本文报道的是用于在原核细胞中产生多肽的方法，其包括在化学成分明确的基础生长培养基中培养包含编码多肽的一种或多种核酸的原核细胞并从所述原核细胞或所述原核细胞的细胞周质或从培养基中回收多肽的步骤，其中所述原核细胞是氨基酸营养缺陷型恢复的原核细胞，其中所述氨基酸营养缺陷型恢复的原核细胞在相同的培养条件下和在相同的生长培养基中相比于未恢复的原核细胞需要向所述生长培养基中补充较少的氨基酸，并且其中所述化学成分明确的基础生长培养基不含对应于已经在营养缺陷型恢复的原核细胞中恢复的营养缺陷型的氨基酸。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株用于重组产生多化的用 途 本专利技术是重组多肤产生的领域。本文更精确地报道了使用营养缺陷型恢复的原核 菌株在化学成分明确的基础生长培养基中重组产生非糖基化多肤的方法。 发巧背景 近年来，治疗性多肤的生产稳步增加并且很可能的是在不久的将来治疗性多肤将 成为可用于治疗多种疾病的最大治疗组。治疗性多肤的影响来自其特异性，如特定的祀标 识别和/或结合功能。 细胞培养用于发酵过程中W产生物质，特别是多肤。在其中细胞培养物未被遗传 修饰并且形成其自身的代谢产物的过程与其中生物W它们产生更大量的其自身物质如多 肤或产生外源物质的运种方式被遗传修饰的过程之间进行区分。利用保证生物存活并使得 能够产生想要的祀标化合物的营养培养基供应产生物质的生物。许多培养基因使得能够最 优培养特定宿主的运些目的而闻名。 化学成分明确的基础生长培养基在培养重组细胞中用于重组产生治疗性多肤中 的使用是有利的。其使得能够为所产生的治疗性多肤容易地开发下游加工和纯化，由于最 小化的原材料差异提供最稳健的生产过程并降低产品成本。 化学成分明确的基础生长培养基不包含游离氨基酸，并且其需要使用原养型的细 胞系，其具有完整的代谢途径W从化学成分明确的基础生长培养基的可用成分产生所需的 氨基酸。 例如，当大肠杆菌巧.coli)用作宿主细胞系时，一般使用野生型菌株，如MG1655、 W3110或化21。运些菌株显示良好的生长特性，但是较次等的产品效价。 当与野生型菌株相比时，通过非定点诱变和选择已获得的突变体原核菌株在其基 因组DNA中显示明显差异。已经基于可W获得的最大产物效价选择了突变株。因为突变株 携带许多营养缺陷型，所W它们不能用于在化学成分明确的基础生长培养基中培养。突变 株需要氨基酸的补料W补偿其营养缺陷型，导致增加的培养成本。 US5, 932, 439报道了大肠杆菌巧scherichiacoli)K-12菌株用于产生重组蛋白 质。 发巧概沐 通过恢复营养缺陷型原核菌株其一种或多种营养缺陷型，所述营养缺陷型恢复的 菌株可W在化学成分明确的基础生长培养基上生长，其中不再需要向所述化学成分明确的 基础生长培养基中加入对应于已经恢复的营养缺陷型的物质。在昂贵物质的情况下，可W 实现产品成本的降低并且可W更经济地产生重组多肤。 除了在缺少对应于已经恢复的营养缺陷型的物质的情况下恢复在化学成分明确 的基础生长培养基上生长的能力外，已经发现与未恢复的菌株相比，可W维持或甚至增加 可获得的产物效价。此外已经发现使用营养缺陷型恢复的原核菌株可获得的产物效价高于 利用对应的原养型野生型菌株可获得的产物效价。 不希望受该理论束缚，当与对应的原养型野生型菌株（其中未曾进行该缺失和恢 复）相比时，假定本文报道的氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株具有不同的代谢和代谢 流。因此，原核菌株内某些酶的失活和再激活对菌株的完整代谢具有可检测的/显著的影 响，其例如可W在与对应的原养型野生型菌株相比该菌株的增加的生产力中看到。 本文报道的一个方面是氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株，其特征在于 -已经恢复了必需氨基酸代谢途径中的至少一种缺陷，和 -菌株可W在化学成分明确的基础生长培养基中生长，所述化学成分明确的基础 生长培养基不含对应于已经在营养缺陷型恢复的原核菌株中恢复的营养缺陷型的氨基酸。 在一个实施方案中，营养缺陷型恢复的原核菌株是营养缺陷型恢复的大肠杆菌菌 株。 本文报道的一个方面是氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株，其特征在于 -已经恢复了必需氨基酸代谢途径中的至少一种缺陷，和 -细胞可W在化学成分明确的基础生长培养基中生长，所述化学成分明确的基础 生长培养基不含对应于已经在营养缺陷型恢复的原核细胞中恢复的营养缺陷型的氨基酸。 在一个实施方案中，营养缺陷型恢复的原核细胞是营养缺陷型恢复的大肠杆菌细 胞。 