本发明专利技术涉及能够结合蛋白Axl的抗原结合蛋白(尤其是单克隆抗体)以及编码所述蛋白的氨基酸和核酸序列。根据一个方面，本发明专利技术涉及能够结合Axl并通过诱导Axl的内在化而被内在化到细胞中的抗原结合蛋白或抗原结合片段。本发明专利技术还包括所述抗原结合蛋白作为缀合有其它抗癌化合物(如毒素、放射性元素或药物)的定位产品的用途，及其用于治疗某些癌症的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能够结合蛋白Axl的新型抗原结合蛋白，尤其是单克隆抗体，以及编 码所述蛋白的氨基酸和核酸序列。根据一个方面，本专利技术涉及能够结合Axl并通过诱导Axl 的内在化而被内在化到细胞中的新型抗原结合蛋白或抗原结合片段。本专利技术还包括所述抗 原结合蛋白作为缀合有其它抗癌化合物（如毒素、放射性元素或药物）的定位产品的用途， 及其用于治疗某些癌症的用途。
技术介绍
"Axl"（也称为"Ufo"、"Ark"或"Tyro7"）克隆自患有慢性粒细胞白血病的患者， 当由鼠 NIH3T3过度表达时，作为致癌基因而引发转化。其属于受体酪氨酸激酶（RTK)家 族，称为 TAM(Tyro3、Axl、Mer)家族，其包括 Tyro3(Rse、Sky、Dtk、Etk、Brt、Tif)、Axl 以及 Mer (Eyk、Nyk、Tyro_12) (Lemke G.等人 Nat. Rev. Immunol. (2008)8,327-336)。 人蛋白Axl是894个氨基酸的蛋白质，其序列呈现于SEQ ID NO. 29所列的序列中。 氨基酸1-25对应着信号肽，不含所述信号肽的人蛋白Axl呈现于SEQ ID NO. 30所列的序 列中。 Gas6最初作为生长停滞特异性基因而被分离，是TAM家族成员的常见配体 (Varnum B. C.等人Nature (1995). 373, 623-626) Aas6呈现出对Axl最高的亲和性，其次是 Tyro3,最后是Mer(Nagata K等人 J. Biol. Chem. (1996). 271，30022-30027) Jas6 由如下组 成：介导对磷脂膜结合的富含γ_羧基谷氨酸（Gla)的结构域、4个表皮生长因子样结构域 以及 2 个层粘连蛋白 G样（LG)结构域（Manfioletti G·，Brancolini, C, Avanzi, G.&Schnei der, C. Mol. Cell Biol. (1993) 13,4976-4985)。对于许多其它RTK，配体的结合导致受体二 聚化和酪氨酸残基的自身磷酸化（对于受体Axl而言，酪氨酸残基779、821和866)，其作为 各种细胞内信号传导分子的停靠位点（!^叩611?.]\1，1(6&1:;[叩，六.1(.3&印，!1.3.&6四11&111，0· K. Adv. Cancer Res. (2008). 100, 35-83)。此外，Axl受体可通过配体非依赖性过程被激活。 当Axl受体过度表达时，可发生这种激活。 Gas6/Axl信号传导已被证明调节各种细胞过程，包括大量各种细胞的体外细胞增 殖、黏附、迀移和存活（Hafizi S. &Dahlback, FEBS (2006). 273, 5231-5244)。此外，TAM 受体参与先天免疫的控制；它们抑制树突细胞（DC)和巨噬细胞中对病原体的炎症反应。它 们还驱动凋亡细胞被这些免疫细胞的吞噬作用，且其是自然杀伤（NK)细胞的成熟和杀伤 活性所需要的（Lemke G.等人 Nat. Rev. Immunol. (2008) .8, 327-336)。 其在正常细胞中弱表达，且主要见于成纤维细胞、髓系祖细胞、巨噬细胞、神经组 织、心肌和骨骼肌中，在其中主要支持细胞的存活。Gas6/Axl系统通过调节血管平滑肌细 胞的动态平衡在血管生物学中发挥重要作用（Korshunov, V. A.，Mohan, A. M.，Georger, M. A. &Berk, B. C. Circ. Res. (2006). 98, 1446-1452 ；Korshunov, V. A. , Daul, M. , Massett, M. P. &Berk, B. C. Hypertension(2007) · 50, 1057-1062)〇 在肿瘤细胞中，Axl在调节细胞的侵袭和迀移中起重要作用。