酚类雌激素的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种酚类雌激素的提取方法，该提取方法包括以下步骤：S1，将离体动物组织置于萃取溶剂中；S2，对离体动物组织进行微波萃取，得到微波萃取液；S3，对微波萃取液采用固相萃取柱分离，得到酚类雌激素。上述提取方法通过采用微波萃取的方法，利用离体动物组织样品中不同物质的介电常数不同，吸收微波能的程度不同的这种差异，选择性地将目标物质酚类雌激素从动物组织基质中萃取出来，然后通过固相萃取柱进行除杂分离，从而得到纯度和含量相对较高的酚类雌激素。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及样品分离领域，具体而言，涉及一种。
技术介绍
环境雌激素是指存在于环境中，具有类似生物体内雌激素活性的化学物质。双酚 A、壬基酚和辛基酚等数十种化合物以其相似的结构特征和类雌激素活性被划分为同一类 的分析研宄对象，统称为酚类雌激素，其危害有：1)对生殖和发育的危害，表现为性腺发育 不良，易导致生殖道肿瘤和先天畸形；2)对神经系统的危害，表现为神经运动损伤，短时记 忆缺陷及低智商；3)对免疫系统的危害，表现为雌激素浓度大于生理浓度时，可增加免疫 性疾病的隐患性。 酚类雌激素广泛应用于现代社会的生产生活中，并通过各种途径进入环境介质， 进而进入野生动物和人体中。为了评估酚类雌激素对环境生态和人群健康的危害，需要对 环境和生物样品中的酚类雌激素进行检测。目前大多数对环境此激素进行提取或检测都是关于中草药或环境样品，相比而 言，动物离体组织样品由于基质复杂，目标物浓度低，其酚类雌激素检测一直是个棘手的问 题。显然，寻求一种高效便捷的样品前处理方法是解决这一难题的关键。 前处理方法中最关键的步骤为目标化合物的提取，传统方法主要有索氏抽提和振 荡法。传统的提取方法存在诸多缺陷，例如操作过程繁琐费时、提取与净化效率低、容易引 入误差、需要使用大量有毒溶剂、对目标化合物的检出限要求很高、目标化合物稳定性差等 等。由于上述缺点，传统提取方法无法有效应用于离体动物组织样品的前处理，使得离体动 物组织中酚类雌激素的检测面临难以克服的障碍。 需要特别说明的是，与一般的环境样品或植物样品（包括中草药）相比，离体动物 组织样品成分更加复杂，对目标化合物的干扰因素更多。离体动物组织样品含大量的水、 蛋白质和高脂肪，因此，脱水、脱蛋白质和脱脂成为离体动物组织前处理过程不可缺少的操 作。在进行这些层层操作过程中，目标化合物也很容易同时被除去，导致提取失败或提取效 率低下。另外，离体动物组织中的糖类、维生素、酶、无机盐等物质也给目标化合物的提取带 来许多干扰和困难。 因此，亟需突破传统提取技术的限制，，寻求一种快速、高效地提取复杂动物离体 组织中的酚类雌激素的方法，以便更准确地检测动物离体组织样品中酚类雌激素的含量。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于建立一种，以提供一种从复杂的离 体动物组织中简单、高效提取酚类雌激素的方法。 为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种， 该提取方法包括以下步骤：S1，将离体动物组织置于萃取溶剂中；S2,对离体动物组织进行 微波萃取，得到微波萃取液；S3,对微波萃取液采用固相萃取柱分离，得到酚类雌激素。 进一步地，在步骤si中，萃取溶剂为极性溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合 物；优选萃取溶剂的体积为10~20ml，更优选地，离体动物组织与萃取溶剂的质量体积比 为 1/20-1/1。 进一步地，极性溶剂为乙醇、甲醇或者丙酮与水的混合物；非极性溶剂为环己烷、 正己烷或二氯化碳。 进一步地，在步骤S1之前，提取方法还包括对离体动物组织进行冷冻干燥的步 骤，优选冷冻干燥的步骤采用真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，更优选真空冷冻干燥机的冷 却温度为-10°C~-50°c;真空度为1. 3~13pa，冷冻干燥的时间为18~48h。 进一步地，在步骤S2中，微波萃取的温度为80~120°C，优选微波萃取的时间为 10 ~25min〇 进一步地，在步骤S3中，在对微波萃取液采用固相萃取柱分离之前，还包括对固 相萃取柱进行活化的步骤。 进一步地，固相萃取柱为Florisil柱或HLB固相萃取柱。 