估胚胎质量和发育潜能的方法，筛选优质胚胎进行移植至关 重要。当前胚胎的评估手段主要是直观的形态学观察，依据胚胎卵裂球数目、碎片程度 及均等性可以评估胚胎质量。虽然形态学方法无创、方便、快速，但缺乏统一标准，并且不能 准确反映胚胎的功能状态，观察者间的主观性使卵子与胚胎发育的关联显示出差异性。另 外，形态正常的胚胎也可能存在遗传或表观遗传缺陷。前期有研究表明：胚胎培养过程中， 早期卵裂胚胎相对于晚期卵裂的胚胎更容易发育到囊胚阶段。Edward等研究发现受精卵卵 裂时间与怀孕率有关，Van Mo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高山羊卵母细胞的成熟率的方法，其特征在于处理卵巢组织并挑选卵母细胞，在体外成熟培养液中进行体外成熟培养18～30h，所述的体外成熟培养液中添加有1～10μg/mL的FSH和1～10μg/mL LH。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张艳丽，万永杰，张国敏，王锋，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32