本发明专利技术涉及一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测试纸条，它包括衬板，衬板的一面自上而下依次黏贴吸水纸、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设计1条质控线和1条检测线；所述质控线包被有兔抗鼠IgG；所述检测线包被有MNA-OVA偶联物；所述金标垫为玻璃纤维素膜，喷涂有纳米金标记的抗重金属汞单克隆抗体，该单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO：C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生的单克隆抗体。该试纸条可实现对水体中汞离子的快速直接检测，无需螯合剂对重金属离子的处理，对水体中重金属汞离子的检测灵敏度可达到0.5ng/mL。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及可分泌抗重金属汞的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体，以及一种基于单克隆抗体的重金属汞检测免疫层析试纸条。
技术介绍
重金属汞是自然界存在的一种重要的金属元素。由于具有多种优良特性，汞及其化合物在工农业生产中应用十分广泛。然而，汞是一种对人体和高等生物具有很强毒性的金属污染物。早在20世纪50年代日本熊本水俣病爆发之后，汞的污染问题就引起了人们的关注。近年来，随着城市化进程的不断加快和工业化水平的迅速提升，由生产、生活所致的汞及其化合物污染日趋严重并再度成为全球热点问题之一。当前，含汞颗粒物的大气沉降、农用含汞杀菌剂的大量使用、工业及生活含汞废水的排放等问题不仅使环境中汞污染现象十分严重，造成农产品中重金属污染超标，严重影响我国农产品质量和国际竞争力，而且还严重危害人类的身体健康。汞对人体的危害主要表现在导致肾损伤(以无机汞形式存在)、中枢神经系统紊乱、智障、甚至死亡(以有机汞形式存在)。汞污染和其它重金属污染往往会造成二种或多种重金属元素的复合污染，并具有普遍性、复杂性等特点，给生态环境带来了更大的压力。因此，对环境中重金属汞污染的检测工作越来越受到人们的关注。传统的重金属检测方法多采用化学仪器检测，如利用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法、离子色谱仪、X射线荧光光谱法、气相色谱-质谱联用法等，这些检测方法虽然能够精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对费时、费力，费用昂贵，需要具备大型分析仪器设备的室内进行，不适应实践中快速简便的需要。重金属的免疫检测方法具有快速、廉价、简便、特异的优点，便携而有利于进行现场监测，克服了传统检测方法的缺点。但重金属离子本身免疫原型低，很难制备出针对重金属离子的单克隆抗体。因此，为克服该困难，本专利技术通过化学合成高选择性重金属离子捕获螯合剂，制备重金属离子螯合物，与载体蛋白偶联获得完全抗原，筛选出能够分泌针对环境水中重金属汞离子的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并利用该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体建立了针对环境水中重金属汞离子的免疫层析试纸条，所建立的免疫层析试纸条对水体中重金属汞离子的检测灵敏度可达到0.5ng/mL。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可稳定分泌抗重金属汞离子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。本专利技术的另一目的是提供一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现:本专利技术提供提供了杂交瘤细胞株2F2，该细胞株已于2015年3月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCN0.C201512。识别重金属汞的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC N0.C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生。本专利技术提供的抗重金属汞单克隆抗体来自于BALB/C小鼠腹腔。该小鼠经过液体石蜡预处理后，注射杂交瘤细胞株2F2，并采集该小鼠的腹水，利用辛酸-硫酸铵法进行纯化，收集得到抗重金属汞单克隆抗体。本专利技术提供的一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测试纸条，其特征在于:它包括衬板，衬板的一面自上而下依次黏贴吸水纸、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设计I条质控线和I条检测线；所述质控线包被有兔抗鼠IgG ;所述检测线包被有MNA-OVA偶联物；所述金标垫为玻璃纤维素膜，喷涂有纳米金标记的抗重金属汞单克隆抗体，该单克隆抗体为由保藏编号为CCTCCNO:C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生的单克隆抗体。有益效果(I)本专利技术提供的基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条，检测线上所使用的包被源不含有金属汞，可避免在试纸条使用过程中产生的二次污染；可实现对水体中的重金属汞离子的直接检测，无需螯合剂的预处理(2)本专利技术提供的基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条，具有灵敏度高、特异性高的特点，该试纸条对水体中的重金属汞离子的检测灵敏度可达到0.5ng/mL ;对 CH3Hg, Fe3、Ca2、Mg2' Zn2、Pb2、Mn2' Cd2+的交叉反应率在 0.1 % 以内。【具体实施方式】实施例1:杂交瘤细胞株2F2的筛选1.动物免疫将重金属汞人工免疫原免疫6周龄的BAIB/C小鼠。第一次免疫将重金属汞人工免疫原与等体积的福氏完全佐剂乳化后，于小鼠腹腔注射。第二次免疫将重金属汞人工免疫原与等体积的福氏不完全佐剂乳化，注射方式与第一次免疫相同，间隔3周。第三、四、五次免疫分别于第二次免疫程序一致，且间隔均为3周。从第3次免疫后，每次免疫后7-8天，小鼠尾部静脉采血，分离血清，利用间接ELISA检测小鼠血清效价。最后一次免疫后，对血清进行效价监测之外同时对血清灵敏度进行评价。选择效价、灵敏度均相对较高的血清所对应的小鼠进行加强免疫，免疫剂量为前面的2倍，不加福氏佐剂，注射方式相同。重金属汞人工免疫原为MNA-Hg与牛血清蛋白的偶合物，包被源为MNA与鸡卵清白蛋白的偶合物。2.细胞融合最后一次加强免疫3天后取其脾脏，脾细胞和对数生长期的Sp2/0骨髓瘤细胞通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，37°C，5%二氧化碳培养箱培养10-12天后，通过检测融合孔上清筛选杂交瘤细胞；3.杂交瘤筛选:用1000倍稀释的重金属汞包被源包被酶标板，I %明胶封闭，取杂交瘤细胞的培养上清，采用非竞争间接ELISA法初步进行筛选，选取呈阳性的细胞孔，细胞上清留存用于下一步检测，呈阴性的孔若重复一次后仍为阴性则可舍弃。对于上一步呈阳性的细胞孔则采用间接竞争ELISA法进行进一步的确认，间接竞争ELISA法的具体操作如下:(I)包被:用包被缓冲液(0.05mol/L，pH9.6)将包被抗原稀释1000倍加入酶标板，每孔50 μ 1，37°C温箱中孵育2h ;(2)洗板:用洗涤液PBST (0.05%吐温20，0.01mol/L，pH 7.4)洗涤5次，吸水纸当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测试纸条，其特征在于：它包括衬板，衬板的一面自上而下依次黏贴吸水纸、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设计1条质控线和1条检测线；所述质控线包被有兔抗鼠IgG；所述检测线包被有MNA‑OVA偶联物；所述金标垫为玻璃纤维素膜，喷涂有纳米金标记的抗重金属汞单克隆抗体，该单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO：C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生的单克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤权，王利民，王玉龙，蔡佳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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