等鞭金藻的培养方法，所述方法包括向培养体系中添加浓度为412～1372mmol/L的甘油的步骤。培养体系中加入终浓度为412～1372mmol/L的甘油，培养至生长平衡期收获藻细胞，则藻细胞蛋白质的含量和产量最高分别达到细胞干重的32％和0.56g干重/L，分别比对照组提高61.9％和86.7％。本方法简单易行，为等鞭金藻细胞内高价值蛋白质的生产提供了新的方法，同时为生物柴油副产物甘油的利用提供了新的可能途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及海洋单细胞微藻。
技术介绍
湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis)，系金藻门，定鞭金藻纲，等鞭藻 目，等鞭藻科，等鞭藻属。作为一种常见的单细胞海洋微藻，其生长速率快、光合利用效率 高，富含蛋白质、多糖、油脂、多不饱和脂肪酸等营养成分，是一种经济价值较高的微藻。其 细胞内活性蛋白和活性多糖在生物医药、食品保健等方面有很好的应用价值。 此外，海洋微藻中的高油脂含量也使其成为生产新型生物柴油的潜在原料之一， 利用海洋微藻生产生物柴油，不仅可克服石油资源不可再生的缺点，而且能够减少CO2的排 放，净化废气和污水。在培养微藻制取生物柴油的过程中，通过添加营养及优化培养条件获 得目标产物--生物柴油的同时，可获得藻细胞中的其他高附加值的代谢产物。 另一方面尚需解决的问题是，在利用微藻细胞内的油脂生产生物柴油的过程中， 会产生大量的副产物甘油，对生物柴油副产物甘油的利用研宄有助于避免资源浪费，降低 微藻培养及生物柴油生产的成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，所述方法包括向培养体系中添 加浓度为412~1372mmol/L的甘油的步骤。 使用本专利技术的上述方法进行等鞭金藻培养，具有以下显著特点： ①蛋白质含量明显高：本专利技术所得到的藻细胞蛋白质含量显著提高，藻细胞蛋白 质的含量和产量最高分别达到细胞干重的32 %和0. 56g干重/L，分别比对照组提高60 %和 86%，为利用等鞭金藻生产高价值蛋白质提供了一种新的培养方法。 ②培养体系中甘油浓度较高，以甘油作为有机碳源培养等鞭金藻，在明显提高藻 细胞蛋白质含量的同时，也为生物柴油副产物甘油的实际利用提供了一种新途径。 ③利用生物柴油副产物甘油培养等鞭金藻不仅能提高细胞内蛋白质的含量和产 量，还能提高细胞内的油脂和脂肪酸含量，从而降低等鞭金藻的培养成本和生物柴油的生 产成本，提高等鞭金藻的整体利用价值。【附图说明】 本专利技术附图2幅： 图1是等鞭金藻生长曲线； 图2是蛋白质溶液标准曲线。【具体实施方式】 无特殊说明，本专利技术所述的等鞭金藻藻种是从大连附近海域分离筛选出的野生型 湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis)，现保藏于中国科学院淡水藻种库，藻种编 号为FACHB-1750。藻液来自该等鞭金藻的培养液。 本专利技术中，采用考马斯亮蓝比色法（Analytical Biochemist ry, 1976, 72(1-2) :248-254. Hydrobiologia, 1981，78(3) :237-251.)测定蛋白质含量，并计 算其产量。 本专利技术所述的主要特征在于包括向培养体系中添加浓度为 412~1372mmol/L的甘油的步骤。其中，所添加的甘油浓度优选686~1372mmol/L，尤其 优选 686mmol/L。【具体实施方式】 之一，上述本专利技术的方法中，所述的甘油于培养第3±1天添加至培 养体系。 另一【具体实施方式】中，所述的方法使用的培养基为3XF/2培养基，通过如下方法 制备： (1)母液制备： 氮源母液：称取75g NaNO3溶于IL去离子水； 磷源母液：称取5g NaH2PO4 · H2O溶于IL去离子水； 金属元素母液：分别称取 3. 15g FeCl3 · 6H20, 4. 36g Na2EDTA, 0· 0098g CuSO4 · 5H20, 0. 0063g Na2MoO4 · 2H20, 0. 