类病斑表型的抑制子SLM1制造技术

本发明专利技术提供了用于调节Slm1的方法和组合物。本发明专利技术提供了用于调节Slm1在宿主植物或植物细胞中的表达以调节农学特性的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利
涉及植物育种和遗传学，并且具体地，涉及用于植物改良的重组DNA 构建体。 相关申请的夺叉引用 本申请要求提交于2013年1月31日的美国临时申请61/758937的权益，其全部 内容以引用方式并入本文。
技术介绍
玉米类病斑突变体（Johal等人1995BioEssays17 (8) :685_692)为研究在很大程 度上仍然难懂的植物细胞死亡的遗传机制提供了极佳的模型。在不同的遗传背景下许多类 病斑的表型是不同的，表明天然变体可被用于遗传分析这一现象的过程以搜寻修饰物。先 前的研究（Penning等人2004Genome47 :961-969)在玉米近交系M〇20W的2号染色体上鉴 定了一个抑制隐性类病斑突变les23的主要数量性状座位（被命名为slml，类病斑-1的抑 制子）。
技术实现思路
本公开包括了用于调节Slml活性的方法和组合物。本专利技术提供了用于调节Slml 在宿主植物或植物细胞中的表达以调节农学特性的方法。【附图说明】 和序列表 根据以下的详细描述和附图以及序列表，可以更全面地理解本公开，以下的详细 描述和附图以及序列表形成本申请的一部分。 图1A-图1C示出了在玉米中图位克隆slml和在slml处的四个突变等位基因。图 1A:F2和BC群体的slml遗传图谱。标记的上方显示了以厘摩为单位的遗传距离，并且标 记的下方显示了重组体的数量。图1B:对来自野生型和M〇20W的在slml区间的BAC克隆 进行测序和注释。图1C:在玉米slml中的四个突变等位基因的基因结构和分子表征。 图2:在玉米中les23的基因结构和突变等位基因。 图3示出了在SLM1和LES23之间的物理相互作用。LES23的全长蛋白质与来自Va35的N末端（1-187位氨基酸）有物理相互作用，但与来自Va35的全长SLM1或来自M〇20W 的预测截短产物没有物理相互作用。 图4示出了slml的精细作图步骤。 图5示出了来自BC8F2种群包含2、1、0个Slml-Mo20W拷贝的les23-ref纯合植 物（分别为从左至右）。 图6A-6B示出了来自各种植物种类的LES23同源物的多重比对。所述比对使用 ClustalW比对方法进行，多重比对的默认参数是：GAPPENALTY=10,GAPLENGTHPENALTY =0? 2，DelayDivergentSequences= 30%，DNATransitionWeight= 0.5?Protein WeightMatrix=Gonnet系列，DNAWeightMatrix=IUBc^ 在所有植物种类中在位置 19 处的脯氨酸是保守的，但在les23-ref?突变体中变成了亮氨酸。 图7示出了slml和les23相互作用的工作模型。 序列描述以及所附序列表遵循如37C.F.R. § 1.821-1. 825所列出的关于专利申 请中核苷酸和/或氨基酸序列公开的规定。 SEQIDNO:1-SEQIDN0 :46是本研究所用的引物。SEQIDN0 :47是来自Va35的野生型Slml基因座的基因组核苷酸序列。SEQIDN0 :48是来自Va35的野生型Slml基因座的编码蛋白质的核苷酸序列。 SEQIDN0 :49是来自Va35的野生型SLM1蛋白质的氨基酸序列。SEQIDN0 :50是来自M〇20W的突变体slml基因座的基因组核苷酸序列。 SEQIDN0 :51来自M〇20W的突变体slml基因座的核苷酸序列，其对应于SEQID NO:48,蛋白质编码区。 SEQIDN0 :52是SEQIDN0 :51的翻译产物，存在多个翻译终止密码子。突变体 slml基因座编码截短的蛋白质（SEQIDN0 :73)。 SEQIDNO:67是野生型Les23基因座的基因组核苷酸序列。 SEQIDN0 :68是野生型Les23基因座的编码蛋白质的核苷酸序列。SEQIDN0:69是野生型LES23蛋白质的氨基酸序列。 