本发明专利技术公开了毛木耳蛋白质提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤产品中的应用。采用本发明专利技术的方法制备的毛木耳蛋白质提取物对于L-O2细胞无细胞毒性，能够提升酒精性损伤L-O2细胞的存活率，具有保肝的作用，可用于缓解酒精性肝细胞损伤。当培养液中毛木耳蛋白质提取物中蛋白质浓度为30μg/mL时，治疗组L-O2细胞存活率最高，可以达到87.86％，比损伤模型组(细胞存活率为45.01％)的细胞存活率提高42.85％。毛木耳蛋白提取物可以有效的降低细胞内TG和ROS的含量，与模型组能够形成统计学上显著性差异(P<0.05)。同时，毛木耳蛋白提取物还可以减少细胞损伤，降低胞内酶ALT和AST的释放，保护细胞的完整性，具有保肝的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，对来自体内和体外的许多非营养性物 质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用，通过新陈代谢将它们彻 底分解或以原形排出体外。进入体内的酒精90%在肝脏代谢，酒精对肝脏有直接损害作 用，其损伤机理是由酒精在肝细胞内代谢引起的。如果长期过度饮酒，可使肝细胞反复发 生脂肪变性、坏死，最终发展为酒精性肝炎和酒精性肝硬化，严重者危及生命安全。对于预 防和治疗酒精性肝损伤，除了戒酒之外，还应多食用一些富含高蛋白、维生素和抗氧化的食 物，增加对肝脏的保护。 毛木耳，学名（AuriculariaPolytricha)又称白背毛木耳，属于担子菌门、层菌 纲、木耳目、木耳科、木耳属中的毛木耳种。毛木耳子实体胶质滑韧，早期杯状，渐变为耳状， 叶状或不规则形状，子实体层的上表面为紫灰色至黑色，下表面长绒毛，常呈青褐色、浅茶 褐色至瓦灰色。据中国科学院成都生物所分析，毛木耳干品中氨基酸的总量为41. 68%，有 人体必需氨基酸7种，占所含氨基酸总量的42. 31%，有其它氨基酸9种，占所含氨基酸总量 的57. 69%。毛木耳是一种食药同源的真菌，具有潜在开发应用的前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何缓解酒精性肝损伤。 为解决上述技术问题，本专利技术提供了下述A或B的应用：A、毛木耳蛋白质提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤广品中的应用；B、毛木耳蛋白质提取物在制备缓解酒精性肝损伤产品中的应用；所述毛木耳蛋白质提取物由下述方法制备： 1)将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物； 2)对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为80 %的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所 述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。 上述应用中，所述用水浸提可为在2-6°C用水浸提10-14小时，具体可为在4°C用 水浸提12小时。所述水可为去离子水。 上述应用中，所述毛木耳子实体可粉碎至50-100目，如100目。 上述应用中，所述毛木耳子实体和水的质量比可为1 :40-60,如1 :40,所述毛木耳 子实体的质量为干重。 上述应用中，所述毛木耳子实体可为新鲜的子实体也可为干燥的子实体。 上述应用中，所述干燥的子实体是将新鲜的毛木耳子实体在常温（如20-25°C)下 干燥得到的。 上述应用中，可采用离心收集所述水溶性物质。所述离心采用的离心力可为 6000-15000g(如12000g)，离心时间可为10-20分钟（如15分钟）。 上述应用中，所述饱和度均为硫酸铵在4°C的饱和度。 上述应用中，可采用离心收集所述沉淀；所述离心采用的离心力可为 6000-15000g(如12000g)，离心时间可为10-20分钟（如15分钟）。 上述应用中，所述透析采用的半透膜的截留分子量为3kDa;所述透析可为在 2-6°C透析10-14小时，具体可为在4°C透析12小时。上述应用，还包括将透析后的半透膜内的液体在7000-14000g(如8500g)，离心 10-20分钟（如15分钟），收集上清液，将该上清液进行冷冻干燥，制备成毛木耳蛋白质提 取物干粉的步骤。 