本发明专利技术公开了一种川楝子有效部位及其制备方法和应用，属于中药提取及应用领域。其制备关键在于包括以下步骤：取川楝子药材粗粉，70%乙醇回流提取（料液比为1︰6），第一次4h，第二次和第三次2h，共提取三次，滤液浓缩成膏并用真空干燥为粉末状，得到川楝子提取物，提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经D101大孔吸附树脂柱，大孔树脂柱先用40%乙醇洗脱，再用95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂苷部位。本发明专利技术的川楝子总皂苷部位提取物，其中总皂苷含量可达50%以上。本发明专利技术得到的川楝子总皂苷部位对破骨细胞活性具有抑制作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药提取及应用领域，特别涉及川楝子有效部位及其制备方法和应 用。
技术介绍
骨质疏松症是以组织微细结构破坏，骨量减少，骨脆性增加，而导致骨折的危险性 增加为特征的一种系统性、全身性的骨骼疾病。骨组织是由细胞以及细胞外基质组成，其 中细胞成分包括破骨细胞、成骨细胞、骨细胞等，成骨细胞介导的骨形成与破骨细胞介导的 骨吸收两者间保持动态平衡是骨活动保持正常状态的基础，当骨吸收作用大于骨形成作用 时，即导致骨量减少，产生骨质疏松症。从传统中药中寻找天然的、副作用小的破骨细胞活 性抑制剂具有广泛的前景。 川楝子（Fuctus Toosendan)为楝科植物川楝（ife/ia ioiasefliZa/? 5?. ei Zucc.) 的干燥成熟果实，主产于四川、贵州、湖北、湖南、河南及甘肃南部等。具有舒肝行气止痛，驱 虫的作用；传统用于胸胁、腕腹胀痛，疝痛，虫积腹痛等。主要含有挥发油类、黄酮类、萜类、 酚酸类及简单芳香族类、脂肪酸及其衍生物类、留体类等成分，具有驱虫、抗癌、抗炎镇痛等 药理作用。 《药品注册管理办法》中药、天然药物注册分类5所述"未在国内上市销售的从植 物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂"中的有效部位是指从植物、矿物、动物等 药材中提取的一类或数类化学成分的含量占总提取物的50%以上。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有抑制破骨细胞活性作用的川楝子有效部位。本专利技术 提供的川楝子有效部位为川楝子总皂苷，并进一步给出了川楝子总皂苷有效部位的制备方 法，含量不低于50%，本专利技术所述的川楝子有效部位，是从我国产的楝科植物川楝的干燥成 熟果实分离纯化得到的总皂苷有效部位提取物。 本专利技术是这样实现的： 川楝子总皂苷有效部位用于抑制破骨细胞活性的应用。 川楝子有效部位的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1)预处理：将川楝子药材 烘干后粉碎过筛，即得川楝子粗粉；（2)提取：取川楝子药材粗粉，60-80%乙醇回流提取，第 一次2-5h，第二次和第三次l-3h，共提取三次，滤液浓缩成膏并干燥，即得川楝子提取物粉 末；（3)纯化：川楝子提取物依次用石油醚、正丁醇萃取后，正丁醇层经大孔吸附树脂柱，先 用20-60%乙醇洗脱，再用60-95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为川楝子总皂 苷部位粉末。 所述大孔树脂为非极性大孔树脂。 所述非极性大孔树脂为DlOl型大孔树脂。 本专利技术的有益效果： 本专利技术制备的川楝子总皂苷有效部位能够有效的抑制破骨细胞活性，首次得到了川楝 子总皂苷有效部位在抑制破骨细胞活性方面的应用。 DlOl型大孔吸附树脂是苯乙烯型非极性共聚体，对于不带极性或弱极性的化合 物，普遍吸附能力强，特别是对皂苷类、黄酮类的分离纯化效果极佳，本专利技术采用DlOl大孔 树脂分离纯化获得川楝子抑制破骨细胞活性的总皂苷有效部位，含量> 50%，符合《药品注 册管理办法》规定，具有如下突出优点：稳定性高、吸附速度快、吸附容量大、操作简便、选择 性好、解吸条件温和、再生处理方便、可反复使用、成本较低、综合经济效益显著等。【附图说明】 图1为优选比色条件时5%香草醛-冰醋酸的用量对吸光值的影响图； 图2为优选比色条件时高氯酸的用量对吸光值的影响图； 图3为优选比色条件时显色温度对吸光值的影响图； 图4为优选比色条件时显色时间对吸光值的影响图； 图5为对照品人参皂苷的标准曲线图。【具体实施方式】 材料及仪器 材料 川楝子，购于贵阳市花果园药材市场，由贵阳中医学院何顺志教授鉴定为楝科植物川 楝ioioseflt/a/? 5?6^.??? Zucc.