一种补骨脂素和异补骨脂素的快速检测方法技术

本发明专利技术提供一种补骨脂素和异补骨脂素的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明专利技术选择PY-GC/MS技术对补骨脂素和异补骨脂素含量进行检测，是针对实际生产、生活中当归因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种补骨脂素和异补骨脂素快速、微量的检测方法，进而初步判断补骨脂的质量，本发明专利技术具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，可用于对不同产地、品种、批次的补骨脂样品间的质量差别进行初步的比较，应用性广，为补骨脂的质量标准和现代化应用提供了一种初步的判读依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术（PY-GC/MS法）快速检 测补骨脂素和异补骨脂素含量的方法。
技术介绍
补骨脂为豆科植物补骨脂的干燥成熟果实，具有温肾助阳、纳气、止泻的功效。其 主要成分为香豆素类和黄酮类化合物，其中补骨脂素和异补骨脂素为其重要有效成分。作 为传统的中药，补骨脂素和异补骨脂素常用于预防和治疗骨质疏松，现代药理学实验表明， 补骨脂素和异补骨脂素是一种有效的Ca +通道拮抗剂，其对大鼠的成骨细胞的增值和分化 具有明显的促进作用。 最近的研究表明补骨脂素和异补骨脂素可用于治疗T细胞淋巴癌、人乳腺癌细胞 和一些自动免疫性疾病。补骨脂素和异补骨脂素的联合使用对多药耐药性的癌细胞，如人 乳腺癌细胞阿霉素耐药株，有明显的抑制作用。因此，在其他药物治疗白血病失败后，补骨 脂素和异补骨脂素有可能成为治疗白血病的有效药物之一。快速、高效检测中药或其复方 制剂中的补骨脂素和异补骨脂素对成药性及中药现代化应用是非常重要的。 现有对补骨脂素和异补骨脂素的分析检测要采用高效液相的方法。往往需要对样 品进行较为复杂的样品前处理，通过热提、冷提或超声萃取等方法将补骨脂素和异补骨脂 素从药材或其复方制剂中分离，随后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色谱方法分析。该分析 方法的样品处理过程复杂、总体分析时间长。 快速热解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成 分的技术，近年来发展迅速。低温下的热解过程是一种非常有效的热分离手段，通过控制 热解的温度和时间可以实现低沸点的复杂混合物的初步的气-液或气-固相分离；为气相 色谱提供一种在线的和实时的样品前处理和初步分离能力。分析检测过程中的热解时间、 温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对补骨脂素和异补骨脂素的快速、微量检测方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，并基于此， 初步判断补骨脂及其制剂质量的高低。 为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案： 1)准确称取补骨脂或其复方制剂0. 01~10.0 Omg得样品，将样品加入热解杯中； 2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； 3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中补骨脂素和 异补骨脂素的色谱峰，并获得样品中补骨脂素和异补骨脂素的相对含量。 所述样品为块状或粉末状固体。 所述热解的条件为：热解温度为200~400 °C，热解时间为0. 1~2min。 所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~ 500 :1，升温程序为：初始温度为40~60°C，并保持O~4min，然后以彡35°C /min升至 150°C，然后以彡 15°C /min 升至 300°C。 所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为40~80eV，离子源 温度为210~240°C，单四级杆温度为140~180°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电 压为1070~3000V，溶剂延迟为O~3min。 所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。 所述补骨脂素和异补骨脂素的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。 本专利技术的有益效果体现在： 1)热分离和色谱分离相结合，实现快速分离。现有方法是将补骨脂或其制剂 通过超声萃取或溶剂萃取，过滤处理后，利用液相色谱分析，或薄层层析-光谱联用技术 (TLC-SP)等检测其有效成分；该方法的一般分析时间为4~24小时。本专利技术中通过热分 离方法直接对补骨脂或复方补骨脂中的低沸点物质进行初步分离，随后采用气相色谱进一 步分离补骨脂素和异补骨脂素，大大节省了分析时间，常规分析时间为〇. 5~1小时，提高 了分析效率。 2)所需样品量少，灵敏度好。现有方法因需要先分离得到粗品溶液，因此需要的样 品量较大，通常是几克到几十克不等；本专利技术方法的分析所用样品量一般为〇. 01~lmg，提 高了分析灵敏度。 3)本专利技术优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现 了快速和准确检测。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。 本专利技术针对补骨脂素和异补骨脂素熔沸点相对较低且易挥发的特点，采用快速热 解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)，充分将热分离和色谱分离相结合，实现补骨脂素 和异补骨脂素的快速分离，随后采用质谱定性和定量检测，达到快速、微量检测的目的。 实施例 -种基于PY-GC/MS检测补骨脂素和异补骨脂素的方法，以补骨脂制剂为例，但本 专利技术的保护范围不局限于该实施例，具体步骤如下： 一、样品准备 将取得的补骨脂胶囊（陕西斯诺特生物技术有限公司，西安）准确称取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的热解小杯中； 二、热解： 热裂解炉采用 Frontiers 的 PY2020is ; ①热解温度：300 °C ; ②热解时间：0· 2〇min。 三、分离、检测 色谱： 气相色谱采用安捷伦7890A : ①分析柱是HP-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m); ②载气：高纯氦气，流速为1.0 mL/min ; ③进样方式为分流进样当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种补骨脂素和异补骨脂素的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1)准确称取补骨脂或其复方制剂0.01～10.00mg得样品，将样品加入热解杯中；2)采用快速热解‑气相色谱‑质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中补骨脂素和异补骨脂素的色谱峰，并获得样品中补骨脂素和异补骨脂素的相对含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈福欣，龚频，周安宁，张少利，
申请(专利权)人：西安科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61