本发明专利技术属于医药生物领域，具体涉及一种Sirt1激活剂组合物及其在促进间充质干细胞成骨转化方面的应用。其由白藜芦醇和淫羊藿苷组成，白藜芦醇与淫羊藿苷的重量比为10：1～100。在进一步地实施方案中，所述组合物还可以添加黄芩苷，从而使组合物获得更好的技术效果。所述组合物中，白藜芦醇、淫羊藿苷和黄芩苷的重量比为10：1～100：1～10；优选为10：3：2。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药生物领域，具体涉及一种Sirtl激活剂组合物及其在促进间充质 干细胞成骨转化方面的应用。
技术介绍
在各种物种中发现的SIR2的同源蛋白质统称为Sirtuins家族（Michishita，Park 等人，2005)。哺乳动物中Sirtuins家族有7个成员（Sirtl-Sirt7)，其中Sirtl与Sir2的 同源性最高。Sirtl通过与不同的组蛋白（Vaquero，Scher等人，2004)和非组蛋白底物相 互作用（Luo，Nikolaev 等人，2001 ;Vaziri，Dessain 等人，2001 ;Langley，Pearson 等人， 2002 ;Smith 2002 ;Yeung，Hoberg 等人，2004 ;Nemoto, Fergusson 等人，2005)，对细胞的生 存、凋亡、代谢等都发挥重要作用。人Sirtl基因位于10q22. 1，长约33kb，翻译后的蛋白质 分子量大小约为60ku，不存在剪切变异体，具有NAD依赖的脱乙酰基酶活性。该蛋白广泛 存在于机体的各种体细胞及生殖细胞中。研宄发现，Sirtl蛋白能延长酵母、果蝇和线虫等 低等生物的寿命。在小鼠和人等高等动物中，它参与调控恶性肿瘤生成及化疗耐药、应激应 答、细胞代谢和老化等多种生命活动，从而作为治疗恶性肿瘤、糖尿病、血管老化以及帕金 森等疾病的潜在靶点而引起广泛关注。 目前，Sirtl激活剂首先在天然植物中发现，例如，白藜芦醇、槲皮素和紫铆因；其 中，白藜芦醇是天然发现的活性最强的Sirtl激活剂。随着人们对Sirtl靶点认识的深入， 人工合成Sirtl激活剂开始得到重视，相继开出了 SRT1720、SRT1460和SRT2183等Sirtl 激活剂。 骨髓或脂肪来源的间充质干细胞（MSC)具备以下优势：1)取材方便，易于分离培 养扩增；2)具有免疫调节能力，同种异体移植MSCs可诱导免疫耐受；3)遗传背景稳定，适 合作基因治疗的载体细胞；4)具有多向分化潜能，可分化为骨、软骨、脂肪、内皮、神经和胰 岛样等多种细胞。这些优势使其成为组织和细胞工程理想的种子细胞。 移植能够进行骨生成分化的干细胞或者定向于骨生成分化的细胞是治疗骨相关 疾病（特别是当所述治疗需要新骨产生时）的有前景的途径。先前已使用骨髓干细胞 (BMSC)和间充质干细胞（MSC)治疗骨疾病（Gangji 等，2005，Expert Opin Biol Ther(5): 437-42)。然而，尽管可以将这些相对未分化的干细胞进行移植，但是它们并不定向分化为 骨生成谱系，因此这样移植的干细胞中有相当大的比例最终可能不会形成期望的骨组织。 因此在干细胞相关的骨相关疾病的治疗中，需要成骨诱导剂的参与。截至目前，并未发现 Sirtl激活剂作为成骨诱导剂的应用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种Sirtl激活剂组合物，其由白藜芦醇和淫羊藿苷组 成，白藜芦醇与淫羊藿苷的重量比为10 :1~1〇〇。 本专利技术研宄发现虽然淫羊藿苷具有较低的Sirtl激活活性，但是其与白藜芦醇合 用时可以极大提高白藜芦醇的Sirtl激活活性。 在本专利技术的一个实施方案中，所述白藜芦醇与淫羊藿苷的重量比为10 :2~6,优 选为10 :3。 经本专利技术深入研宄发现，所述组合物还可以添加黄芩苷，从而使组合物获得更好 的技术效果。所述组合物中，白藜芦醇、淫羊藿苷和黄芩苷的重量比为10 :1~1〇〇 :1~10 ; 优选为10 :3 :2。 本专利技术的另一个目的是提供所述Sirtl激活剂组合物在作为成骨分化诱导剂的 应用。 在本专利技术中，所述组合物可以作为成骨分化诱导剂添加到骨移植材料上，也可以 添加到体外细胞培养基中诱导骨髓间充质干细胞或脂肪间质干细胞向成骨方向转化，从而 使上述干细胞作为种子细胞应用到骨组织工程或骨移植材料当中。