进一步地，步骤S3包括以下步骤：S31，对固相萃取柱进行活化，得到活化固相萃 取柱；S32,以0. 5-2ml/min的流速将微波萃取液转移至活化固相萃取柱中；S33,用淋洗液 对固相萃取柱进行淋洗，得到去除杂质的固相萃取柱；S34,用洗脱液对去除杂质的固相萃 取柱进行洗脱，得到酚类雌激素。 进一步地，淋洗液为正己烷、甲醇与水的混合液或者乙酸乙酯与正己烷的混合液； 优选淋洗液的体积为3-8ml。 进一步地，洗脱液为甲醇、乙腈、甲醇与乙腈的混合液、正己烷与丙酮的混合液或 者乙酸乙酯与正己烷的混合液；优选洗脱液的体积为6-10ml。 应用本专利技术的技术方案，通过采用微波萃取的方法，利用动物组织样品中不同物 质的介电常数不同，吸收微波能的程度不同的这种差异，选择性地将目标物质酚类雌激素 从动物组织基质中萃取出来，然后通过固相萃取柱进行除杂分离，从而得到纯度和含量相 对较高的酚类雌激素。【具体实施方式】 需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相 互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。 如
技术介绍
部分所提到，在现有技术中，环境雌激素的提取或检测大多都是针对 中草药、食品或者环境样品，而离体动物组织由于基质复杂，目标物浓度低而无法采用现有 的检测方法进行高效准确地检测其中的雌激素，尤其是酚类雌激素。为了改善现有技术中 的上述缺陷，在本专利技术典型的实施方式中，提供了一种，该提取方法 包括以下步骤：S1，将离体动物组织置于萃取溶剂中；S2,对离体动物组织进行微波萃取， 得到微波萃取液；S3,对微波萃取液采用固相萃取柱分离，得到酚类雌激素。 本专利技术的上述提取方法，通过采用微波萃取的方法，利用离体动物组织样品中不 同物质的介电常数不同，吸收微波能的程度不同的这种差异，选择性地将目标物质酚类雌 激素从动物组织基质中萃取出来，然后通过固相萃取柱进行除杂分离，从而得到纯度和含 量相对较高的酚类雌激素。 在本专利技术的上述提取方法中，对离体动物组织进行萃取的萃取溶剂可以根据所欲 提取的具体的环境雌激素的种类的不同进行合理选择。在本专利技术一种优选的实施例中，在 上述步骤S1中，萃取溶剂为极性溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物；优选萃取溶剂的 体积为10~30ml。根据萃取的相似相容原理，选择与目标提取物质极性相似的溶剂作为萃 取溶剂，萃取效果相对较高。对于非极性的目标分离物质，需要采用非极性溶剂与极性溶剂 的混合物，即在非极性溶剂中加入一定量的极性溶剂，原因是由于相似相溶的原理需要选 择一种非极性溶剂，但是微波萃取时又需要极性溶液用于吸收微波能量，所以萃取溶剂采 用极性与非极性溶剂的混合溶液萃取效果好。 上述步骤S1中，具体所用到的萃取溶剂的体积可以根据所要处理的离体动物组 织的量进行适当调整，本专利技术优选将萃取溶剂的体积控制在10~30ml之内，所加入的萃取 溶剂量既能达到有效萃取离体动物组织中的酚类雌激素的目的，又难以造成溶剂过量、增 加成本以及后续去除溶剂等额外步骤。更优选地，离体动物组织与萃取溶剂的质量体积比 为1/20-1/1。将待分离的离体动物组织的质量与萃取溶剂的体积之间的比例控制在上述范 围内，能够更有效地萃取离体动物组织中的酚类雌激素，从而使得对离体动物组织中的酚 类雌激素的检测结果更准确。 由于本专利技术的上述提取方法是针对离体动物组织中的酚类雌激素的，其中所含有 的双酚A、四溴双酚A、雌二醇、雌三醇、乙烯雌酚和氯酚、极性酚类雌激素，壬基酚、辛基酚 和丁基酚非极性酚类雌激素，因而对这些酚类雌激素进行提取时，所用的萃取溶剂既可以 是极性溶剂也可以是非极性溶剂与极性溶剂的混合物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酚类雌激素的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：S1，将离体动物组织置于萃取溶剂中；S2，对所述离体动物组织进行微波萃取，得到微波萃取液；S3，对所述微波萃取液采用固相萃取柱分离，得到所述酚类雌激素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林振坤，张艳芳，贾银行，李艳艳，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33