一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖及其在抗凝血医药方面的用途制造技术

本发明专利技术属于医药免疫领域，提供了一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖及其在抗凝血医药方面的用途，该硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖由从粒毛盘菌YM281中分泌提取的粒毛盘菌多糖LEP-1，经三氧化硫-吡啶复合物硫酸酯化改性获得。经过药理实验，该硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖在低剂量(30mg/kg)、高剂量(90mg/kg)状态下均对小鼠的出血时间(BT)、小鼠凝血时间(CT)有延长作用，说明该硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖有抗凝血作用，为抗凝血研究提供了新的途径。

【技术实现步骤摘要】
一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖及其在抗凝血医药方面的用途
本专利技术属于医药免疫领域，涉及一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖及其在抗凝血医药方面的用途。
技术介绍
世界卫生组织报道，心血管疾病近年已经成为世界上主要引起死亡的原因之一。动脉粥样硬化是心血管疾病的重要基本病志，在此基础上的动脉内血栓形成是急性心血管疾病的重要原因，减少血栓的形成可以减少心血管疾病的发生。血栓的形成是血管内壁、凝血、抗凝及纤溶系统等多种因素共同作用的结果。高凝状态与血栓及血栓栓塞等并发症有关。高凝状态(HCS)，即血栓前状态(PTS)，是由多种因素引起的止血系统、凝血系统及抗凝系统失调的一种病理过程，存在容易导致血栓形成的多种血液学变化。因此，研究生物活性物质对高凝状态的改善具有临床意义。肝素常被用作抗凝血剂，是一种分子量不定的酸性粘多糖，此多糖分子中含有许多硫酸根阴离子，主要是通过协同抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)或封闭有活性的凝血因子的丝氨酸蛋白酶残基，使其灭活，从而拮抗凝血活酶及凝血酶的形成，妨碍纤维蛋白原转变为纤维蛋白，阻止血小板聚集和被破坏等。实际上，肝素在临床应用中存在副作用，如自发性出血和骨质疏松等。因此，研究开发具有天然低毒和使用方便的抗凝血剂具有重要意义。多糖是一类天然高分子化合物，通常具有重要的生物活性，而且几乎无毒。近年来，学者们陆续发现某些多糖具有明显的抗凝血活性，如红藻多糖、褐藻多糖、马尾藻多糖、海参多糖等。研究发现真菌多糖还具有明显的利肝健胃、降血糖、抗肿瘤等药理功能，在食品加工、医药、日用化工等领域均具有重要的应用。粒毛盘菌属(Lachnum)是属于柔膜菌目(Helotiales)晶杯菌科(Hyaloscyphaceae)的一类腐生性真菌。本专利技术通过发酵与提取优化，从不同菌株的粒毛盘菌中获得了具有不同结构的多糖，包括同多糖和杂多糖。同时，通过评价这些多糖的生物活性，发现粒毛盘菌多糖具有抗氧化、抗肿瘤、促进创面愈合、降血糖和降脂利肝等功效。这为本专利技术从粒毛盘菌多糖中寻找抗凝血药物提供途径。
技术实现思路
本专利技术提供一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖及其在抗凝血医药方面的用途，确立了一种全新的多糖—硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1及其抗凝血的药理作用。本专利技术的目的通过以下技术方案实现本专利技术硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖，其特点在于：该硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖由三氧化硫-吡啶复合物对粒毛盘菌多糖LEP-1进行硫酸酯化改性获得，命名为SLEP-1；所述粒毛盘菌多糖LEP-1由粒毛盘菌YM281分泌提取获得。所述粒毛盘菌多糖LEP-1可由以下方法制备获得，但不限于此，步骤包括：将粒毛盘菌YM281种子液于26℃、发酵培养基中发酵8d，获得粒毛盘菌多糖LEP-1的发酵液，将发酵液旋转蒸发浓缩，3倍体积的95％乙醇醇沉24h，4500r·min-1离心8min，蒸馏水复溶；将得到的粗多糖脱蛋白、脱色、13000Da透析，获得初级纯化的粒毛盘菌多糖LEP-1；其中，发酵培养基为：无水葡萄糖30g·L-1，酵母膏5g·L-1，MgSO4·7H2O1g·L-1，KH2PO41g·L-1，VB150mg·L-1，自然pH，即不用调整pH。所述硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖可由以下方法制备获得，但不限于此，步骤包括：将7.5g三氧化硫-吡啶复合物缓慢溶于90mL吡啶中，在三颈瓶中加热搅拌；当加热至90℃时加入1.5g的粒毛盘菌多糖LEP-1粉末，恒温搅拌1h后，停止加热，冷却至室温；用3mol·L-1NaOH溶液将反应液调至中性后，加入5倍体积95％乙醇，静置24h，离心，将沉淀复溶于水，分别用自来水和蒸馏水透析2d和1d，浓缩后冷冻干燥，制得硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖，命名为SLEP-1。其中，温度由冷凝管和温度计进行操作。