本发明专利技术属于检测技术领域，公开中性解吸—电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，包括(1)加标蜂蜜的制备；(2)中性解吸—电喷雾萃取电离质谱检测毒死蜱萃取剂和中性解吸剂选择；(3)选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析得出蜂蜜中毒死蜱的量。本发明专利技术无需对待测样品进行预处理，实现对蜂蜜中毒死蜱的快速检测和鉴定，改善现有分析技术操作步骤复杂、费时等缺陷。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测
，特别涉及蜂蜜中毒死蜱的检测方法。
技术介绍
毒死蜱是一种广泛使用的高效广谱有机磷农药，既可以杀螨，又可做卫生除虫药，主要用于蔬菜果树、棉花等多种作物的病虫害防治，但对蜜源植物的威胁较大。毒理学研宄表明，毒死蜱具有显著抑制胆碱酯酶活性的作用，对小鼠的中枢神经系统产生毒害，并具有一定的致畸作用。蜂蜜中有机磷农药残留的分析研宄表明，毒死蜱在蜂蜜中的残留超标现象普遍存在。中国是世界第一养蜂大国，也是蜂产品生产和出口大国。随着人民生活水平的提高以及进出口贸易的快速发展，蜂蜜中的毒死蜱残留已经成为影响我国蜂蜜出口的首要因素，严重危害国民食品安全及经济的发展。目前，常用的毒死蜱检测方法有酶联免疫分析法、高效液相色谱法、液质联用法、气质联用法等。这些方法一般都需要复杂的样品预处理过程，具有操作步骤繁琐、费时等缺陷，给蜂蜜中毒死蜱的检测带来许多不便。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的对蜂蜜中毒死蜱残留直接检测的方法。本专利技术在无需样品预处理的条件下，对蜂蜜中的毒死蜱直接进行快速检测。本专利技术采用毒死蜱的三级串联碎片进行定量分析，避免假阳性，提高检测的准确性。本专利技术所述的检测方法是借助常规的LTQ-XL型线性离子阱质谱仪和中性解吸-电喷雾萃取电离(neutral desorpt1n-extractive electrospray 1nizat1n massspectrometry, ND-EESI)源进行含毒死蜱蜂蜜样品的检测。本专利技术技术方案如下:一种中性解吸-电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，包括如下步骤:(I)加标蜂蜜配制:称取待测样品蜂蜜，待用；加标蜂蜜配制:平行几份称取与待测样品蜂蜜等重的无毒死蜱蜂蜜，分别加入梯度浓度的毒死蜱溶液，搅拌均匀，成加标蜂蜜，待用；将待测样品蜂蜜及加标蜂蜜均用保鲜膜封口 65°C水浴5min ;待蜂蜜冷却到室温，进行检测；(2)中性解吸一电喷雾萃取电离质谱检测:将ND-EES1-MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50?400 ；以甲醇水溶液为中性解吸试剂；电离电压3.5kV ；离子传输管温度为300°C ;雾化气为氮气，压力为1.0MPa;萃取剂甲酸:甲醇:水体积比1:2:2，流速为 4 μ L/min ；碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30%，碰撞持续时间为30ms ;二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15%，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子；其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm ;为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离为0.5cm ；(3)是否含有毒死蜱的判断:如果在m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明样品中有毒死蜱；选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析，以加标蜂蜜中毒死蜱浓度为横坐标，以m/z 296的绝对信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据标准曲线得出待测样品蜂蜜中毒死蜱的浓度。本专利技术的有益效果是:(I)检出限更低，对蜂蜜中毒死蜱的检出限为1.64ng/mL。(2)采用三级信号作为定量信号，避免了假阳性。(3)本专利技术方法采用甲酸:甲醇:水(1:2:2)喷雾进行中性解吸，解吸效率高，提高了目标信号的强度。(4)实现了蜂蜜的原位分析，无需对样品进行预处理。(5)使实现直接快速的蜂蜜污染物检测技术的应用成为可能，为蜂蜜产业的可持续发展奠定基础。【附图说明】图1为本专利技术方法的ND-EESI实验装置图。图2为本专利技术毒死蜱(100ng/mL)的MSn谱图，图中，(a)为毒死蜱甲醇溶液一级质谱图，(b)为毒死蜱甲醇溶液串联质谱图，(c)为加标蜂蜜毒死蜱一级质谱图，(d)为加标蜂蜜毒死蜱串联质谱图。图3为本专利技术喷雾试剂优化实验中m/z 296 CID信号强度随电喷雾萃取剂的变化趋势图，图中(I)为不同有机溶剂作为萃取剂，(2)为不同浓度甲酸甲醇溶液作为萃取剂，(3)A-D分别为20%甲酸+80%甲醇；20%甲酸+40%甲醇+40%丙酮；20%甲酸+40%甲醇+40%乙酸乙酯；20%甲酸+40%甲醇+40%水。图4为本专利技术不同中性解吸剂下的m/z 296信号强度图。