本发明专利技术属于医药技术领域，涉及盐酸表柔比星脂质体注射液的制备及抗肿瘤活性应用。采用硫酸铵梯度法制备盐酸表柔比星脂质体注射液。本发明专利技术的抗肿瘤活性结果表明盐酸表柔比星脂质体注射液对乳腺癌有显著抑制作用，且抗肿瘤活性优于盐酸多柔比星脂质体注射液(楷莱)、盐酸表柔比星注射液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，涉及一种注射液及其药物用途，特别涉及一种适合工 业化生产的盐酸表柔比星脂质体注射液及抗肿瘤活性应用。 技术背景 表柔比星（Epirubicin)，又名表阿霉素，是典型的蒽环类抗肿瘤抗生素。1975年 意大利学者通过半合成途径合成表柔比星，与另一典型的蒽环类抗肿瘤抗生素药物多柔比 星（阿霉素）是同分异构体，区别在于其氨基糖苷的4'位上的羟基由顺势变为方式。表柔 比星用于乳腺癌、卵巢癌等多种实体瘤。 脂质体作为药物载体，具有一定的靶向性，尤以与抗肿瘤药物的结合既增强治疗 作用又可以降低药物毒性。普通脂质体由磷脂和胆固醇组成，但靶向性差，为提高脂质体的 稳定性、靶向性和细胞内导入能力，可以采用某些功能基团修饰脂质体表面，如聚乙二醇 链修饰的脂质体（长循环脂质体，STEALTH技术）。STEALTH技术采用PEG的磷脂作为载体， 延长药物在血液循环时间，使脂质体可以有效的达到病变部位。 目前，上市的PEG化脂质体包括美国Sequus公司开发的盐酸多柔比星脂质体注射 液，商品名Doxir (楷莱），是第一个得到美国认可的长循环脂质体（1995年）。Doxir静 脉注射后，盐酸多柔比星脂质体会蓄积到肿瘤组织中，很少进入正常组织，体内分布呈现肿 瘤靶向性，显著提高多柔比星的抗癌效能。国内三家公司成功仿制开发了该产品，其中上海 复旦张江生物医药股份有限公司自主创新的阿霉素脂质体（里葆多）是国内批准上市的首 个PEG化阿霉素脂质体，作为乳腺癌、淋巴癌等癌症的一线化疗药物。已上市的阿霉素脂质 体Myocet 8属于传统的脂质体，即表面没有任何修饰。技术的核心就是利用脂质体内外pH 的差异而使药物被动装载于脂质体内，即pH梯度法。与PEG修饰的多柔比星脂质体比较， Myocet 4的膜结构的组成缺少PEG的保护，容易被巨噬细胞吞噬清除，因此其体内半衰期要 短得多，对肿瘤组织的靶向性，Myocet 4也较Doxir低，因此带来更多的急性毒性。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种盐酸表柔比星脂质体注射液及其制备方法，本专利技术是由 如下技术方案实现的： 本专利技术所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，该注射液由如下原料制成（按脂质体 注射液每100体积份计）：盐酸表柔比星 160重量份 氢化大豆卵磷脂（HSPC) 2000重量份 胆固醇(CH0) 55重量份 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 900重量份 (DSPE-PEG2000) 组氨酸缓冲液 4体积份 蔗糖溶液 200体积份 硫酸铵水溶液 0. 1体积份。 本专利技术所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，原料优选为： 盐酸表柔比星 230重量份 氢化大豆卵磷脂（HSPC) 170重量份 胆固醇(CH0) 1000重量份 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 60重量份 (DSPE-PEG2000) 组氨酸缓冲液 8体积份 蔗糖溶液 15体积份 硫酸铵水溶液 3体积份。 本专利技术所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其中： 硫酸按溶液的浓度为0? 1~0? 3mol/L ;组氨酸缓冲液浓度为0? 05mol/L~ 0? 4mol/L，pH为6. 2~6. 8 ;蔗糖溶液浓度为7~10 %，pH为6. 50~7. 50。优选地，硫酸 铵溶液的浓度为〇? 15mol/L~0? 25mol/L ;组氨酸缓冲液浓度为0? lmol/L~0? 3mol/L ;蔗 糖溶液浓度为8%。优选地，硫酸按溶液的浓度为0. 2mol/L ;组氨酸缓冲液浓度为0. 2mol/ L;蔗糖溶液浓度为9%。 