本专利技术还提供了上述硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖在制备抗凝血药物中的应用，所制备的抗凝血药物为按药剂学的常规制备方法，以硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖为活性物质制备的口服片剂或胶囊。本专利技术还提供了一种抗凝血药物，该药物的主要成分为上述硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖，该硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖的含量占药物总质量的60％以上。抗凝血药物可以为片剂、胶囊、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂，根据不同的剂型，按照常规方法制备即可。本专利技术的有益效果是：本专利技术创造性地在粒毛盘菌多糖LEP-1的基础上进行硫酸酯化获得硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1，经过药理实验，粒毛盘菌多糖LEP-1、硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1在低剂量(30mg/kg)、高剂量(90mg/kg)状态下均对小鼠的出血时间(BT)、小鼠凝血时间(CT)有延长作用，说明粒毛盘菌多糖LEP-1、硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1均有抗凝血作用，这为抗凝血研究提供了新的途径。尤其是经过硫酸酯化的硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1即使再低剂量(30mg/kg)状态下，也能够明显延长高凝模型小鼠的出血时间(BT)、小鼠全凝血时间(CT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血酶时间(APTT)，并显著降低高凝模型小鼠血浆中纤维蛋白原(FIB)含量，使高凝模型小鼠血浆中抗凝血酶Ⅲ(ATIII)的活性大于70％，且显著降低了凝血因子Xa(FXa)的浓度，说明，硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1是一种有效的全新抗凝血多糖。本专利技术多糖通过粒毛盘菌获得，不仅可以通过大规模发酵培养，简单易得，适应工业化生产；而且天然无毒，稳定较强，可以制成多种剂型抗凝血药物。附图说明图1为粒毛盘菌多糖LEP-1和硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖SLEP-1对模型小鼠血浆的BT和CT的影响；其中，图1-A是对模型小鼠血浆BT的影响；图1-B是对模型小鼠血浆CT的影响；图2为LEP-1和SLEP-1对模型小鼠血浆的APTT(A)、PT(B)和TT(C)的作用其中，图2-A是对模型小鼠血浆APTT(A)的作用；图2-B是对模型小鼠血浆PT(B)的作用；图2-C是对对模型小鼠血浆TT(C)的作用；图3为LEP-1和SLEP-1对模型小鼠的血浆中FIB浓度的影响；图4为LEP-1和SLEP-1对模型小鼠的血浆中AT-III活性和FXa浓度的影响；其中，图4-A是对模型小鼠的血浆中AT-III活性的影响；图4-B是对模型小鼠的血浆中FXa浓度的影响。以上各图中，aP＜0.05和空白组比显著；bP＜0.001和空白组比极显著；cP＜0.05和模型组比显著；dP＜0.001和模型组比极显著；肝素作为阳性对照。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的公知手段，或按照制造厂商的建议条件。实施例1(一)粒毛盘菌YM281胞外多糖的制备将粒毛盘菌YM281(该菌株来源于文献“Purification,structure,lipidloweringandliverprotectingeffectsofpolysaccharidefromLachnumYM281”，期刊：CarbohydratePolymers，ISSN:0144-8617，发表日期：2013.10，页码：922–930)种子液接种到100L的发酵罐中发酵，搅拌速度160r·min-1，发酵温度26℃，发酵时间8d。发酵培养基：无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖，其特征在于：所述硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖是利用三氧化硫‑吡啶复合物对粒毛盘菌多糖LEP‑1进行硫酸酯化改性获得的，所述粒毛盘菌多糖LEP‑1由粒毛盘菌YM281分泌提取获得。

【技术特征摘要】
1.一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖在制备抗凝血药物中的应用，其特征在于：所述硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖是利用三氧化硫-吡啶复合物对粒毛盘菌多糖LEP-1进行硫酸酯化改性获得的，所述粒毛盘菌多糖LEP-1由粒毛盘菌YM281分泌提取获得。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所制备的抗凝血药物为按药剂学的常规制备方法，以硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖为...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶明，陈天乐，杜湛湛，徐平，王玉芬，袁怀波，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34