本发明专利技术公开了一种辅助筛选抗条锈病小麦的引物组及其应用。本发明专利技术提供了一种引物组合，为Xwmc382引物对和Xgwm636引物对。所述Xwmc382引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。所述Xgwm636引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成。本发明专利技术所提供的引物对和分子标记可用于小麦抗条锈病分子育种和抗条锈病基因的克隆。本发明专利技术的专用引物和分子标记将在小麦抗病育种中发挥重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
小麦条锈病是一种世界性的叶部真菌病害，对小麦产量和品质造成严重影响。小 麦条锈病由条形柄锈菌（Pucciniastriiformisf. sp. tritici)引起，喜阴好凉，几乎在全 球所有的小麦种植区均有发生，一般年份损失10-70%，严重年份甚至绝产。在我国，小麦条 锈病主要在西北和西南地区（如甘肃、四川等省）发生，最近几年在陕西、湖北等省也有加 重趋势。1950、1964、1980和2002年该病害在我国曾一度大面积流行，给小麦生产带来巨大 损失；过去10年，条锈病每年发生面积大约6000万亩。近年来，农业措施和化学药剂有效 减少了小麦条锈病的流行和危害，但费时费力，污染环境，因而培育和推广抗条锈病品种是 防治小麦条锈病最为经济有效环保的途径。 目前有67个抗条锈病基因（Yrl-Yr67)已被正式命名，其中大多数为苗期抗性基 因，具有生理专化性，抗性较强，但往往会因病原菌小种的变异而丧失抗性。历史上，已知的 抗条锈病基因Yr9、Yr24/Yr26、YrlO等由于新小种CYR29、CYR32、CYR33、v26的相继出现， 失去了抗性，造成小麦条锈病大面积流行，导致巨大的产量损失。对我国小麦条锈菌小种来 说，迄今仅有Yrl7、Yrl8、Yr5和Yrl5仍然保持着较好的抗性。由于单一基因存在潜在危 害，通过多基因聚合、基因布局和多系品种等手段延长苗期抗病基因的寿命显得尤其重要。 要实现多基因聚合、基因布局和多系品种，必须有丰富的抗源基因。因此，寻找和发掘新的 抗条锈病基因，开发与其紧密连锁的标记对分子标记辅助选择育种提供很大方便。 在寻找和发掘新的基因过程中，分子标记应用十分广泛，尤其在小麦基因定位、数 量性状位点作图、标记辅助选择育种和图位克隆等方面。常用的分子标记包括RFLP、RAPD、 AFLP、SSR、DArT、SCAR和SNP，利用这些标记定位了多个小麦抗条锈病基因。其中SSR标记 多态性高、稳定性好，共显性，染色体位置明确，操作过程简单，成本低廉，所以在分子标记 辅助选择和聚合育种中得到广泛应用。利用紧密连锁的分子标记进行抗病基因鉴定和辅助 选择育种，特异性的标记及引物是关键。 普通小麦品种中麦175由中国农业科学院作物科学研究所育成，2008年通过国家 审定，其综合农艺性状优良，苗期和田间均高抗小麦条锈病，可能含有新的抗条锈病基因。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。 本专利技术提供了一种引物组合，为如下（a)或（b)或（c): (a) Xwmc382 引物对和 Xgwm636 引物对； (b)所述 Xwmc382 引物对； (c)所述 Xgwm636 引物对； 所述Xwmc382引物对为能扩增片段A的引物对；所述片段A为以小麦基因组DNA 为模板采用序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组 成的引物对进行PCR扩增得到的片段； 所述Xgwm636引物对为能扩增片段B的引物对；所述片段B为以小麦基因组DNA 为模板采用序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组 成的引物对进行PCR扩增得到的片段。 所述Xwmc382引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所 示的单链DNA分子组成。 所述Xgwm636引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所 示的单链DNA分子组成。 所述引物组合（a)中，每个引物对单独包装。所述引物组合（a)中，每条引物单独 包装。所述引物组合（b)中，每条引物单独包装。所述引物组合（c)中，每条引物单独包装。 所述引物组合的用途为如下（I)或（II) : (I)辅助筛选抗条锈病植物；（II) 辅助鉴定植物的抗条锈病性状。 