本发明专利技术提供一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，属于生物技术领域。本发明专利技术所述的提取木本植物基因组DNA的试剂盒，包括木本植物组织的前处理，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱具体步骤。常规的木本植物基因组DNA提取步骤繁琐，耗时长，一般需要15h左右才能提取到木本植物基因组DNA，一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒与常规的木本植物基因组DNA提取方法相比仅需3h左右的时间即可提取到木本植物基因组DNA，不仅节省了大量提取时间，同时简化了实验步骤，能够更有效、快速、经济地提取到木本植物基因组DNA。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，属于生物
技术背景 DNA提取是植物分子生物学研宄的基础技术。DNA提取技术的不断发展，为全基因 组测序等多项应用创造了有利条件。随着现代分子生物学的发展，DNA分离技术也层出不 穷.DNA已经可以从诸如化石、木乃伊等极端材料中分离出来，也可以从痕量材料获得DNA。 目前，已经发展了多种方法，成功地从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部等组织器 官中提取出DNA。 然而在进行木本植物DNA水平遗传多样性研宄时，首先遇到的问题是如何快速获 得较完整、纯度较高的基因组DNA。由于植物细胞与动物细胞不同，具有一层坚硬的细胞壁， 且含有较多的多糖、色素、脂质和多酚等物质，给植物DNA提取带来很多困难，特别是多糖 和多酚类物质不易与DNA分开。相对于草本植物，多年生木本植物的次生代谢类物质含量 更高，高质量的DNA提取难度更大。大多数植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中 往往含有大量蛋白质、多糖、单宁和色素等杂质，这些杂质有时很难从DNA中除去，大多数 蛋白质可通过酚-氯仿-异戊醇处理后变性、沉淀除去。但大多数木本植物富含多糖、多酚 类物质，DNA常受到严重的多酚污染，造成DNA沉淀物难以溶解或溶液色深；多糖污染直接 影响基因组DNA的限制性核酸内切酶的酶切效果。多酚类、多糖物质的污染会造成AFLP酶 切连接等后续实验效果差。 因为木本植物基因组DNA是研宄木本植物分子生物学的基础，如不能有效的完成 木本植物DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。因此需要研 制一种适用于木本植物基因组DNA提取的方便、快捷的方法，要能保证提取到木本植物基 因组DNA，才能进一步开展木本植物基因组研宄。
技术实现思路
： 本专利技术提供一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，与传统方法相比，利用该方法能 够快速提取木本植物基因组DNA。 -种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，包括木本植物组织的前处理，DNA的游离 与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，具体步骤如下： 植物组织样品的前处理：称取0. 2-lg植物组织样品，用液氮研磨成粉末DNA的游离与 杂蛋白的抽除：将样品粉末装入2ml的离心管中，加入300-800 μ I Buffer A，振荡器震荡 30-60s 后，在 60-70°C水浴锅中温育 5-15min，每 5-6min 震荡一次。4°C，10000_13000rpm/ min离心10_30min，将上清移至新的离心管中，加入1/3体积的5-10mol/L Buffer B，4°C静 置30_60min。4°C，10000-13000rpm/min离心5-10min，将上清移至新的离心管中，加入等 体积的抽提液震荡 30-60s，4°C静置 30-60min。4°C，10000-13000rpm/min 离心 10-30min， 将上清移至新的离心管中。加入等体积的抽提液震荡30-60s，4°C静置30-60min。4°C， 10000-13000rpm/min离心10_20min。将上清移至新的离心管中。 DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后 加入DNA吸附柱，10000-13000rpm/min离心l-2min，弃废液，加入300-600 μ 1去蛋白液， 10000-13000rpm/min 离心 lmin，弃废液，加入 300-600 μ 1 漂洗液，10000-13000rpm/min 离心lmin，弃废液，加入300-600 μ 1漂洗液，10000-13000rpm/min离心l-5min，弃废液， 10000-13000rpm/min 离心 l_5min，静置吹干。 DNA 洗脱：往吸附柱中加入 20-50 μ 1 洗脱液，10000-13000rpm/min 离心 l-5min， 所得液体为基因组DNA。取3-6μ1 DNA水溶液，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。 