本文报道的营养缺陷型恢复的原核菌株/细胞可W用于重组产生治疗性多肤的 方法中，其中与非营养缺陷型恢复的原核菌株/细胞相比，不需要补充至少一种氨基酸残 基。 本文报道的一个方面是用于在（重组）原核细胞中产生多肤的方法，其包括W下 步骤： -在化学成分明确的基础生长培养基中培养（重组）原核细胞从原核细胞或原核 细胞的细胞周质或从培养基中回收多肤，所述（重组）原核细胞已经通过将恢复亲本原核 细胞的氨基酸营养缺陷型的核酸引入到亲本原核细胞的基因组中而被获得，所述（重组） 原核细胞包含编码多肤的一种或多种核酸。本文报道的一个方面是用于在（重组）原核细胞中产生多肤的方法，其包括W下 步骤： -恢复对至少一种氨基酸营养缺陷的原核细胞的至少一种氨基酸营养缺陷型， -在化学成分明确的基础生长培养基中培养氨基酸营养缺陷型恢复的（重组）原 核细胞，，并从原核细胞或原核细胞的细胞周质或从培养基中回收多肤，所述（重组）原核 细胞包含编码多肤的一种或多种核酸。 本文报道的一个方面是用于在（重组）原核细胞中产生多肤的方法，其包括W下 步骤： -在化学成分明确的基础生长培养基中培养（重组）原核细胞，其包含编码多肤的 一种或多种核酸，并从原核细胞或原核细胞的细胞周质或从培养基中回收多肤， 其中所述（重组）原核细胞是氨基酸营养缺陷型恢复的原核细胞。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，营养缺陷型恢复的原核细胞具有 至少一种其他（未恢复的）氨基酸营养缺陷型。该营养缺陷型可W用于在引入编码目的多 肤（所述多肤）的一种或多种核酸后选择重组体/转化体。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，相比于在相同培养条件下和相同 生长培养基中未恢复的原核细胞（亲本细胞），氨基酸营养缺陷型恢复的原核细胞的生长 需要向生长培养基中补充较少的氨基酸。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，所述化学成分明确的基础生长培 养基不含对应于已经在营养缺陷型恢复的原核细胞中恢复的营养缺陷型的氨基酸。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，相比于非营养缺陷型恢复的原核 细胞（亲本/亲本细胞）的培养所需，营养缺陷型恢复的原核细胞的培养需要向生长培养 基中补充较少的一种或两种或=种或四种氨基酸。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，在培养过程中不添加对应于已经 在营养缺陷型恢复的原核细胞中恢复的营养缺陷型的氨基酸。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，在缺少对应于已经在营养缺陷型 恢复的原核细胞中恢复的营养缺陷型的氨基酸的情况下进行培养。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，原核细胞是大肠杆菌细胞。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，多肤是全长抗体链、单链抗体、单 结构域抗体、scFv、scF油、或上述之一与非抗体多肤的缀合物。 在用于产生多肤的所有方法的一个实施方案中，多肤是scFv或scF油与细胞毒性 剂的缀合物。 本文报道的一个方面是氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株用于（重组）产生多肤 的用途。 在一个实施方案中， -在氨基酸营养缺陷型恢复的原核菌株中，已经恢复了必需氨基酸代谢途径中的 至少一种缺陷，和 -氨基酸营养缺陷型恢复的菌株可W在化学成分明确的基础生长培养基中生长， 所述化学成分明确的基础生长培养基不含对应于已经在营养缺陷型恢复的原核菌株中恢 本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于在原核细胞中产生多肽的方法，其包括以下步骤：‑在化学成分明确的基础生长培养基中培养原核细胞，并从所述原核细胞或所述原核细胞的细胞周质或从培养基中回收多肽，所述原核细胞已经通过将恢复亲本原核细胞的氨基酸营养缺陷型的核酸引入到亲本原核细胞的基因组内获得，所述原核细胞包含编码多肽的一种或多种核酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·科佩茨基，C·尚茨，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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