本专利技术所述的盐酸表柔比星脂质体注射液，其中HSPC :CH0 :DSPE-PEG2000的最佳 比例为3:1:1。 本专利技术所述的盐酸表柔比星脂质体注射液终产品中磷脂的最佳浓度16mg/mL ;终 产品中磷脂与药物盐酸表柔比星的最佳比例为8:1，药物盐酸表柔比星的浓度为2mg/mL。 本专利技术盐酸表柔比星脂质体注射液的制备工艺包含以下步骤： (1)油相：称取氢化大豆卵磷脂/胆固醇/二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000,溶于无水乙醇，加热溶解后，于55~65°C保温； (2)水相：配制硫酸铵水溶液，于55~65 °C保温； (3)乳化：在55~65°C条件下，将油相注入到水相中，不断加热搅拌，并通入氮气， 直到无水乙醇完全挥发，得到空白脂质体a ; (4)整粒：将空白脂质体a高压均质减小粒径，最大均质压力在1400bar以下；挤 出器挤出，挤出器中采用孔径为0. 05~0. 5nm的滤膜，得到空白脂质体b; (5)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法或采用凝胶柱层析法，用蔗糖溶液置 换外水相的硫酸铵溶液，得到空白脂质体c; (6)载药、孵化：空白脂质体c中加入组氨酸缓冲液，将盐酸表柔比星溶于上述混 合液中，55~65°C保温，蔗糖溶液定容，得到盐酸表柔比星脂质体注射液d; (7)除菌、分装：将d用0. 22 ym微孔滤膜除菌、分装。 本专利技术方法中所述超滤法可以是：向空白脂质体加入同等体积的9%蔗糖溶液， 混合均匀，设置流量10_25mL/min，泵速15-35rpm/min，用蔗糖溶液置换内水相硫酸铵，置 换5-8次，得到空白脂质体。处理量不同，流量、泵速也不同，过大会破坏脂质体。 本专利技术方法中所述凝胶柱层析法可以是：空白脂质体上样到凝胶柱中，用蔗糖溶 液洗脱，收集洗脱液。 将盐酸表柔比星脂质体注射液平均粒径控制在50~150nm，更优选为70~ 100nm，经过挤出后粒径分布均匀。【附图说明】 图1为屯粒径分布图； 图2为d2粒径分布图； 图3为乳腺癌小鼠相对肿瘤体积随时间的变化。 本专利技术采用无水乙醇溶解磷脂，解决了以氯仿为溶剂产生毒性的问题；通过加热 搅拌的方法除去乙醇，容易得到空白脂质体，解决了采用减压旋转蒸发除乙醇缓慢且不易 工业化生产的问题；空白脂质体中残留的乙醇采用超滤法去除，与其他方法相比，极好的控 制了乙醇的残留量。本专利技术中空白脂质体用高压均质机减小粒径后，采用挤出器挤出，使空 白脂质体粒径分布更均匀。 本专利技术将盐酸表柔比星为长循环脂质体注射液，符合工业化大生产要求。与盐酸 表柔比星注射液以及盐酸多柔比星脂质体注射液（楷莱）进行对比试验，治疗MCF-7乳腺 癌荷瘤小鼠的抗肿瘤活性结果表明，本专利技术将盐酸表柔比星长循环脂质体注射液具有更好 的抗肿瘤作用。 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。 实验例1:本专利技术以MCF-7荷瘤小鼠为模型，采用尾静脉注射给药，比较盐酸表柔 比星脂质体注射液、盐酸多柔比星脂质体注射液（楷莱）、表柔比星注射液的抗肿瘤活性。 1?实验方法取裸鼠（4周龄），将MCF-7细胞混悬均匀，右前肢腋下进行接种，每只注射 0.2mL(l*107)细胞液，80只全部接种。接种肿瘤细胞后，每天观察肿瘤生长情况。当裸鼠 接种MCF-7细胞3天后，可在右前腋下隐约触及肿块，肿块逐渐增大，5天后由外观可见肿块 形成，待肿瘤直径至〇. 6~0. 8cm时，取60只进行实验。 将成模裸鼠随机分为6组，每组10只（每隔7天给药1次，给药3次）。 1组：实施例5盐酸表柔比星脂质体注射液5mg/kg 2组：实施例5盐酸表柔比星脂质体注射液10mg/k本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种盐酸表柔比星脂质体注射液，其特征在于该注射液由按脂质体注射液每100体积份计的如下原料制成：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭光明，佟志远，刘清飞，王海燕，麻晓雪，
申请(专利权)人：北京博恩特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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