SEQIDN0:70是突变体les23_ref基因座的基因组核苷酸序列。 SEQIDN0 :71是突变体les23-ref基因座的编码蛋白质的核苷酸序列。SEQIDN0:72是突变体les23_ref蛋白质的氨基酸序列。 SEQIDN0 :73是由SEQIDN0 :51编码的截短的突变体slml蛋白质的氨基酸序 列。 SEQIDN0 :74是来自玉米的硝酸诱导的N0I蛋白质（NCBIGINo. 195622454)的 氨基酸序列，对应于玉米LES23横向同源物，被命名为ZmLES23paralog。 SEQIDNO:75 是LES23 的稻同源物（0s04g0379600;NCBIGINO. 115457982)的 氨基酸序列，被命名为RIN4-0SJ。 SEQIDNO:76 是LES23 的稻同源物（假定蛋白质 0sl_15598;NCBIGI NO. 218194724)的氨基酸序列，被命名为RIN4-0sI。 SEQIDNO:77 是拟南芥RIN4 蛋白质（AT-RIN4 ;针对AT3G25070. 1 的TAIR登录号 1009121715)的氨基酸序列。 SEQIDN0 :78 是来自马铃薯（Solanumtuberosum)的RIN4 样蛋白质（NCBIGI N0. 565345898)的氨基酸序列，被命名为StRIN4。 此序列表中按照与IUPAC-IUBMB标准一致的定义，以单个字母表示核苷酸，并 且以三字母表示氨基酸，如NucleicAcidsRes. 13:3021-3030(1985)和Biochemical J. 219(No. 2) :345-373(1984)中所述，这些文献以引用的方式并入本文。用于核苷酸和氨 基酸序列数据的符号和格式遵循在37C.F.R.§1. 822中列出的规定。【具体实施方式】 本文中所列出的每篇参考文献的公开内容的全文均以引用的方式并入本文。 如本文所用，以及在所附的权利要求书中，单数形式"一个"和"所述"包括复数涵 义，除非上下文中清楚地另有指明。因此，例如，"一株植物"的涵义包括多株此类植物，"一 个细胞"的涵义包括一个或多个细胞及本领域的技术人员已知的等同物等等。 如本文所用： 术语"les"是指类病斑突变体。术语"les23"是指存在于2号染色体断臂上的玉 米特定隐性类病斑（Penning等人2004Genome47 :961_969)。 术语"slml"表示"类病斑1型的抑制子"，是指对les23表型抑制的主要QTL(数 量性状座位），其存在于玉米2号染色体上（Penning等人2004Genome47 :961-969)。 术语"单子叶植物"和"单子叶的植物"在本文中互换使用。本公开的单子叶植物 包括禾本科（Gramineae) 〇 术语"双子叶植物"和"双子叶的植物"在本文中互换使用。本专利技术的双子叶植物 包括以下科：十字花科（Brassicaceae)、ii科（Leguminosae)和前科（Solanaceae)。 术语"全长互补序列"和"全长的互补序列"本文互换使用，是指给定核苷酸序列的 互补序列，其中所述互补序列和核苷酸序列由相同数目的核苷酸组成并且是100%互补的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备内源Slm1表达减少的转基因植物的方法，所述方法包括：a.将包含分离的多核苷酸的重组构建体引入到可再生的植物细胞中，所述分离的多核苷酸可操作地连接至启动子，其中所述多核苷酸序列的表达降低内源Slm1的表达；b.在步骤(a)之后，由所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及c.选择(b)的转基因植物，其中所述转基因植物包含所述重组构建体且在与不包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出Slm1表达的减少。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JS贾奎斯，J季，G乔哈，A伦纳德，李柏林，
申请(专利权)人：纳幕尔杜邦公司，普渡研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US