Axl的过度表达 不仅与预后不良相关，也与乳腺、结肠、食管癌、肝细胞、胃、胶质瘤、肺、黑色素瘤、骨肉 瘤、卵巢、前列腺、横纹肌肉瘤、肾、甲状腺和子宫内膜癌中所报告的各种人类癌症的侵 袭性增加相关（Linger R. M.，Keating, A. K.，Earp, H. S. &Graham, D. K. Adv. Cancer Res. (2008) · 100, 35-83 以及 Verma A. Mol. Cancer Ther. (2011) · 10, 1763-1773,综述）。在乳癌 中，Axl似乎是上皮至间质转化（EMT)强大的效应因子；EMT过程积极促进生物体中癌细胞 的迀移和传播（Thiery J. P. Curr. Opin. Cell Biol. (2003). 15, 740-746) 〇 也已表明Axl调节血管生成。在内皮细胞中敲除Axl确实损伤管的形成和迀移 (Holland S.J.等人Cancer Res. (2005).65,9294-9303)以及干扰特定的血管生成信号传 导通路（Li Y.等人 Oncogene (2009) · 28, 3442-3455)。 最近对一系列细胞模型的一些研宄描述了 Axl过度表达在耐药现象中的参与。下 表1总结了这些研宄。 轰1 上表1中引用的完整文献如下： -Macleod K 等人 Cancer Res. (2005) · 65, 6789-6800 -Mahadevan D 等人 Oncogene (2007) · 26, 3909-3919 -Lay J. D 等人 Cancer Res. (2007) · 67, 3878-3887 -Hong C. C 等人 Cancer Lett. (2008) · 268, 314-324 -Liu L 等人 Cancer Res. (2009).69,6871-6878 -Keating A. K.等人 Mol. CancerTher. (2010) · 9, 1298-1307 -Ye X.等人 Oncogene (2010) · 29, 5254-5264 在这些内容中，Axl RTK被视为肿瘤学中的兴趣靶标。一些小组已经开发了使用 裸单克隆抗体或革G标小分子的革El向gas6/Axl轴的抗肿瘤策略（Verma A. Mol. Cancer Ther. (2011). 10, 1763-1773)。
技术实现思路
在第一实施方式中，本专利技术涉及抗原结合蛋白、或其抗原结合片段，其i)结合人 蛋白Axl、以及ii)结合所述人蛋白Axl之后被内在化。 更一般地，本专利技术涉及蛋白Axl用于选择抗原结合蛋白、或其抗原结合片段的用 途，其中抗原结合蛋白、或其抗原结合片段能够在结合所述靶标Axl之后被内在化。更具体 地，所述祀标是Axl的细胞外结构域。 在这个具体方面，因此本专利技术涉及一种用于筛选化合物、或其结合片段的体外方 法，所述化合物、或其结合片段能够将兴趣分子递送或内在化至哺乳动物细胞，所述兴趣分 子被共价连接到所述化合物，其中所述方法包括以下步骤： a)选择能够结合Axl蛋白、或其细胞外结构本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗原结合蛋白或其抗原结合片段，特征在于其由选自如下的抗体组成：a)一种抗体，其包含含有序列SEQ ID NO.1、2和3的三个轻链CDR；以及含有序列SEQ ID NO.4、5和6的三个重链CDR；b)一种抗体，其包含含有序列SEQ ID NO.36、37和38的三个轻链CDR；以及含有序列SEQ ID NO.39、40和41的三个重链CDR；c)一种抗体，其包含含有序列SEQ ID NO.64、65和66的三个轻链CDR；以及含有序列SEQ ID NO.67、68和69的三个重链CDR。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·博拉沃，L·格奇，N·布特，
申请(专利权)人：皮埃尔法布雷医药公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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