一种检测香菇素和蘑菇醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测香菇素和蘑菇醇的方法。本发明专利技术提供了一种检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，包括以下步骤：步骤1：将粉碎后的待测样品与邻二氯苯内标标准溶液形成的混合物先加热、再进行顶空固相微萃取；加热的温度为40℃～50℃，加热的时间为30～40分钟；顶空固相微萃取的温度为40℃～50℃，顶空固相微萃取的时间为30～40分钟；步骤2：将萃取物进行解析；解析的温度为200℃～220℃，解析的时间为3～8分钟；步骤3：将解析后的混合物进行气相色谱串联质谱分析，得到待测样品中香菇素或蘑菇醇的质谱图。本发明专利技术的检测方法前处理方法简单、操作简单、重复性好、灵敏度高、准确度高，适合于工业化标准化应用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测香菇素和蘑菇醇的方法
本专利技术涉及一种检测香菇素和蘑菇醇的方法。
技术介绍
食用菌风味物质鉴定的研究一直是风味化学研究的重点，食用菌中风味成分可分为挥发性化合物和非挥发性化合物，其中挥发性化合物组分种类繁多，主要包括八碳化合物及其衍生物、萜烯类、含硫化合物以及醛类、酸类、酮类、酯类等，以八碳化合物和含硫化合物为主，醛酸酮酯类等与它们互补，各组分间相互协调、平衡呈现食用菌的香味。香菇的风味取决于其中含有的挥发性芳香物质，而含硫化合物通常能影响菇体整体的芳香，是香菇中最重要的香味来源。香菇素化学名称为1,2,3,5,6-五硫杂环庚烷(1,2,3,5,6-Pentathiepane)，是一种具有强烈的香菇特征风味的含硫杂环化合物，是由前体物质香菇酸在谷氨酸转肽酶的作用下产生二硫杂环丙烷中间体聚合而成的。1966年被发现并命名为香菇素(Lenthionine)、香菇精。八碳挥发性化合物通常具有很浓烈的蘑菇风味，蘑菇醇(Mushroomalcohol)化学名称为1-辛烯-3-醇，是食用菌中最重要的八碳挥发性化合物之一，几乎存在于所有的食用菌种类中，并且含量较为丰富。因此，对香菇素和蘑菇醇进行分析检测，在食用菌的风味研究中有着重要意义。作为香菇中挥发性风味物质的重要成分之一，香菇素的检测技术研究受到广泛关注。国内外已有学者运用水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法、同时蒸馏萃取法、超临界萃取法对香气成分进行萃取，并应用色谱、质谱及吸闻技术对香菇的特征风味作了研究，鉴定了组成香菇特征风味的化合物。但对于香菇素和蘑菇醇的定性、定量检测，国内外并没有检测标准。郑建仙等(郑建仙，福建香菇风味物质的分离与鉴定[J]，中国食用菌，1995,14(6)，3-6。)采用水汽蒸馏法提取香菇中的风味物质，样品经水浴加热连续抽取2.5小时后，再经浓缩、氮吹，再由气相色谱-质谱检测。该方法不仅前处理步骤复杂、处理时间长、且检测的重复性较差。张书香等(张书香,谢建春,孙宝国.固相微萃取/气-质联用分析香菇挥发性香味成分[J]，北京工商大学学报，自然科学版，2010,28(2)，1-5。)使用Carboxen/PDMS纤维固相微萃取/气-质联机分析了香菇的挥发性香味成分，但该方法不能对各个风味组分进行精确的定量分析，而是采用质量百分比来计算各个风味物质的贡献。因此，寻找一种准确度高、灵敏度高、重复性好、操作简单、适合于工业化应用的香菇素和蘑菇醇的检测方法是目前急需解决的技术问题。固相微萃取法是利用微纤维表面少量的吸附剂从样品中分离和浓缩分析物的技术。该方法无需有机溶剂、分析样品量少，集采样、萃取、浓缩、进样于一体，主要与气相色谱、液相色谱联用分析鉴定香味物质。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术测定香菇中风味物质的检测方法中，前处理方法复杂、操作繁琐、重复性较差、灵敏度不高、准确度不高，不适合于标准化应用等缺陷，而提供了一种检测香菇素和蘑菇醇的方法。