本发明专利技术涉及一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，属于生物技术领域。本发明专利技术所述的提取真菌基因组DNA的试剂盒，包括真菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱的具体步骤，最后所得液体为真菌基因组DNA,于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。常规的真菌基因组DNA的提取步骤繁琐，耗时较长，一般需要18h左右才能提取到真菌基因组DNA。利用本发明专利技术所述的方法，与常规的真菌基因组提取方法相比仅需要7h左右即可提取到真菌基因组DNA，不仅节省了大量提取时间，还能够更有效、快速、经济地提取到真菌基因组DNA。同时适用于商业化生产，具有一定的经济价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，属于生物
技术背景 真菌为低等真核生物，种类庞大而多样。据估计，全世界约有真菌150万种，已被 描述的约8万种。真菌在自然界分布广泛，存在于土壤、水、空气和生物体内外，与人类生产 和生活有着非常密切的关系。许多真菌在自然界的碳素和氮素循环中起主要作用，参与淀 粉、纤维素、木质素等有机含碳化合物及蛋白质等含氮化合物的分解。有些真菌如蘑菇、草 菇、木耳、麦角、虫草、茯苓等可直接供作食用和药用，或在发酵工业、食品加工业、抗生素生 产中具有重要作用。然而，也有些种类引起许多植物特别是重要农作物的病害，如水稻稻瘟 病、小麦锈病、玉米腥黑穗病、果树病害等。少数真菌甚至是人类和动物的致病菌，如白色假 丝酵母Candida albicans等。因此，合理利用有益真菌，控制和预防有害真菌具有重要意 义。 完整真菌基因组的测序为真核界乃至整个生物界进化研宄提供了空前的机会，重 要的人类病原菌、植物病原菌和腐生菌基因组序列的测定，不仅推动繁殖方式的选择、顶端 生长、致病机制、宿主-真菌相互作用等基础研宄，还能更好地寻找抗菌药物靶点，促进疫 苗和抗菌药物的开发研制。应用比较基因组学方法研宄真菌基因组有助于人们理解不同生 境下真菌的生理特性、形态差异、进化和代谢多样性。 因此，为了更好地研宄真菌的遗传信息，需要提取真菌基因组DNA。研制一种适用 于真菌基因组DNA提取的方便、快捷、实用的方法，解决使用常规方法所获得的DNA样品提 取时间长的问题。此外，有效的提取真菌基因组DNA，能够为进行基因分析与基因克隆提供 重要保证，从而丰富基因组学的研宄内容。
技术实现思路
： 本专利技术提供一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，与传统方法相比，利用该方法能够快 速提取真菌基因组DNA，适合于商业化生产。 基于一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，包括真菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋 白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，具体步骤如下： 真菌细胞的破碎：挑取真菌样本于研钵中，加入液氮研磨成粉状，将粉末加入I. 5ml离 心管中，加入200-700ml Buffer A, 20-50 μ I Buffer B, 10-50 μ I Buffer C,于50-6(TC温 浴 5-10h〇 0嫩的游离与杂蛋白的抽除：加入200-70(^181^€610抽提，10000-15000印111/ min离心5_15min，将上清转移至干净的1.5ml离心管中。加入500 μ I Buffer E抽提， 10000-15000rpm/min离心5_15min，将上清转移至干净的I. 5ml离心管中。 DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后 加入DNA吸附柱，10000-15000rpm/min离心l-2min，弃废液，加入200-700 μ 1去蛋白液， 10000-15000rpm/min 离心 l-2min，弃废液，加入 200-700 μ 1 漂洗液，10000-15000rpm/min 离心l-2min，弃废液，加入200-700 μ 1漂洗液，10000-15000rpm/min离心l-2min，弃废液， 10000-15000rpm/min 离心 l_2min，静置吹干。 DNA洗脱：往吸附柱中加入30 μ 1洗脱液，10000-15000rpm/min离心l-2min，所得 液体为真菌基因组DNA，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。 试剂的配方如下： Buffer A :0. 1-0. 2M 氯化钠（NaCL)、0. 1-0. 