一种分离脂质体‑重金属复合物的方法技术

本发明专利技术属于环境保护污染处理技术领域，涉及一种将脂质体‑重金属复合物与游离重金属离子分离的方法。本发明专利技术主要步骤如下：将葡聚糖凝胶颗粒充分溶胀，均匀填充于注射器针筒中，使用缓冲液平衡柱体。使用经过整粒后的脂质体吸附重金属离子，达到吸附平衡后，将少量样品滴加入柱体，缓慢离心使之进入柱体，用等量缓冲液淋洗数次，离心分离，收集每次洗脱组分。消解脂质体，定容，测定磷元素和公斤数元素含量。本发明专利技术分离效果好，操作高效，处理成本低，是一种能够解决实际问题，具有环境优势的分离方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境保护污染处理
，涉及一种将脂质体-重金属复合物与游离重金属离子分离的技术方法。
技术介绍
近年来，全球范围内重金属污染情况随着人类社会工业经济的高速发展而不断加剧。我国也频频爆发重金属污染事件。重金属离子可以通过多种途径进入人体，危害人类健康。携带正电荷的重金属离子在进入有机体后，生物膜是其发生作用的重要位点。由于天然生物膜的组成复杂，通常用脂质体作为模拟生物膜模型。由于与天然生物膜有相似的结构和组成成分，在环境科学领域将脂质体用于评价污染物生物可利用性以及预测污染物进入生物体的趋势和机理。如天然生物膜一样，脂质体囊泡携带电荷离子，当脂质体携带负电荷时，可通过静电吸引与重金属发生吸附作用。另外，脂质体表面存在能够形成配位作用的原子或者配体，能够与重金属离子发生作用力更强的配位作用。在脂质体与重金属离子吸附作用的相关研究中，分离脂质体-重金属复合物和游离(未吸附)的重金属离子一直是技术难题，制约着相关工作的展开。MaryT.(2009)使用荧光淬灭的方法测定未吸附的金属离子，间接得到Cd和Hg在脂质体上的吸附量。该方法操作复杂，所需仪器、药品种类较多。TamioK.(2002)使用葡聚糖凝胶柱层析方法将脂质体-铜复合物从溶液中分离，该方法所需时间长，对样品稀释量大，造成后期检测的困难，而且由于固相颗粒对金属离子的吸附作用，游离金属离子在柱中无法洗脱，造成柱污染，无法重复使用。SibylleM.K.(2006)使用超滤离心方法分离脂质体-铜复合物。该方法仪器成本较高，需要使用超速离心机和超滤膜，离心时间长。另外，此方法会导致脂质体破裂以及细小粒径的脂质体透过超滤膜，进入游离态(未被吸附的)金属离子溶液中，造成实验误差。其他传统方法如普通滤膜，重力沉降，透析法均无法实现脂质体-重金属复合物与游离重金属离子两者的分离。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种分离脂质体-重金属复合物的方法。本方法成本低，分离准确，速度快。本专利技术的技术方案如下：一种分离脂质体-重金属复合物的方法，包括以下步骤：(A).根据需要制备脂质体悬浊液，并与适量重金属离子混合，黑暗中震荡0.5-1小时，充分吸附；(B).常温常压下，将葡聚糖凝胶颗粒SephadexG-50在超纯水中充分溶胀一昼夜后，用滴管吸取凝胶颗粒，填充于1-10mL的注射器针筒中；(C).用吸附体系中的缓冲液平衡柱体数次；(D).将柱体于1000转/分钟下离心1-5分钟，去除柱体中部分水分；(E).向柱体逐滴加入待分离的混合溶液，并将柱体在低转速下离心，使样品进入柱体；(F).使用少量缓冲液作为洗脱液进行洗脱，于1000转/分钟离心1-5分钟，收集每次洗脱组分；(G).将洗脱液充分消解，定容，测定磷元素和重金属元素含量。本专利技术提供的脂质体为通过聚碳酸酯膜整粒之后的脂质体囊泡。本专利技术提供的震荡反应的转速为150--200转/分钟。本专利技术提供的葡聚糖凝胶颗粒为Pharmacia生产，粒径规格为Medium。本专利技术提供的缓冲液为三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液，用以调节pH值范围在7-8之间，浓度为0.01-0.1M之间。本专利技术提供的待分离样品占柱床体积0.1％-5％。本专利技术提供的低转速为200-600转/分钟。本专利技术提供的洗脱液的加入体积与加入柱体中待分离的样品体积相同。与现有技术相比本专利技术具有以下优点：1.本方法对反应设备要求不高，耗能低，方法简单易行，可操作性强，便于在实际中推广应用。2.本专利技术可以将脂质体-重金属复合物与游离重金属离子彻底分开，实现重金属离子在脂质体上吸附量的直接、准确测定。3.本方法处理成本低，本方法中待分离的脂质体，重金属离子在柱中无残留，回收率高，柱体可以循环使用，节省成本，具有显著的环境优势和经济优势。