本发明专利技术涉及分子生物学和医学领域。本发明专利技术公开了一种检测NPPA/NPPB基因座启动子中rs198388位点的方法，它包括检测个体的心房钠肽（NPPA）/脑钠肽（NPPB）rs198388位点的基因型。本发明专利技术还公开了相应的检测试剂盒。本发明专利技术的检测方法简便易行，成本低廉，高效快速，结果明了。本发明专利技术可以大大减轻患者的负担，为左心室收缩功能不全患者的用药方案提供了参考。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及人心房钠肽/脑钠肽（NPPA/ NPPB gene)的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP)位点 rsl98388 及 其与左心室收缩功能相关性的检测。本专利技术还涉及检测这个SNP位点的方法和试剂盒。
技术介绍
心力衰竭是危害全球人类健康的主要疾病之一，具有高死亡率，高发病率，高住院 率和高住院费用的特点。左心室收缩功能不全(左心室射血分数< 45%)是充血性心力衰竭 发生的早期阶段，对左心室收缩功能不全的风险预测和评估有助于延缓心力衰竭的进程， 改善心力衰竭病人的生活质量和预后。冠心病是造成左心室收缩功能不全最主要的病因之 一。在冠心病病人中，左心室收缩不全的临床表现尤为严重，可迅速进展为心力衰竭，预后 极差。目前迫切需要发现冠心病病人发生左心室收缩功能不全的风险预测指标和预后评估 革巴点。 随着分子医学的发展，左心室收缩功能不全认为是遗传因子和环境共同作用的结 果。对于环境因素的控制虽然在一定程度上可延缓左心室收缩不全的发病和预后，但对于 固有的遗传因素的认识不足极大地妨碍了对左心室收缩功能不全的研究和判断。 目前研究表明左心室收缩功能不全及其随后心力衰竭的发生是由一系列神 经-体液因素参与。其中，利钠肽家族扮演重要角色。利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌 的激素，具有相似的化学结构和生理学效应，主要包括调节血压，抗心肌肥厚，抗心力衰竭 等作用。De Bold等通过电子显微镜首次发现心房肌细胞分泌的颗粒中包含心房利钠肽 (ANP) 随后另一利钠肽家族成员-脑钠肽（BNP)在猪脑中发现。ANP和 BNP的作用相似，基因位置毗邻，形成NPPA-NPPB基因座。NPPA基因（GeneID4878)缺失小 鼠血压显著升高，心肌肥厚增加。NPPB基因（GeneID4879)缺失小鼠心肌广泛纤维化。BNP 与其终末端结构（NT-proBNP)升高被公认为左心室功能障碍和心力衰竭的预测指标。 尽管如此，对于利钠肽家族是否对冠心病病人发生左心室收缩功能的风险评估目 前尚无定论，这正是当前研究左心室收缩功能不全的主要方向之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的 方法。 本专利技术的另一个目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基 因型的检测试剂盒。 本专利技术的再一个目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基 因型的检测试剂盒的应用。根据NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的分型 结果，可以用于辅助预测或者判断冠心病患者的左心室收缩功能不全的易感性。 本专利技术提供了一种检测NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的方 法，该方法包括步骤： 用NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物扩增样品的基因组DNA，得到扩增产物； 和 检测（a)所得的扩增产物中单核苷酸多态性位点rsl98388的基因。 所述的单核苷酸多态性的位点是rsl98388。 rsl98388位于NPPA/NPPB基因座启动子中，片段重叠群contig :NT_021937. 18位 置 6454707C/T。 其中，脱氧核糖核酸（DNA)序列编号：rsl98388位置基于SEQ ID NO : 1/6 ;扩增产 物基于 SEQ ID NO :6/6。 所述的NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物的序列如SEQ ID N02和SEQ ID N03 所示。 在本专利技术的一个实施例中，扩增反应时，退火/延伸的温度为60°C。更好的，在扩 增反应的标准反应中，退火和延伸的步骤均为：60°C，30秒。 所述的扩增产物的序列如SEQ ID N06所示。 所述的方法包括利用与位点rsl98388结合的探针检测NPPA/NPPB基因座启动子 的单核苷酸多态性基因型。 第二方面，本专利技术还提供了一种针对冠心病病人左心室收缩功能不全易感基因的 检测试剂盒，它包括特异性扩增NPPA/NPPB基因座启动子的引物。 所述的NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物的序列如SEQ ID N02和SEQ ID N03 所示。 所述的检测试剂盒还含有常规的检测基因型的试剂。例如，含有与位点rsl98388 结合的探针。 在本专利技术的一个优选例中，所述的与位点rsl98388结合的探针的序列如SEQ ID N04或者SEQ ID N05所示。 本专利技术的检测试剂盒和检测方法可以用于检测NPPA/NPPB基因座启动子的单核 苷酸多态性基因型。具体而言，是对rsl98388进行基因分型。 所述的NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型为C和/或T。 利用对个体的左心室收缩功能不全易感性相关基因的基因型进行判断的方法，即 检测该个体的NPPA/NPPB基因 rsl98388位点的基因型，可以辅助判断该个体患左心室收缩 功能不全的发病风险。 本专利技术检测试剂盒和检测方法可以用于预测左心室收缩功能不全易感性，也可以 在冠心病患者基因治疗后判断或者辅助判断患者的康复前景。 此外，本专利技术的检测试剂盒和检测方法还可以筛选治疗冠心病患者左心室收缩功 能不全的药物，甚至用于作为相关药剂的靶标。 本专利技术公开了一种检测NPPA/NPPB基因座启动子中rs 198388位点的方法，它包括 检测个体的心房钠肽（NPPA) /脑钠肽（NPPB) rsl98388位点的基因型。本专利技术还公开了相 应的检测试剂盒。本专利技术的检测方法简便易行，成本低廉，高效快速，结果明了。可以大大 减轻患者的负担，为左心室收缩功能不全患者的用药方案提供了参考。【附图说明】 图1显示了 NPPA/NPPB rsl98388位于NPPA/NPPB基因座启动子中（片段重叠群 contig :NT_021937. 18位置6454707C/T)的一种SNP基因型的测序结果。 图2是基因组DNA抽提的检测结果。 图3是一例样本的测序截图。【具体实施方式】 多年研究表明，利钠肽家族是当下寻找的左心室收缩功能不全的一个重要的候选 基因座及靶点。以此为目标，开发检测左心室收缩功能不全相关易感基因的方法、试剂盒， 以及治疗药物对揭示左心室收缩功能不全的病理生理途径有重要作用，有助于进一步发现 遗传因素对心血管疾病的影响，同时为预测预防心力衰竭做出有益的尝试。 本专利技术在冠心病病人中首次发现和证明了 NPPA/NPPB基因单核苷酸多态性位 点rsl98388 (位于NPPA/NPPB基因座启动子中，片段重叠群contig :NT_021937. 18位 置6454707C/T)与左心室收缩功能不全密切相关，而且发现了它的新功能：NPPA/NPPB基 因单核苷酸多态性位点rsl98388位于NPPA/NPPB基因座启动子中（片段重叠群contig : NT_021937. 18位置6454707C/T)基因型的改变将导致左心室收缩功能不全的发病风险升 高，其中关联研究结果显示，在冠心病病人中，NPPA/NPPB基因 rsl98388C - T在病例和对 照组中的分布存在显著性差异（P〈〇. 05)，该SNP多态性可参本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的方法，其特征在于，该方法包括步骤：（a）用NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物扩增样品的基因组DNA，得到扩增产物；和（b）检测(a)所得的扩增产物中单核苷酸多态性位点rs198388的基因。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金玮，吴志俊，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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