上述应用中，所述缓解酒精性肝细胞损伤为下述1)-5)中的至少一种： 1)提高肝细胞的存活率； 2)降低肝细胞内的甘油三酯含量； 3)降低肝细胞内的活性氧含量； 4)降低肝细胞对谷丙转氨酶的释放量；5)降低肝细胞对谷草转氨酶的释放量； 所述缓解酒精性肝损伤为下述1) -5)中的至少一种： 1)提高肝细胞的存活率； 2)降低肝细胞内的甘油三酯含量； 3)降低肝细胞内的活性氧含量； 4)降低肝细胞对谷丙转氨酶的释放量； 5)降低肝细胞对谷草转氨酶的释放量。 上文中，所述酒精性肝细胞损伤具体可为人酒精性肝细胞损伤，所述酒精性肝损 伤具体可为人酒精性肝损伤。所述肝细胞具体可为L-02细胞。 实验证明，采用本专利技术的方法制备的毛木耳蛋白质提取物对L-02细胞无细胞毒 性，能够提升酒精性损伤L-02细胞的存活率，具有保肝的作用，可用于缓解酒精性肝细胞 损伤。当培养液中毛木耳蛋白质提取物中蛋白质浓度为30yg/mL时，治疗组L-02细胞存 活率最高，可以达到87. 86%，比损伤模型组（细胞存活率为45. 01% )的细胞存活率提高 42. 85%。毛木耳蛋白质提取物可以有效地降低细胞内TG和ROS的含量，使治疗组与损伤 模型组能够形成统计学上显著性差异（P〈〇. 05)。同时，毛木耳蛋白质提取物还可以减少 L-02细胞损伤，降低胞内酶ALT和AST的释放，保护L-02细胞的完整性，具有保肝的作用。 治疗组（817±33ymol/mg蛋白质）L-02细胞内的TG含量比损伤模型组（2627±11ymol/ 1^蛋白质）降低了 68.90%;治疗组1-02细胞内的1^的平均荧光强度（4898±406)比损 伤模型组（1〇548±319)降低了 53. 56%;治疗组L-02细胞释放的ALT含量（8096±194U/ 1^蛋白质）比损伤模型组（16544±468"11^蛋白质）降低了51.06%;治疗组1-02细胞释 放的AST含量（6979±221U/mg蛋白质）比损伤模型组（15072±579U/mg蛋白质）降低了 53. 70% 〇【附图说明】 图1为不同浓度乙醇对L-02细胞活性的影响。 图2为毛木耳蛋白质提取物的细胞毒性检测。 图3为毛木耳蛋白质提取物保护酒精性损伤L-02细胞的效果图。图中损伤组为 损伤模型组，10、20、30、40、50分别为1-5号含乙醇和毛木耳蛋白质提取物的培养液的治疗 组。 其中，图2中的蛋白质浓度为毛木耳蛋白质提取物中的蛋白质在培养液中的终浓 度。【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的毛木耳（Auriculariapolytricha(Mont. )Sacc. ) 3 号（赵爽 等.毛木耳菌丝体产多糖发酵条件的优化.食品科技.2012年第37卷第4期）公众可从 北京市农林科学院获得该菌种，以重复本申请实验。 下述实施例中的L-02细胞株（人肝细胞）为中国医学科学院肿瘤细胞库的产品。 下述实施例中的RPMI 1640培养液为Invitrogen公司产品，产品目录号为 11875-093。 下述实施例中的BCA蛋白定量试剂盒为北京博迈德生物技术有限公司产品，产品 目录号为PP0103。 下述实施例中的组织甘油三酯测定试剂盒为北京普利莱基因技术有限公司产品， 产品目录号为E1013。 下述实施例中的组织内活性氧测定试剂盒为北京普利莱基因技当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
毛木耳蛋白质提取物在制备缓解酒精性肝细胞损伤产品中的应用，所述毛木耳蛋白质提取物由下述方法制备：1）将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物；2）对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为80%的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵爽，刘宇，高宜，荣成博，许峰，王守现，王兰青，宋爽，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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