的干燥成熟果实；人参阜苷标准品A0234,购于中药 固体制剂制造技术国家工程研宄中心；DlOl大孔吸附树脂，购于青岛海洋化工有限公司； ΑΒ-8大孔吸附树脂，购于安徽三星树脂科技有限公司。 仪器 分析天平FA2004,上海良平仪器仪表有限公司；超声波发生器DS-205A，宁波市海曙 达盛超声波仪器厂；恒温水浴锅，海梅香仪器有限公司；UV-1801分光光度计，北京北分瑞 利分析仪器有限责任公司；振荡器WSZ-200A，上海一恒科学仪器有限公司；C型玻璃仪器 气流烘干器，郑州长城科工贸有限公司；DZF-6020型真空干燥箱，上海博讯实业有限公司； DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司。 川楝子总皂苷的富集 最大吸收波长的选择 对照品溶液的配制 精确称取人参皂苷标准品5. Img置于50mL的容量瓶中，用甲醇超声溶解并定容至刻 度，摇勾，得到0. 102mg/mL的对照品溶液。 测定波长的选择 精密量取人参皂苷标准品溶液1.5 mL，水浴挥干甲醇后，加入5%香草醛-冰醋酸溶 液0. 2mL和高氯酸0. 8mL，60°C水浴加热15min，冰水浴冷却至室温后加冰醋酸5. OmL，随行 做空白试剂作为对照，用紫外分光光度计进行薄层扫描，确定最大吸收波长。 对人参皂苷标准溶液进行显色后，在400 nm-600 nm波长范围内进行扫描，确定550nm 作为测定波长。 比色条件的优选 5%香草醛-冰醋酸用量的优选 取人参皂苷对照品溶液I mL，5份，水浴蒸干甲醇后，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶 液0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5mL，加入高氯酸0. 8mL，充分混匀，密塞，60°C水浴15min，冰水浴 冷却至室温加冰醋酸5. OmL，摇匀后，于550nrn波长下，比色测定吸光度，确定最佳5%香草 醛-冰醋酸的用量；测定结果如图1所示，0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸为合适的用量。 高氯酸用量的优选 取人参皂苷对照品溶液I mL，5份，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液 0· 2mL，分别加入高氯酸0· 4、0· 6、0· 8、L 0、L 2mL，充分混匀，密塞，60°C水浴15min，冰水浴 冷却至室温加冰醋酸5. OmL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳高氯酸用 量；测定结果如图2所示，0. 8 mL高氯酸为合适的用量。 显色温度的选择 精密量取人参皂苷对照品溶液1.0 mL，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液 0. 2mL和高氯酸0. 8mL，分别在40°C、50°C、60°C、70°C、80°C下水浴反应15min，冰水浴冷却 至室温加冰醋酸5. OmL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳显色温度；测 定结果如图3所示，60°C为最佳显色时间。 显色时间的选择 精密量取人参皂苷对照品溶液lmL，水浴蒸干甲醇后，分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2mL和0.8mL高氯酸，60°C水浴反应5min、10min、15min、20 min、25min，冰水浴冷却至室 温加冰醋酸5. OmL，摇匀后于550nm波长下，比色测定吸光度，确定最佳显色时间；测定结 果如图4所示，15min为最佳显色时间。 标准曲线的绘制 精密量取人参皂苷的标准溶液〇. 5mL、l. OmL、l. 5mL、2. 0mL、2. 5mL、3. OmL，水浴蒸干甲 醇，冷却后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL和高氯酸0. 8mL，充分混匀，密塞，60°C水浴 15min，冰本文档来自技高网...
【技术保护点】
川楝子总皂苷有效部位用于抑制破骨细胞活性的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周英，俸婷婷，陈敏，王慧娟，林冰，陈琳，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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