022g ZnSO4 · 7H20, 0.0 lg CoCl2 · 6H20, 0. 18g MnCl2 · 4H20溶于IL去离子水； 维生素母液：0· OOlg vitamin B12,0· 2g vitamin B1,0· OOlg D-生物素，溶于 IL去 离子水； (2)配制3XF/2培养基：基础海水中添加上述氮源母液3ml/L、磷源母液3ml/L、 金属元素母液3ml/L及维生素母液I. 5ml/L，均勾混合。 其中，所述的基础海水优选天然海水经臭氧杀菌，两层0. 45 μ m醋酸纤维滤膜过 滤，ll〇°C灭菌15min，冷却后所得。 再一具体的实施方式中，所述中，优选在指数生长期，每24 小时向培养体系中添加75mg/L硝酸钠。 更为具体的实施方式中，所述中，培养条件包括：培养温度 23~27°C，光强110~150ymol/m 2 · s，光暗比为14h :10h，以通气速率0· 1~0· 3vvm通 入含4.0% 0)2的空气。 最为具体地，本专利技术所述的是将指数生长期的等鞭金藻按 3X 106cellS/mL的密度接种于灭菌的3XF/2培养基；培养至第3±1天，向培养体系中加入 浓度为686~1372mmol/L的甘油；并于指数生长期，每24小时向培养体系中添加75mg/L 硝酸钠；全培养过程设置培养条件为：培养温度23~27°C，光强110~150 μmol/m2 *s，光 暗比为14h :10h，以通气速率0. 1~0. 3vvm通入含4. 0% 0)2的空气；培养至平衡期收获藻 细胞； 其中，3 X F/2培养基通过如下方法制备： a.母液制备： 氮源母液：称取75g NaNO3溶于IL去离子水； 磷源母液：称取5g NaH2PO4 · H2O溶于IL去离子水； 金属元素母液：分别称取 3. 15g FeCl3 · 6H20, 4. 36g Na2EDTA, 0· 0098g CuSO4 · 5H20, 0. 0063g Na2MoO4 · 2H20, 0. 022g ZnSO4 · 7H20, 0.0 lg CoCl2 · 6H20, 0. 18g MnCl2 · 4H20溶于IL去离子水； 维生素母液：0· OOlg vitamin Β12,0· 2g vitamin B1,0· OOlg D-生物素，溶于 IL去 离子水； b.配制3XF/2培养基：天然海水经臭氧杀菌，两层0.45μπι醋酸纤维滤膜过滤， 110°C灭菌15min，冷却后得基础海水，向其中添加上述氮源母液3ml/L、磷源母液3ml/L、金 属元素母液3ml/L及维生素母液I. 5ml/L，均匀混合制得3XF/2培养基。 下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明，这些实施例不应当被理解为对本
技术实现思路
任何形式的限制。 实施例1 :培养过程生长周期的确定 每天用 Jasco V-530 UV/VIS Spectrophotometer (JASCO, Tokyo, Japan)测定等鞭 金藻的细胞密度。在680nm处测定培养液中的等鞭金藻细胞的光密度，利用公式"细胞密 度（X10 7Cells/mL) = (0D68QX 1250 - 90. 125) X稀释倍数"计算出对应的细胞密度。绘 制生长曲线，以判定细胞生长的生长周期。不同甘油浓度时，等鞭金藻细胞的生长曲线见图 1。 由图可见，等鞭金藻培养至2天时进入快速的指数生长期，培养至7天时进入平衡期。 实施例2 :营养盐及培养基配制 F/2营养盐母液配制： I ·氮源母液：称取75g NaNO3溶于IL去离子水； II .磷源母液：称取5g NaH2PO4 · H2O溶于I本文档来自技高网...
【技术保护点】
等鞭金藻的培养方法，其特征在于，所述方法包括向培养体系中添加浓度为412～1372mmol/L的甘油的步骤。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨海波，王茜，徐嫔，潘彦斐，于媛，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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