试剂的配方如下： DNA吸附柱为硅胶模吸附柱，购自北京天恩泽公司。 Buffer A :50-200mmol/L 三羟甲基氨基甲烷 PH = 8-9, lO-lOOmmol/L 乙二胺四乙 酸卩!1 = 8.0-9.0,500-1000臟〇1/1氯化钠（似(^)，1.5-2%质量体积比的十二烷基硫酸钠 (SDS)，2-3 %体积体积比的巯基乙醇。 Buffer B:5-10mol/L 醋酸钾。 抽提液：氯仿：异戊醇的体积比为24:1。 沉淀剂：70-80 %无水乙醇。 去蛋白液：3-6厘盐酸胍，10-30禮三羟甲基氨基甲烷（1'1^)，？!1 = 6.0-7.0，用前 加乙醇，使得乙醇在去蛋白液中的终浓度为30-40 %。 漂洗液：20-50mM 氯化钠（NaCL)，2-5mM 三羟甲基氨基甲烷（Tris)，pH = 7. 0-8. 0， 80-90%比重无水乙醇，10-20mM三羟甲基氨基甲烷（Tris)，pH = 8. 0-9. 0。 本专利技术的显著优点： 常规的木本植物基因组DNA提取步骤繁琐，耗时长，一般需要15h左右才能提取到木本 植物基因组DNA，一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒与常规的木本植物基因组DNA提取 方法相比仅需3h左右的时间即可提取到木本植物基因组DNA，不仅节省了大量提取时间， 同时简化了实验步骤，能够更有效、快速、经济地提取到木本植物基因组DNA。【附图说明】 图1为利用本方法提取的木本植物基因组DNA的电泳检测图。 具体实施例 图1中，泳道1，2,分别是葡萄树叶片的基因组DNA检测图、橘子树叶片的基因组 DNA检测图，泳道3是TAKARA公司的DL4500Marker。 -种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，具体步骤如下： (1)植物组织样品的前处理：分别称取0. 5g葡萄树叶片、橘子树叶片，用液氮研磨成粉 末。 (2)DNA的游离与杂蛋白的抽除：将样品粉末装入2ml的离心管中，加入600 μ 1 Buffer Α，振荡器震荡30s后，在65°C水浴锅中温育lOmin，每5min震荡一次。4°C， 12000rpm/min离心10min，将上清移至新的离心管中，加入1/3体积的Buffer B，4°C静置 30min。4°C，12000rpm/min离心10min，将上清移至新的离心管中，加入等体积的抽提液震 荡30s，4°C静置30min。4°C，12000rpm/min离心10min，将上清移至新的离心管中。加入等 体积的抽提液震荡30s，4°C静置30mi当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提取木本植物基因组DNA的试剂盒，包括木本植物组织的前处理，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除和DNA洗脱，其特征是：植物组织样品的前处理称取0.2‑1g植物组织样品，用液氮研磨成粉末；DNA的游离与杂蛋白的抽除将样品粉末装入2ml的离心管中，加入300‑800μl Buffer A，振荡器震荡30‑60s后，在60‑70℃水浴锅中温育5‑15min，每5‑6min震荡一次；4℃，10000‑13000rpm/min 离心10‑30min，将上清移至新的离心管中，加入1/3体积的5‑10mol/L Buffer B，4℃静置30‑60min；4℃10000‑13000rpm/min 离心5‑10min，将上清移至新的离心管中，加入等体积的抽提液震荡30‑60s，4℃静置30‑60min；4℃，10000‑13000rpm/min 离心10‑30min，将上清移至新的离心管中，加入等体积的抽提液震荡30‑60s，4℃静置30‑60min；4℃，10000‑13000rpm/min 离心10‑20min，将上清移至新的离心管中；DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后加入DNA吸附柱，10000‑13000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入300‑600μl去蛋白液，10000‑13000rpm/min 离心1min，弃废液，加入300‑600μl漂洗液，10000‑13000rpm/min 离心1min，弃废液，加入300‑600μl漂洗液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，弃废液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，静置吹干；DNA洗脱往吸附柱中加入20‑50μl洗脱液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，所得液体为基因组DNA，取3‑6μl DNA水溶液，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王清水，余彦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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