图5为本专利技术中影响毒死蜱质谱行为条件的优化图，图中，(a)为电喷雾电压的优化图，(b)为萃取剂流速的优化图，(C)为雾化气压力的优化图，(d)为解吸气压的优化图，(e)为离子传输管温度的优化图。图6为不同浓度加标蜂蜜的工作曲线。【具体实施方式】下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明。本专利技术所述的实例使用的质谱仪为美国Finnigan公司的LTQ — XL型线性离子阱质谱仪，数据处理系统为美国Finnigan公司的XCalibur数据处理系统。中性解吸装置和EESI离子源，由江西省质谱科学与仪器重点实验室自行研制；精密电子天平(METTLERT0LED0)。甲醇(色谱纯，SKCHEM工以LS);毒死蜱标准品(纯度为99%，阿拉丁试剂公司);本专利技术所述的实例使用的质谱仪为美国Finnigan公司的LTQ-XL型线性离子阱质谱仪，数据处理系统为美国Finnigan公司的Xcalibur数据处理系统。实施例1本实验使用图1所示的ND-EES1-MS方法对毒死蜱蜂蜜溶液(100ng/mL)进行实验，(I)毒死蜱标准溶液:准确称量适量毒死蜱标准品，溶解在甲醇中，配成浓度为2mg/mL的毒死蜱标准溶液，于_3°C避光保存。取100 μ L 2mg/mL毒死蜱标准溶液，用超纯水稀释至4mL，浓度为50 μ g/mL。(2)加标蜂蜜毒死蜱溶液:量筒置于分析天平，去皮归零，用量筒准确量取9.9mL蜂蜜，称重，为13.96232g。而后分别将各1mL锥形瓶置于分析天平，去皮归零，分别称取13.96g蜂蜜。称量后用保鲜膜封口65°0水浴51^11，量取100 4 1^ 50 μ g/mL稀释液于各盛有蜂蜜的锥形瓶中，搅拌均匀。待蜂蜜冷却到室温，进行质谱检测。结果如图2所示，毒死蜱在ND-EESI离子源，正离子模式下，m/z 352毒死蜱+串联质谱分析时，碎片离子有m/z 324,m/z 296,m/z 278。它们分别为m/z352 失去 I 个(-C2H5)，2 个(-C2H5)，2 个(-C2H5)和一份子1120。再对m/z 324, m/z 296 做 CID,进一步确认以上断裂碎片，均与文献中的特征碎片一致。为确保实验可靠性，采用EES1-MS对100ng/mL毒死蜱标准溶液进行了 MS/MS质谱对照分析，结果表明，毒死蜱ND-EES1-MSn谱图与其EES1-MS1^t图完全吻合。因此，如果在实际样品中能检测到信号峰m/z 352，并在MS/MS谱图中观察到主要特征离子m/z 324和m/z 296，则可以判断该样品中含有毒死蜱。为排除检测时的假阳性，采用三级特征碎片离子峰m/z 296为目标信号，为提高其信号强度，本实验进行了喷雾试剂的优化，以lOOng/mL的毒死蜱加标蜂蜜为实验对象，以三级质谱信本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中性解吸‑电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)加标蜂蜜配制：称取待测样品蜂蜜，待用；加标蜂蜜配制：平行几份称取与待测样品蜂蜜等重的无毒死蜱蜂蜜，分别加入梯度浓度的毒死蜱溶液，搅拌均匀，成加标蜂蜜，待用；将待测样品蜂蜜及加标蜂蜜均用保鲜膜封口65℃水浴5min；待蜂蜜冷却到室温，进行检测；(2)中性解吸—电喷雾萃取电离质谱检测：将ND‑EESI‑MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50～400；以甲醇水溶液为中性解吸试剂；以甲酸甲醇水溶液为电喷雾萃取试剂；电离电压3.5kV；离子传输管温度为300℃；雾化气为氮气，压力为1.0MPa；电喷雾萃取试剂流速为4μL/min；碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30％，碰撞持续时间为30ms；二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15％，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子；其它参数采用LTQ‑MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm；为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离为0.5cm；(3)是否含有毒死蜱的判断：如果在m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明样品中有毒死蜱；选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析,以加标蜂蜜中毒死蜱浓度为横坐标，以m/z 296的绝对信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据样品中m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296的信号强度代入标准曲线公式得出待测样品蜂蜜中毒死蜱的浓度。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗丽萍，陈焕文，刘星星，黄学勇，方小伟，郭夏丽，罗火林，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。