本专利技术的检测方法前处理方法简单、操作简单、重复性好、灵敏度高、准确度高，适合于工业化、标准化应用。本专利技术提供了一种检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其包括以下步骤：步骤1：将粉碎后的待测样品与邻二氯苯内标标准溶液形成的混合物先加热、再进行顶空固相微萃取，得到萃取物；所述的加热的温度为40℃～50℃，所述的加热的时间为30～40分钟；所述的顶空固相微萃取的温度为40℃～50℃，所述的顶空固相微萃取的时间为30～40分钟；步骤2：将步骤1得到的萃取物进行解析，得到解析后的混合物；所述的解析的温度为200℃～220℃，所述的解析的时间为3～8分钟；步骤3：将步骤2得到的解析后的混合物进行气相色谱串联质谱分析，得到待测样品中香菇素或蘑菇醇的质谱图。步骤1中，所述的待测样品包括干品和鲜品。所述的干品是指本领域中常规的经过脱水处理后的含有香菇素和/或蘑菇醇的样品。所述的鲜品是指本领域中常规的新鲜的含有香菇素和/或蘑菇醇的样品。当所述的待测样品为鲜品时，所述的“粉碎后的待测样品”优选经过高速研磨匀浆，均匀混合后得到。当所述的待测样品为干品时，所述的“粉碎后的待测样品”优选经过高速研磨、均匀混合后得到；所述的“粉碎后的待测样品”的粒径优选不大于355μm。步骤1中，所述的待测样品为本领域中常规的含有香菇素和/或蘑菇醇的样品，例如香菇、花菇或金钱菇。步骤1中，所述的邻二氯苯内标标准溶液的浓度优选100μg/mL～500μg/mL。步骤1中，所述的待测样品与所述的邻二氯苯的质量比值优选100000～500000。步骤1中，所述的加热的温度优选45℃～50℃。步骤1中，所述的加热的时间优选30～35分钟。步骤1中，所述的加热优选在震荡的条件下进行，所述的震荡转速优选400转每分钟～600转每分钟。步骤1中，所述的顶空固相微萃取的固相微萃取头优选SPME萃取头，所述的SPME萃取头的组成优选50μm/30μm二乙烯基苯/碳分子筛/聚二甲基硅氧烷(DVB/CAR/PDMS，50μm/30μm表示SPME萃取头的膜厚度)。步骤1中，所述的顶空固相微萃取的温度优选45℃～50℃。步骤1中，所述的顶空固相微萃取的时间优选30～35分钟。步骤1中，所述的顶空固相微萃取优选在震荡的条件下进行，所述的震荡转速优选400转每分钟～600转每分钟。步骤1中，所述的顶空固相微萃取优选采用自动顶空固相微萃取装置进行，所述的自动顶空固相微萃取装置型号优选G6500-CTC，厂家优选安捷伦。步骤2中，所述的解析的温度优选210℃～220℃。步骤2中，所述的解析的时间优选3～5分钟。步骤3中，所述的气相色谱的参数条件优选：HP-5MS，30m×0.25mm内径，膜厚度0.25μm；进样口温度为220℃；气相程序升温：起始温度50℃，保持1min，以3℃/min的速率升温至180℃，保持5min，再以10℃/min的速率升温至280℃；不分流进样；恒流模式，流速为1mL/min。步骤3中，所述的串联质谱的参数条件优选：EI离子源温度230℃，传输线温度280℃，碰撞能量70eV；溶剂延迟时间5.5～6.5min，全扫描模式范围为35-550amu；载气为纯度＞99.999％的高纯氦气。步骤3中，所述的气相色谱串联质谱分析优选采用气相色谱质谱联用仪进行；所述的气相色谱质谱联用仪型号优选Agilent7890A-5975C，厂家优选安捷伦。本专利技术所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法中，定性分析方法：利用标准谱库检索，通过比较目标化合物和标准化合物的标准谱图，所得匹配度都在95％以上。所述的香菇素的定性离子为m/z142，定量离子为m/z124和/或78；所述的蘑菇醇的定性离子为m/z57，定量离子为m/z43和/或72。