【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞系专利
本专利技术涉及适合用于在将非天然氨基酸掺入蛋白质中使用的稳定的真核细胞系并且涉及制备它们的方法。本专利技术也涉及具有掺入的非天然氨基酸的蛋白质，该蛋白质适于与其他蛋白质、药物或其他部分共轭，例如以允许半衰期延长并且涉及相应的蛋白质共轭物。进一步地，本专利技术涉及新颖的氨基酸衍生物。专利技术背景将非天然氨基酸(nnAA)位点-特异性引入靶蛋白质在产生官能化蛋白质共轭物方面提供了超过非特异性方法的显著优点(王(Wang)等人，2011)。可获得多种包含如下部分的非天然氨基酸，这些部分为共轭化学提供生物正交位点并且使特异性反应能够在这些位点发生。在该共轭位点的位置上进行控制使通过避免活性位点以及必要蛋白质功能结构域而具有最佳功能的产物成为可能。此外，这允许产生均匀并且可预测地修饰的产物，其改善该产物的功能性特征以及纯化。将nnAA位点特异性掺入细菌细胞中已通过氨基酸取代途径以及通过工程化正交氨酰基tRNA合成酶来实现，该正交氨酰基tRNA合成酶仅承担带有非天然氨基酸的其同源tRNA。该非天然氨基酸在靶蛋白质中的位置可通过在该基因序列内的多种密码子指定，但...
【技术保护点】
一种用于使真核细胞系稳定化的方法，该真核细胞系表达PylRS和tRNAPyl并且适于掺入对包含一个或多个由无义密码子编码的非天然氨基酸的靶蛋白质进行编码的基因，该方法包括在tRNAPyl表达对细胞生活力和/或细胞生长的不利影响被减小或被消除的条件下培养所述细胞系。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.09.24 US 61/705,116;2013.08.05 US 61/862,4951.一种用于使真核细胞系稳定化的方法，该真核细胞系表达PylRS和tRNAPyl并且适于掺入对包含一个或多个由无义密码子编码的非天然氨基酸的靶蛋白质进行编码的基因，该方法包括在tRNAPyl表达对细胞生活力和/或细胞生长的不利影响被减小或被消除的条件下培养所述细胞系，其中tRNAPyl对细胞生活力和/或细胞生长的不利影响被减小或消除的条件包括如下条件：培养该细胞系的培养基中存在诱饵氨基酸，该诱饵氨基酸是PylRS的底物但不能掺入延伸的蛋白质链中，其中所述诱饵氨基酸选自：式VIIB.1；式VIIB.2；和式VIIB.4。2.一种用于产生稳定的真核细胞系的方法，该真核细胞系能够表达PylRS以及tRNAPyl并且适于掺入对包含一个或多个由无义密码子编码的非天然氨基酸的靶蛋白质进行编码的基因，该方法包括：(a)在一个或多个步骤中将编码PylRS以及tRNAPyl的基因引入真核细胞系，并使得PylRS以及tRNAPyl稳定表达于所述细胞系中；(b)培养或选择所得的细胞系，所述培养或选择是在下述条件下进行：存在诱饵氨基酸的情况下，该诱饵氨基酸是PylRS的底物，但不能够掺入延伸的蛋白质链中，从而减少tRNAPyl对细胞生活力和/或细胞生长的不利影响，所述所述诱饵氨基酸选自：式VIIB.1；式VIIB.2；和式VIIB.4。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，该方法还包括(c)将对包含一个或多个非天然氨基酸的靶蛋白质进行编码的基因引入所述真核细胞系；并且(d)在不存在所述诱饵氨基酸的情况下表达该靶蛋白质...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·H·格拉布斯坦，M·范布伦特，M·马瑞利，W·布拉迪，J·约翰逊，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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