本专利技术还保护所述引物组合在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下 (I)或（II):(I)辅助筛选抗条锈病植物；（II)辅助鉴定植物的抗条锈病性状。 本专利技术还保护含有所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下（I )或 (II):(I)辅助筛选抗条锈病植物；（II)辅助鉴定植物的抗条锈病性状。 本专利技术还保护所述试剂盒的制备方法，包括将所述引物组合中的每条引物独立包 装的步骤。 以上任一所述抗条锈病植物可为抗条锈病小麦，具体可为小麦品种"中麦175"或 小麦材料"CA13152"。以上任一所述植物可为小麦，具体可为小麦品种"中麦175"、小麦 品种"京411"、小麦品种"轮选987"、小麦品种"中国春"、小麦品种"Avocet S"、小麦材料 "CA12107"、小麦材料"CA13152"、小麦品种"铭贤169"、小麦品种"永刚2号"、小麦品种"周 麦26"、小麦品种"济麦22"、小麦品种"济麦23"、小麦品种"扬麦21"、小麦品种"扬麦14"、 小麦品种"郑麦366"、小麦材料"92恢94-1-12"、小麦材料"99-19-10"或小麦品种"兰天 21"。 以上任一所述条锈病具体可为条锈菌小种CYR29引起的条锈病。 本专利技术还保护一种辅助鉴定待测小麦的抗条锈病性状的方法，包括如下步骤：以 待测小麦的基因组DNA为模板，分别采用所述Xwmc382引物对和所述Xgwm636引物对进行 PCR扩增；如果采用所述Xwmc382引物对进行PCR扩增得到的扩增产物中不具有169bp的 特异片段且采用所述Xgwm636引物对进行PCR扩增得到的扩增产物中具有98bp的特异片 段，待测小麦为候选的具有抗条锈病性状的小麦；如果采用所述Xwmc382引物对进行PCR扩 增得到的扩增产物中具有169bp的特异片段且采用所述Xgwm636引物对进行PCR扩增得到 的扩增产物中不具有98bp的特异片段，待测小麦为候选的具有感条锈病性状的小麦。 本专利技术还保护一种辅助鉴定待测小麦的抗条锈病性状的方法，包括如下步骤：以 待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述Xwmc382引物对进行PCR扩增；如果PCR扩增产物 中不具有169bp的特异片段，待测小麦为候选的具有抗条锈病性状的小麦；如果PCR扩增产 物中具有169bp的特异片段，待测小麦为候选的具有感条锈病性状的小麦。 本专利技术还保护一种辅助鉴定待测小麦的抗条锈病性状的方法，包括如下步骤：以 待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述Xgwm636引物对进行PCR扩增；如果PCR扩增产物 中具有98bp的特异片段，待测小麦为候选的具有抗条锈病性状的小麦；如果PCR扩增产物 中不具有98bp的特异片段，待测小麦为候选的具有感条锈病性状的小麦。 本专利技术还保护一种辅助筛选抗条锈病小麦的方法，包括如下步骤：按照以上任一 所述方法鉴定待测小麦的抗条锈病性状，筛选具有抗条锈病性状的小麦。 采用Xwmc382引物对时的PCR扩增程序：94°C预变性5min ;94°C变性lmin、61°C复 性lmin、72°C延伸lmin，共36个循环；最后72°C延伸lOmin。 采用Xgwm636引物对时的PCR扩增程序：94°C预变性3min ;94°C变性lmin、50°C复 性lmin、72°C延伸2min，共36个循环；最后72°C延伸lOmin。 以上任一所述方法中，具体可通过6%变性聚丙烯本文档来自技高网...
【技术保护点】
引物组合，为如下(a)或(b)或(c)：(a)Xwmc382引物对和Xgwm636引物对；(b)所述Xwmc382引物对；(c)所述Xgwm636引物对；所述Xwmc382引物对为能扩增片段A的引物对；所述片段A为以小麦基因组DNA为模板采用序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增得到的片段；所述Xgwm636引物对为能扩增片段B的引物对；所述片段B为以小麦基因组DNA为模板采用序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增得到的片段。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：夏先春，卢家玲，何中虎，陈璨，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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