所述组合物也可以作为 药物用于骨质疏松症的治疗，并且也可联合骨髓间充质干细胞移植来防治一些骨疾病。当 作为药物进行使用时，优选将组合物制备成口服制剂进行使用。 在上述所述的医药用途中，对于给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结 果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠的治疗方案应用于人身 上，组合物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的 普通技术人员来说是显而易见的。【具体实施方式】 下面将进一步的详细说明本专利技术。需要指出的是，以下说明仅仅是对本专利技术要求 保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本专利技术的保护范围以所附 权利要求书记载的内容为准。 实施例1 Sirtl激活剂组合物对骨髓间充质干细胞（BMSCs)中Sirtl蛋白表达的 影响 骨髓间充质干细胞（BMSCs)的培养：将2月龄雄性大鼠脱颈处死后，在无菌取下双 侧股骨和胫骨，暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔至平皿中，收集平皿中的培养液至离心管中， lOOOrpm，3min离心，弃上清液，再用含10% FBS的a -MEM培养液重悬细胞，当细胞密度达 80 %时，进行传代培养，第4代细胞可用于实验。以5 X 104个? mL，农度接种于96孔细胞 培养板，每孔200 yL。试验分为以下各组： 对照组仅添加不含任何药物的培养基，每组设置6个复孔，在加入组合物3天后， 收集细胞，粉碎，离心取上清，采用ELISA试剂盒测定细胞内Sirtl蛋白含量，具体结果如 下： 另外，采用MTT法测定了各组BMSCs的细胞活性，以考察组合物对细胞活性的影 响，具体结果如下： 从上述结果可以看出，所述sirtl激活剂组合物不仅可以极大提高BMSCs中的 Sirtl蛋白表达，并且可以促进BMSCs增殖。 实施例2 Sirtl激活剂组合物诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs)体外成骨分化的研 宄BMSCs培养方法、分组及组合物用量同实施例1，另外添加了对比例组，对比例为 常规成骨诱导剂，具体为：终浓度为〇. 01M/L地塞米松，10mM/L的0 -甘油磷酸钠和50mg/ L的维生素C。 在加入组合物7天后，收集细胞，粉碎，离心取上清，采用常规试剂盒测定ALP活性 和骨钙素含量，具体结果如下： 在加入组合物孵育14天后，采用茜素红法测定钙结节数量，具体结果如下： 实施例3 Sirtl激活剂组合物对去卵巢大鼠骨质疏松症的保护作用 取雌性SD大鼠，体重200g左右，总体分为正常对照组、模型组、给药组，每组10只 大鼠，各组用水合氯醛麻醉，从背侧入路完整摘除双侧卵巢，正常对照组只进行手术不切除 卵巢，分层缝合切口。术后一天开始给药，各给药组剂量均为l〇mg/kg (给药组分为四组，具 体重量比同实施例1中的组1-4和组7)，每天灌胃给药一次，模型组和正常对照组给予等量 的生理盐水。给药12周后，处死大鼠取血及相关组织进行检测。 1、血清生化检测 采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清钙和血清磷的含量，结果如下： 2、骨密度检测 采用双能X射线吸收骨密度仪测定大鼠股骨及胫骨骨密度，结果如下： 本
技术实现思路
仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技 术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到 的技本文档来自技高网...
【技术保护点】
Sirt1激活剂组合物，其由白藜芦醇和淫羊藿苷组成，白藜芦醇与淫羊藿苷的重量比为10：1～100。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张静莹，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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