2M 三羟甲基氨基甲烷（Tris)、0. 05-0.1 M 乙 二胺四乙酸（EDTA)，PH = 8-9。 Buffer B:蛋白酶 K(20-50mg/ml) Buffer C:5-15 %质量体积比的十二烷基硫酸钠（SDS) Buffer D:酷：氯仿：异戊醇的体积比为25:24:1 Buffer E:氯仿：异戊醇的体积比为24:1 沉淀剂：l_5ml 2-lOmol/L Nacl，60_100ml 无水乙醇。 去蛋白液：3-6M盐酸胍，10-30mM三羟甲基氨基甲烷（Tris)，pH = 6. 0-7. 0,用前 加乙醇，使得乙醇在去蛋白液中的终浓度为30-40 %。 漂洗液：20-50mM 氯化钠（NaCL)，2-5mM 三羟甲基氨基甲烷（Tris)，pH = 7. 0-8. 0， 80-90%比重无水乙醇 洗脱液：10-20mM三羟甲基氨基甲烷（Tris)，pH = 8. 0-9. 0 DNA吸附柱为硅胶模吸附柱，购自北京天恩泽公司 本专利技术的显著优点： 常规的真菌基因组DNA的提取步骤繁琐，耗时较长，一般需要18h左右才能提取到真菌 基因组DNA。一种提取真菌基因组DNA的试剂盒与常规的真菌基因组提取方法相比仅需要 7h左右即可提取到真菌基因组DNA，不仅节省了大量提取时间，还能能够更有效、快速、经 济地提取到真菌基因组DNA。同时适用于商业化生产，具有一定的经济价值。【附图说明】 图1为利用本试剂盒提取的真菌基因组DNA的电泳检测图。 具体实施例 图1中，泳道1，2,3分别是利用本试剂盒提取的酵母菌、镰刀菌、青霉菌的基因组 DNA,泳道 4 为 TAKARA 公司的 DL4500Marker。 一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，具体步骤如下： (1)真菌细胞的破碎：分别挑取0. 5g酵母菌、镰刀菌、青霉菌样本于研钵中，加入液氮 研磨成粉状，将粉末加入1.5ml离心管中，加入500ml Buffer A, 30 μ I Buffer B, 30 μ 1 Buffer C,于 55°C 温浴 6h。 (2)DNA的游离与杂蛋白的抽除：加入500 μ I Buffer D抽提，12000rpm/min离心 lOmin，将上清转移至干净的I. 5ml离心管中。加入500 μ I Buffer E抽提，12000rpm/min 离心10min，将上清转移至干净的I. 5ml离心管中。 (3)DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混 勾后加入DNA吸附柱，12000rpm/min离心lmin，弃废液，加入500 μ 1去蛋白液，12000rpm/ min离心lmin，弃废液，加入50当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提取真菌基因组DNA的试剂盒，包括真菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，其特征是：真菌细胞的破碎：挑取真菌样本于研钵中，加入液氮研磨成粉状，将粉末加入1.5ml离心管中，加入200‑700ml Buffer A,20‑50μl Buffer B,10‑50μl Buffer C,于50‑60℃温浴5‑10h；DNA的游离与杂蛋白的抽除：加入200‑700μl Buffer D抽提，10000‑15000rpm/min 离心5‑15min，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；加入500μl Buffer E抽提，10000‑15000rpm/min 离心5‑15min，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后加入DNA吸附柱，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入200‑700μl去蛋白液，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入200‑700μl漂洗液，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入200‑700μl漂洗液，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，静置吹干；DNA洗脱：往吸附柱中加入30μl洗脱液，10000‑15000rpm/min 离心1‑2min，所得液体为真菌基因组DNA,于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王清水，余彦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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