一种含硫桥复杂环系生物碱类化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种含硫桥复杂环系生物碱类化合物及其制备方法和用途。本发明专利技术从菌株青霉Penicillium sp.HDN13-309中生产出一种新的含硫桥复杂环系生物碱类化合物。经实验证实，该类化合物可作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂。

【技术实现步骤摘要】
一种含硫桥复杂环系生物碱类化合物及其制备方法和用途
：本专利技术涉及用一株青霉Penicilliumsp.HDN13-309(保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，100101保藏编号：CGMCC9429保藏日期：2014年7月9日)生产一种含硫桥复杂环系生物碱类化合物的方法；本专利技术还涉及该化合物在抗肿瘤方面的用途。
技术介绍
：本专利技术人从菌株青霉Penicilliumsp.HDN13-309(保藏编号是：CGMCC9429)液体发酵产物中分离出一种含硫桥复杂环系生物碱类化合物。研究发现所示化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此有关的药物。
技术实现思路
：本专利技术旨在提供一种结构新颖的具有抗肿瘤活性的新化合物。其结构式是式I具体实施方式：其结构特征是：式I是由一个比较罕见的氮氧杂环耦合一个六元环以及一个二酮哌嗪环组成的结构复杂且新颖的结构，除此之外，还含有一个二硫桥和氯原子，丰富了式I的复杂度。本专利技术的式I化合物可通过微生物发酵培养来获取含有该类化合物的发酵物，然后从发酵物中采用SephadexLH20凝胶柱层析，中压MPLC，半制备HPLC等方法分离纯化得到。本专利技术的下述实施例中列举了利用青霉Penicilliumsp.HDN13-309(保藏编号是：CGMCC9429)制备本专利技术式I化合物的实例。在如下的实施例中所指的化合物I的化学结构(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)是：式I化合物I实施例1化合物I的发酵生产及分离精制1发酵生产生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取菌株青霉Penicilliumsp.HDN13-309(保藏编号是：CGMCC9429)适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在28摄氏度培养箱中培养5天。取斜面培养5天的菌株青霉Penicilliumsp.HDN13-309适量，接种到装有300mL培养基[培养基组成(克/升)：麦芽糖20.0，葡萄糖10.0，甘露醇20.0，味精10.0，酵母膏3.0，玉米浆1.0，KH2PO40.5，MgSO4·7H2O0.3，pH调节至6.5]的1000mL锥型瓶中，在28摄氏度条件下静置培养30天，获得发酵产物。2浸膏的获得用纱布将发酵液和菌丝体分离。将菌丝体用丙酮浸提三次，减压浓缩至无丙酮，所得水相用等量乙酸乙酯萃取三次。发酵液直接用等量乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩，得粗浸膏，共8克。3化合物的分离精制浸膏(8克)用甲醇溶解后，以二氯甲烷和甲醇为洗脱剂进行正相硅胶分离，分为6个组分，然后组分4以甲醇为溶剂进行LH20柱层析，分为5个流份。组分5先以C-18ODS中压柱层析，以甲醇-水为溶剂进行梯度洗脱，又分为10个组分，最后组分8经反相半制备高效液相色谱(甲醇：水＝55∶45)得化合物I(20mg)。化合物I白色固体，分子式C21H21N2O8ClS2，HR-ESI-MSm/z：551.0335[M+Na]+，计算值551.0326。IR(KBr)υmax3510，1660，1625，1606，1445，1384，1098，1030，709，670，652cm-1。1H和13C-NMR数据见表1。表1化合物I(ind6-DMSO)的1H和13CNMR数据(500和125MHz)aa)本表信号归属基于DEPT、HMQC及HMBC图谱解析结果。碳信号的多重度利用DEPT方法确定并分别用s(单重峰)、d(二重峰)、t(三重峰)和q(四重峰)表示。实施例2化合物的抗肿瘤活性测试1实验样品及实验方法被测样品溶液的配制测试样品为上述实施例1中分离精制的化合物I纯品。精密称取适量样品，用DMSO配制成所需浓度的溶液，供测活性。SRB法：取对数生长期的Hela、HCT116、HO-8910和MGC803细胞用新鲜的RPMI-1640培养基配制成密度为每毫升2×105个细胞的细胞悬液，按每孔200微升接种于96孔板中，每孔加入2μL不同浓度的样品或空白溶液，37℃下培养72小时。取药物作用下培养后的细胞，首先在光学显微镜下观察药物处理引起的形态学变化，判断有无细胞周期抑制，细胞凋亡或细胞坏死的形态学特征。每孔细胞中加入80％三氯醋酸50μL，置于4℃固定1小时，用水冲洗5次并空气干燥。每孔加入0.4％SRB的醋酸溶液50μL并在室温静置30分钟。用1％醋酸水清洗4次，除去未结合的游离SRB染料。每孔加入150μLTris缓冲液(10mmol/L，pH10.5)溶解蛋白结合染料并利用MD公司产SPECTRAMAXPlus型酶标仪测定每孔在520nm处的光密度(OD)值。在同一块96孔板中样品的每个浓度均设置三孔，另设三孔空白对照和无细胞调零孔(如果药物有颜色要做相应药物浓度无细胞调零)。各孔OD值先做相应无细胞调零，再取三孔平均OD值按IR％＝(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100％式计算每个浓度下的细胞增殖抑制率(IR％)，并采用bliss法计算出半数抑制率IC50。MTT法：取对数生长期的HL-60和K562肿瘤细胞，将细胞密度调至每毫升2×105个细胞，按每孔200μL加到96孔细胞培养板中，于37℃通入5％CO2的培养箱中培养4h。样品分别设定5个浓度梯度，每个浓度设3个平行样，同时设阳性、阴性对照，每孔加样品液或空白液各2μL，培养72h，然后每孔加MTT液10μL，继续培养4小时，37℃、2000转/分钟离心8分钟，吸去上清。每孔加入DMSO各100μL，在微量振荡器上振荡15分钟，至结晶完全溶解后，酶标仪测定每孔570nm处的吸光值(OD值)。取三孔平均OD值按IR％＝(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100％式计算样品对细胞增殖的抑制率(IR％)，并采用bliss法计算出半数抑制率IC50。2实验结果表2化合物I对多种肿瘤细胞的体外细胞毒活性3结论化合物I对HCT116具有较好的抗肿瘤活性，并对多种肿瘤细胞模型均有抑制活性，这为开发新型抗癌药提供了化合物基础。本文档来自技高网...

【技术保护点】
化合物结构如下式所示化合物I

【技术特征摘要】
1.化合物结构如下式所示2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征是发酵培养青霉Penicilliumsp.HDN13-309，获取含有上述化合物的发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该类化合物。3.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李德海，朱美林，李静，顾谦群，朱天骄，车茜，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37