附图说明图1为本专利技术实施例1的洗脱曲线。图2为本专利技术实施例2的洗脱曲线。图3为苯专利技术实施例3的洗脱曲线。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术提供的分离脂质体-重金属复合物的方法及效果进行进一步说明，但并不因此而限制本专利技术。实施例1：脂质体-汞复合物与游离汞离子的分离脂质体采用溶剂挥发法制备，称量100mg的ePC，40mg胆固醇和10mgDPPG固体于100mL圆底烧瓶中，溶于5mL氯仿/甲醇溶液的混合液，将圆底烧瓶置于旋转蒸发仪上水浴蒸发溶剂，置于真空干燥箱干燥至少1小时。加入5-10mLTris-HCl缓冲溶液进行水化，直到所有脂质从瓶壁上全部脱落，形成均匀的没有明显颗粒的乳白色悬浊液。将脂质体悬浊液通过孔径为800nm的聚碳酸酯膜21次。汞金属离子储备液浓度为500mg/L，取0.1mL金属离子储备液，加入0.4mL脂质体悬浊液，将得到的混合溶液置于25±2℃恒温振荡箱中黑暗条件下振荡12小时，使吸附达到平衡。称取3-5gSephadexG-50葡萄糖凝胶干粉，置于洁净烧杯中，缓慢加入100mL超纯水，室温静置一昼夜，使之得到充分溶胀。吸取充分溶胀的葡萄糖凝胶颗粒-水混合物，填充于底部有两层滤纸的注射器针筒中，凝胶颗粒上层达到针筒刻度线，用缓冲液冲淋数次，使凝胶颗粒平衡。将柱体于1000转/分钟下离心1-5分钟，去除柱体中部分水分。向柱体逐滴加入占柱床体积0.1％-5％的待分离混合溶液，并将柱体以200-600转/分钟的转速离心，使样品进入柱体。使用与上样量等量的缓冲液进行洗脱，于1000转/分钟离心1-5分钟，重复洗脱过程，收集每次洗脱组分。将各洗脱组分经过水浴煮沸消解，直至浑浊溶液成澄清透明，超纯水定容至10mL，使用电感耦合等离子体(ICP)同时测定汞元素含量和磷元素含量之后绘制洗脱曲线。洗脱曲线中与磷元素一同洗脱下来的汞元素即代表被脂质体吸附的汞元素，磷元素全部洗脱下来之后又出现汞元素的峰为游离态未被吸附的汞离子被洗脱下来。收集13-16次洗脱组分之后用大量洗脱液充分淋洗柱体4-6次，可以保证柱体中重金属离子和脂质体全部被洗脱。柱体可以重复使用。实施例2：脂质体-镉复合物与游离镉离子的分离与实施例1的不同之处在于使用脂质体吸附镉离子，使用本方法分离脂质体-镉复合物与游离的镉离子。实施例3：脂质体-镍复合物与游离镍离子的分离与实施例1的不同之处在于使用脂质体吸附镍离子，使用本方法分离脂质体-镍复合物与游离的镍离子。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离脂质体‑重金属复合物的方法，其特征在于包括以下步骤：(A).根据需要，制备脂质体悬浊液，并与重金属离子混合，黑暗中震荡0.5‑1小时，充分吸附；(B).将葡聚糖凝胶颗粒Sephadex G‑50在常温常压下，用超纯水充分溶胀一昼夜，去除浮在水面颗粒，吸取凝胶颗粒，填充于1‑10mL的注射器针筒中。(C).用体系中缓冲液平衡柱体数次；(D).将柱体于1000转/分钟下离心1‑5分钟，去除柱体中部分水分；(E).向柱体逐滴加入待分离的混合溶液，并将柱体与低转速下离心，使样品进入柱体；(F).使用少量的缓冲液作为洗脱液进行洗脱，于1000转/分钟离心1‑5分钟，收集每次洗脱组分；(G).将洗脱液充分消解，定容，测定磷元素和重金属元素含量。

【技术特征摘要】
1.一种分离脂质体-重金属复合物的方法，其特征在于包括以下步骤：
(A).根据需要，制备脂质体悬浊液，并与重金属离子混合，黑暗中震荡0.5-1小时，充分吸附；
(B).将葡聚糖凝胶颗粒SephadexG-50在常温常压下，用超纯水充分溶胀一昼夜，去除浮在水面颗粒，吸
取凝胶颗粒，填充于1-10mL的注射器针筒中。
(C).用体系中缓冲液平衡柱体数次；
(D).将柱体于1000转/分钟下离心1-5分钟，去除柱体中部分水分；
(E).向柱体逐滴加入待分离的混合溶液，并将柱体与低转速下离心，使样品进入柱体；
(F).使用少量的缓冲液作为洗脱液进行洗脱，于1000转/分钟离心1-5分钟，收集每次洗脱组分；
(G).将洗脱液充分消解，定容，测定磷元素和重金属元素含量。
2.根据权利要求1所述分离脂质体-重金属复合物的方法，其特征在于：步骤(A)所述脂质体为通过聚碳
酸酯膜整粒之后的脂质体囊泡。
3.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新会，于艳军，侯静，梁宝翠，王娟，赵胜男，
申请(专利权)人：北京师范大学，
类型：发明
国别省市：北京;11