按照所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法测得待测样品中香菇素或蘑菇醇的质谱图之后，再按照下述公式计算得到待测样品中香菇素或蘑菇醇的含量：C样品为待测样品中香菇素或蘑菇醇的含量，单位为微克每克(μg/g)；C标液为邻二氯苯内标标准溶液的浓度，单位是微克每毫升(μg/mL)；V为内标标准溶液的体积，单位为微升(μL)；AS为待测样品中香菇素或蘑菇醇的峰面积；A0为邻二氯苯内标的峰面积；W为待测样品质量，单位为克(g)。本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于其包括以下步骤：步骤1：将粉碎后的待测样品与邻二氯苯内标标准溶液形成的混合物先加热、再进行顶空固相微萃取，得到萃取物；所述的加热的温度为40℃～50℃，所述的加热的时间为30～40分钟；所述的顶空固相微萃取的温度为40℃～50℃，所述的顶空固相微萃取的时间为30～40分钟；步骤2：将步骤1得到的萃取物进行解析，得到解析后的混合物；所述的解析的温度为200℃～220℃，所述的解析的时间为3～8分钟；步骤3：将步骤2得到的解析后的混合物进行气相色谱串联质谱分析，得到待测样品中香菇素或蘑菇醇的质谱图。

【技术特征摘要】
1.一种检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于其包括以下步骤：步骤1：将粉碎后的待测样品与邻二氯苯内标标准溶液形成的混合物先加热、再进行顶空固相微萃取，得到萃取物；所述的待测样品为香菇、花菇或金钱菇；所述的顶空固相微萃取采用自动顶空固相微萃取装置进行；所述的加热的温度为40℃～50℃，所述的加热的时间为30～40分钟；所述的顶空固相微萃取的固相微萃取头为SPME萃取头，所述的SPME萃取头的组成为50μm/30μm二乙烯基苯/碳分子筛/聚二甲基硅氧烷，所述的顶空固相微萃取的温度为40℃～50℃，所述的顶空固相微萃取的时间为30～40分钟；步骤2：将步骤1得到的萃取物进行解析，得到解析后的混合物；所述的解析的温度为200℃～220℃，所述的解析的时间为3～8分钟；步骤3：将步骤2得到的解析后的混合物进行气相色谱串联质谱分析，得到待测样品中香菇素和/或蘑菇醇的质谱图。2.如权利要求1所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于：步骤1中，所述的待测样品包括干品和鲜品。3.如权利要求2所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于：步骤1中，当所述的待测样品为鲜品时，所述的“粉碎后的待测样品”经过高速研磨匀浆，均匀混合后得到；和/或，当所述的待测样品为干品时，所述的“粉碎后的待测样品”经过高速研磨、均匀混合后得到；和/或，当所述的待测样品为干品时，所述的“粉碎后的待测样品”的粒径不大于355μm。4.如权利要求1所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于：步骤1中，所述的邻二氯苯内标标准溶液的浓度为100μg/mL～500μg/mL；和/或，步骤1中，所述的待测样品与所述的邻二氯苯的质量比值为100000～500000；和/或，步骤1中，所述的加热的温度为45℃～50℃；和/或，步骤1中，所述的加热的时间为30～35分钟；和/或，步骤1中，所述的加热在震荡的条件下进行；和/或，步骤1中，所述的顶空固相微萃取的温度为45℃～50℃；和/或，步骤1中，所述的顶空固相微萃取的时间为30～35分钟；和/或，步骤1中，所述的顶空固相微萃取在震荡的条件下进行。5.如权利要求4所述的检测香菇素和/或蘑菇醇的方法，其特征在于：步骤1中，当所述的顶空固相微萃取在震荡的条件下进行时，所述的震荡转速为400转每分钟～600转每分钟...

【专利技术属性】
技术研发人员：周佳欣，周昌艳，宋卫国，白冰，李晓贝，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31