一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白小公猪的骨髓细胞，培养液培养20-28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得细胞形态均一的F3代的长白仔猪bMSCs；利用携带LargeT慢病毒液侵染F3代的长白仔猪bMSCs，细胞筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；将稳定表达Egfp的细胞株，传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系。本发明专利技术获得了能支持猪bMSCs稳定培养的系统，促使细胞体外快速稳定增殖，并维持原代的生物学特征，证明得到了永生的长白仔猪bMSCs，可以深入研究猪bMSCs生物学性质和应用于药物或疫苗研发。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术涉及一种长白仔猪骨髓间充质干细 胞永生系建立用培养液及使用培养液建立长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的方法和应 用。
技术介绍
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs)是具有多向分化的成体干细胞， 它来源于中胚层，广泛分布在各个组织器官中。MSCs在不同的诱导条件下，可以生成脂肪、 骨、软骨、肌肉、皮肤、血管、神经以及肝细胞等。此外，MSCs还表现出体外分离和培养容易、 增殖和分化能力强、免疫原性低的特点，所以被认为是细胞治疗比较理想的细胞资源。研究 证明MSCs膜表面存在表达（CD29、CD44、CD73(SH3/4)、CD90、CD105(SH2))等抗原，不表达 造血干细胞的特异表面标记（⑶45)及内皮细胞表面标志（⑶31、⑶34)等特征。 骨髓来源的间充质干细胞（bone MSCs，bMSCs)是MSCs特征的代表。不仅广泛在 临床医学上研究，同时在猪业生产相关实验研究中也有重要价值。然而成体细胞在体外增 殖能力是有限的，bMSCs在体外经历了一定时期增殖以后，也将进入一种生长停滞的状态本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系建立用的培养液，其特征在于，所述培养液为：添加了12～18％FBS，50～60μMβ‑巯基乙醇，0.8～1.2％ITS，0.8～1.2％L‑谷氨酰胺，0.8～1.2％核苷酸，0.8～1.2％非必需氨基酸，0.8～1.2％必需氨基酸，45～55μg/mL维生素C，5～15ng/mL表皮生长因子，5～15ng/mL碱性成纤维生长因子和0.8～1.2％双抗的MEM培养基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张守全，白银山，冯美莹，卫恒习，李莉，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44