蕨麻中一种新的三萜化合物、制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了蕨麻中一种新的三萜化合物、制备方法和用途，属于药物技术领域。该化合物为首次报道，是一种结构新颖的环阿尔廷型三萜化合物，可以从蕨麻根茎中提取、分离纯化得到。体外试验证明该化合物能够抑制黑色素瘤细胞的增殖，可以用来开发成治疗黑色素瘤的药物。

【技术实现步骤摘要】
蕨麻中一种新的三萜化合物、制备方法和用途
本专利技术属于药物
，具体涉及从蕨麻中分离得到的一种环阿尔廷型三萜化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
药品蕨麻为蔷薇科委陵菜属植物蕨麻委陵菜（PotentillaanserineL.）的块根，具有生津止渴、健脾益胃、益气补血、收敛止血、止泻、止咳、利痰的功效，主治吐血、下血、崩中、疟疾痈疮、脾虚腹泻、下痢等症。蕨麻富含淀粉、脂肪酸及人体所需的十八种氨基酸和多种维生素，具有较高的医疗和营养价值。《中药大辞典》、《西藏常用中草药》等书对此药均有记载。该品在青海省野生资源十分丰富，民间药用已久，特别是藏医中应用较多。三萜类化合物是由数个异戊二烯去掉羟基后首尾相连构成的物质。大部分为30个碳原子，少部分含27个碳原子的萜类化合物。三萜类成分在自然界分布很广，鲨鱼油、甘草、五味子的有效成分中都有三萜类物质。三萜类化合物根据其所含功能团和不同的侧链，还可分成不同的基本骨架。除洪霞等从蕨麻根茎中分离得到三个五环三萜内三萜化合物（洪霞等，中草药，第37卷第2期，165页~168页），尚未见蕨麻中其他三萜化合物的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从蕨麻中分离得到的一种环阿尔廷型三萜化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：具有下述结构式的三萜化合物Ⅰ：所述的化合物Ⅰ的制备方法，包含以下操作步骤：（a）蕨麻根茎粉碎，用75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用15%乙醇和70%乙醇洗脱，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c）步骤（b）中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d）步骤（c）中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集7-9个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物Ⅰ。进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物Ⅰ和药学上可接受的载体。所述的化合物Ⅰ在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用。所述的药物组合物在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用。本专利技术化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有治疗有效量的本专利技术化合物Ⅰ，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本专利技术的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本专利技术药物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。说明书附图图1为化合物Ⅰ结构式；图2为化合物Ⅰ二维HSQC谱；图3为化合物Ⅰ二维1H-1HCOSY谱；图4为化合物Ⅰ二维HMBC谱；图5为化合物Ⅰ二维NOESY谱；图6为化合物Ⅰ计算ECD和实验ECD图。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。主要材料、试剂来源及仪器类型：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。人A375黑色素瘤细胞株由第三军医大学赠。化合物Ⅰ，纯度99%，为自制。DMEM培养基、0.25%胰酶购自美国Gibco公司；MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐；四甲基偶氮唑蓝、DMSO（二甲基亚砜）、BrdU购自美国Sigma公司；鼠抗BrdU多克隆抗体购自美国ABcam公司；山羊抗鼠二抗购自美国Cellsignaling公司；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自美国Promega公司。恒温CO2培养箱，普通冰箱，-80℃冰箱均为美国Forma公司；超净工作台购自中国苏州净化工程公司；倒置显微镜，倒置荧光显微镜购自olympus公司；电热恒温培养箱购自中国上海跃进医疗器械厂；自动酶标仪购自日本Wako公司；紫外分光光度仪购自美国Beckman公司；J6-HC高速离心机购自美国Beckman公司；低温微量离心机购自德国Eppendorf公司；振荡摇床购自美国Forma公司。实施例1：化合物Ⅰ分离制备及结构确证（a）蕨麻根茎（10kg）粉碎，用75%乙醇热回流提取（30L×3次），合并提取液，浓缩至无醇味（6L），依次用石油醚（6L×3次）、乙酸乙酯（6L×3次）和水饱和的正丁醇（6L×3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（375g）和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，依次用15%乙醇（8L）和70%乙醇（12L）洗脱，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（125g）；（c）步骤（b）中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d）步骤（c）中组分4（25g）用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2（12g）用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集7-9个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物Ⅰ（35mg）。结构确证：淡黄色针状结晶，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇；HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z489.6542，结合核磁特征可得分子式为C30H42O4，不饱和度为10。红外IR显示在3442，1732和1715cm-1有吸收，提示存在羟基和羰基。核磁共振氢谱数据δH（ppm,Pyridine-d5,400MHz）：H-1（5.55，br，s），H-2（2.53，m）,H-2（2.26，m）,H-3（3.78，dd，J=6.2，10.1），H-5（2.36，m），H-6（2.64，m），H-6（2.38，m），H-7（5.46，t，J=6.4），H-11（5.38，br，d，J=5.2），H-12（2.31，br，d，J=17.4），H-12（2.16，dd，J=17.4，6.0），H-15（2.41，d，J=17.8），H-15（2.10，d，J=17.8），H-17（2.39，d，J=9.0），H-18（0.76，s），H-19（3.22，d，J=13.5），H-19（3.13，d，J=13.5），H-20（2.73，m），H-21（1.10，d，本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下述结构式的三萜化合物Ⅰ：。

【技术特征摘要】
1.具有下述结构式的三萜化合物的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：(a)蕨麻根茎粉碎，用75％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用15％乙醇和70％乙醇洗脱，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓辉，岳会兰，韩发，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海;63