一种交联线粒体靶向阿霉素脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体，由盐酸阿霉素、磷脂、胆固醇和可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料组成，所述盐酸阿霉素与磷脂的质量比为1：(5～20)，所述磷脂、胆固醇、可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的摩尔比为(50～90)：(2～47)：(3～8)，所述可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的结构式为所述结构式中，n＝10，12，14，16。本发明专利技术还提供了上述脂质体的制备方法。本发明专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体不仅具有线粒体靶向性，而且肿瘤细胞摄取量大，安全性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物及其制备
，具体涉及一种抗肿瘤药物脂质体及其制备方 法。
技术介绍
化疗是治疗癌症的主要手段之一，但目前癌症患者化疗后的死亡率仍然居高不 下。多药耐药（multidrugresistance，MDR)是临床上化疗失败的主要原因之一。阿霉素是 癌症化疗常用的药物，但阿霉素等化疗药物的大量使用容易使细胞产生耐药性。肿瘤细胞 的耐药性分为先天性与后天获得性两大类。研究表明，肿瘤细胞基因或基因表型发生变化 引起细胞凋亡通路改变，最终导致肿瘤先天耐药性的出现。线粒体是细胞的"动力工厂"，同 时也是"自杀武器库"，能启动细胞凋亡通路，因而肿瘤细胞先天性耐药与线粒体功能异常 密切相关。以线粒体作为抗癌药物传递系统的靶点，将传统化疗药物递送到肿瘤细胞的线 粒体、促使线粒体启动凋亡通路，释放细胞色素C，激活caSpaSe9/3,从而实现肿瘤细胞"自 杀"式死亡，这将是克服肿瘤先天性耐药性，提高肿瘤治疗效果的一种有效手段。 CN104523723A提供了一种由嵌段共聚物叶酸-聚乙二醇-聚天冬氨酸、线粒体 靶向阿霉素、三苯基磷（TPP-D0X)和阿霉素构成的线粒体靶向胶束载药系统。该胶束载药 系统具有线粒体靶向功能，但在将药物阿霉素递送到肿瘤细胞线粒体的过程中存在以下问 题：（1)叶酸是疏水性分子，在水溶液环境中，根据亲疏水特性，叶酸分子更倾向于分布在 胶束的疏水内核中而不是分布在胶束的亲水外层，从而导致细胞对叶酸修饰的载体摄取率 低下，影响抗肿瘤效果；(2)三苯基磷是一种有机磷农药，对眼、上呼吸道、粘膜和皮肤有刺 激性，且有神经毒性。毒理学研究资料显示，LD50700mg/kg(大鼠经口），800~1600mg/ kg(小鼠经口），LC5012167mg/m3,4小时（大鼠吸入）。因此将三苯基磷用于药用材料存在 安全隐患。目前未见有关具有线粒体靶向功能的阿霉素脂质体报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种交联线粒体靶向阿霉素脂质体 及其制备方法，以使该脂质体不仅具有线粒体靶向性，而且肿瘤细胞摄取量大，安全性高。 本专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体，由盐酸阿霉素、磷脂、胆固醇和可交 联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料组成，所述盐酸阿霉素与磷脂的质量比为1 : (5~ 20)，所述磷脂、胆固醇、可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的摩尔比为（50~ 90) : (2~47) : (3~8)，所述可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的结构式为 所述结构式中，n= 10,12,14,16。 上述交联线粒体靶向阿霉素脂质体，所述磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵 磷脂中的一种。 本专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体的制备方法，工艺步骤如下： (1)可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的制备 以脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺、多肽D- (KLAKLAK) 2-C5和有机 碱为原料，多肽d-(klaklak)2-c5、有机碱、脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺 的摩尔比为（1~3) : (1~3) :1，所述多肽D-(KLAKLAK) 2-C5的氨基酸序列为序列表中SEQ IDN0 :1 所述； 在氮气保护下，将脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺、有机碱和第 一溶剂混合均匀得到第一溶液，所述第一溶剂的用量应使第一溶液中脂肪酸酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇-马来酰亚胺的浓度为100~300mmol/L; 在氮气保护下，将多肽D- (KLAKLAK)2-(：5溶于第二溶剂中得到第二溶液，第二溶剂 的用量应使第二溶液中多肽D-(KLAKLAK)2-(：5的浓度为100~900mol/L; 将第一溶液和第二溶液混合，在避光、搅拌下于20~40°C反应12~48小时，反应 结束后除去溶剂得到固态物质，将所得固态物质用氯仿或二甲亚砜溶解后过滤掉不溶物， 收集滤液，除去滤液中的溶剂即得到可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料； (2)交联线粒体靶向阿霉素脂质体的制备 将磷脂、胆固醇和步骤（1)制备的可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料溶 于第三溶剂中得到第三溶液，所述磷脂、胆固醇、可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材 料的摩尔比为（50~90) : (2~47) : (3~8)，所述第三溶剂用量应使所得第三溶液中磷脂 浓度为1~10mm〇l/L，去除第三溶剂得到脂膜，将所得脂膜与浓度为250~350mmol/L的硫 酸氨缓冲液混合并经超声分散均匀得到脂质体悬液，所述硫酸氨缓冲液的用量应使脂质体 悬液中磷脂浓度为〇. 1~10mm〇l/L，将所得脂质体悬液装入半透膜中，将半透膜浸入去离 子水中透析4~12小时，透析结束后，将透析后的脂质体悬液与浓度为1~10mg/mL的阿 霉素盐酸盐水溶液混合均匀得到混合悬液，所述阿霉素盐酸盐水溶液的用量应使所得混合 悬液中盐酸阿霉素与磷脂的质量比为1 : (5~20)，然后在持续通入氧气和搅拌的条件下向 所得混合悬液中加入乙二硫醇并反应〇. 5~24小时，加入的乙二硫醇与混合悬液中可交联 线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的摩尔比为（1~5) :1，反应时间届满后，将游离药物 和未反应的乙二硫醇去除，即得到交联线粒体靶向阿霉素脂质体。 上述方法中，所述脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺为脂肪酸酰磷 脂酰乙醇胺为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇2000-马来酰胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰胺、二月桂 酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰胺中的一种。 上述方法中，步骤（1)中所述有机碱为三乙胺、4-二甲氨基吡啶或者N、N-二异丙 基乙胺中的任一种。 上述方法中，步骤（1)中所述第一溶剂为二氯甲烷或氯仿。 上述方法中，第二溶剂为甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种。 上述方法中，步骤（2)中所述第三溶剂为三氯甲烷，或二氯甲烷与甲醇以体积比 (1~3) :1组合得到的组合溶剂。 与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果： 1、本专利技术提供了一种新的具有交联结构和线粒体靶向功能的阿霉素脂质体。 2、本专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体中的药用材料可交联线粒体靶向聚 乙二醇化磷脂具有聚乙二醇链，从而具有长循环功能功能（实施例6)，并具有可交联结构 巯基，脂质体在加入乙二硫醇并通氧气条件下以共价键的形式形成二硫键交联结构，使得 脂质体进入人体后在血液循环中具有良好的稳定性，不容易解体，有利于脂质体跨越血管 屏障递送药物。同时由于肿瘤血管壁上皮细胞间隙比正常血管壁的上皮细胞间隙大，稳定 的载药脂质体在体内的循环时间长有利于载药脂质体从肿瘤血管渗出，通过增强渗透与滞 留效应（EPR效应）使更多的载药脂质体进入肿瘤组织，因此具有更好的肿瘤组织靶向性， 有利于提高耐药肿瘤治疗效果。 3、本专利技术所述交联线粒体靶向阿霉素脂质体进入肿瘤组织间隙后，由于该载药脂 质体zeta电位为正，更容易通过静电作用吸引显负电荷的肿瘤细胞摄取，加之载药脂质体 具有交联结构，稳定性高，能避免脂质体解体，避免药物提前释放，顺利穿透肿瘤细胞外基 质和肿瘤细胞膜的质膜屏障本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种交联线粒体靶向阿霉素脂质体，其特征在于所述脂质体由盐酸阿霉素、磷脂、胆固醇和可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料组成，所述盐酸阿霉素与磷脂的质量比为1：(5～20)，所述磷脂、胆固醇、可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的摩尔比为(50～90)：(2～47)：(3～8)，所述可交联线粒体靶向聚乙二醇化磷脂药用材料的结构式为：所述结构式中，n＝10，12，14，16。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，顾忠伟，姜雷，孙家维，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51