一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法，方法采用人工控制温湿度和光照将人工饲养的西花蓟马转移到离心管中进行单头孤雌饲养建立近亲繁殖的种群，其特征在于：该方法能够建立西花蓟马孤雌生殖近亲繁殖的种群，获得的雄性后代及连续多代的两性后代可以应用于染色体核型分析、微卫星分析等实验，本发明专利技术对于进一步了解了西花蓟马产雄孤雌生殖特性、近亲繁殖种群的建立有重要意义，对其遗传结构、性别决定模式的分析有进一步的推动作用。

【技术实现步骤摘要】
一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法
本专利技术涉及一种昆虫的饲养及种群建立技术，特别是西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法。
技术介绍
西花蓟马成虫期显著长于未成熟期，且雌虫寿命显著长于雄虫，为通过建立近亲繁殖种群研究其性别决定机制提供了良好的先天条件。以西花蓟马回交繁殖作为起点建立西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群，借助染色体核型分析、微卫星分析、差异表达蛋白鉴定和生物信息学分析及RNAi等技术手段，对西花蓟马近亲繁殖种群发展的各阶段进行系统检测与对比分析，判断西花蓟马性别决定机制，揭示西花蓟马近亲繁殖种群的遗传结构，克隆与验证性别决定的相关基因。研究结果将初步揭示西花蓟马产雄孤雌生殖性别决定机制及其性别调控机理，丰富和发展产雄孤雌生殖性别决定进化研究理论、为下一步西花蓟马抗逆基因伴性遗传和表达的研究提供坚实的理论技术支撑，并最终为西花蓟马的遗传控制技术的开发提供基础理论依据。但是因西花蓟马个体小，运动快，生命力不强，且单头饲养死亡率更高，若想建立孤雌生殖近亲繁殖的种群更是难上加难，对此尚无好的饲养方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法，克服了西花蓟马个体小运动快，生命力不强，且单头饲养死亡率高的缺点。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：所需材料与器材:1.5ml离心管、10ml离心管、小镊子、滤纸、记号笔、剪刀、刀子、毛笔、托盘(70cm×50cm×5cm)、200目纱网、新鲜的紫甘蓝。1、材料的准备：将200目的纱网剪成2cm×2cm、3cm×3cm两种规格以备用；将锥子在酒精灯上烧红，在1.5ml离心管的管盖抠出直径3mm的洞，将铁丝圈烧红，在10ml离心管的管盖抠出直径8mm的洞，所有离心管在使用前都要经过高温灭菌；将滤纸剪成底×高为1.5cm×0.5cm和3cm×1cm两种规格的三角滤纸以备用；买新鲜的紫甘蓝去除薄叶，将叶片中间肥厚的部分切成体积大约为3mm×3mm×10mm的小块，和形状统一规则的甘蓝块放入10ml管中；光照培养箱，饲养西花蓟马的环境条件：温度25+1℃，湿度60％-80％，光周期L:D＝14：8。2、挑选初羽化的雌虫在1.5ml离心管中放入三角滤纸和小甘蓝块，用毛笔挑取西花蓟马的蛹到1.5ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的小纱网盖上管盖。用镊子定期两天更换甘蓝和三角滤纸保证一管一头虫，饲养至羽化为成虫。3、产雄孤雌生殖待虫羽化为成虫，挑选雌虫依次在管盖给虫编号，更换新鲜的甘蓝，之后每天定时用镊子取出甘蓝，放在10ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的大纱网，拧紧管盖，10ml的离心管放入大块甘蓝和三角滤纸，将10ml的离心管对应1.5ml的离心管编号，记录日期，放入光照培养箱中饲养。每天定时观察记录，待虫孵化后定期2天更换新鲜的甘蓝和干燥的三角滤纸。4、近亲繁殖建立种群将初羽化的雄性后代随机挑选一头与对应的母代放入同一离心管中回交，并标记为回交亲本，记录日期。每天定期取出甘蓝放入10ml离心管中，同样放入更大块甘蓝，对应编号、记录日期，置于光照培养箱中饲养。每天观察记录，待虫孵化，每隔2天定时更换新鲜的甘蓝和干燥的滤纸。5、姊妹近亲繁殖待两性回交的后代羽化为成虫，选取一个雄性后代和一个雌性后代作为第二代姊妹近亲繁殖的对象，按照上述方法连续饲养十代，以备后续试验需要。6、注意事项：若饲养过程中回交亲本的父本死亡，母本仍然存活，在母本对应的产雄孤雌生殖的雄性后代中再随机挑选出一头雄虫与之继续回交；若母本死亡，父本仍然存活，将母本的尸体置于1.5ml离心管中，将父本也置于1.5ml离心管中，放在-80℃冰箱中冷冻保存以备后续试验需要。待大部分产雄孤雌生殖的雄性后代羽化为成虫，根据虫量取适量蓟马置于-80℃冰箱中冷冻保存以备后续试验需要，其他正常饲养，观察记录其发育历期。本专利技术所用的1.5ml的离心管空间适宜虫活动，利于观察虫的生长发育状况。本专利技术所用的三角滤纸能够吸湿保持管内干燥。本专利技术所用的新鲜的甘蓝茎能够提供西花蓟马取食，避免其逃逸或者死亡。本专利技术所用的200目纱网和管盖的洞起到保持管内空气流通，避免其逃逸。本专利技术挑选处于蛹状态的西花蓟马是为了防止在它羽化之后与其他虫发生交配，保证是孤雌生殖。本专利技术软毛笔轻挑虫子是减少转移的时候人为伤害保证实验数据的准确性，保证存活率。本专利技术将虫依次编号是为了将它们的后代与其对应，以备后续的实验需要。本专利技术每隔24h定时取出甘蓝是为了建立种群，置于10ml离心管饲养是方便观察其生长发育状况且可以最大限度减少对其的人为干扰保证实验数据的准确性，便于观察记录。本专利技术用镊子更换紫甘蓝及三角滤纸不但操作方便而且可以减少人为干扰保证实验数据的准确性。另外，为了研究近亲回交之后西花蓟马种群增长方面是否发生了变化，我们将回交之后的雌成虫，与未回交和非近亲杂交(♀：♂＝1：3)两种状态下的雌成虫进行了一系列生命参数的对比(表1)。结果表明，雌成虫在回交之后，与未回交及正常杂交相比，其产卵前期及总产卵前期都未发生明显变化，但是回交之后产卵期比其他状态明显缩短，每雌产卵量明显下降，雌虫寿命明显缩短，同时回交之后的产卵后期明显长于未回交状态，但是也明显短于正常杂交状态。以上生命参数的变化，表明本方法建立的近亲繁殖种群已经在雌成虫关键生命参数的表现上出现了明显变化，这为下一步以西花蓟马近亲繁殖种群为载体深入研究西花蓟马性别决定、种群分化以及入侵机制等方面打下了坚实的基础。表1近亲繁殖种群回交与未回交状态下西花蓟马雌虫繁殖相关参数具体实施方式实施例1：1、材料的准备：将200目的纱网剪成2cm×2cm、3cm×3cm两种规格以备用；将锥子在酒精灯上烧红，在1.5ml离心管的管盖抠出直径3mm的洞，将铁丝圈烧红，在10ml离心管的管盖抠出直径8mm的洞，所有离心管在使用前都要经过高温灭菌；将滤纸剪成底×高为1.5cm×0.5cm和3cm×1cm两种规格的三角滤纸以备用；买新鲜的紫甘蓝去除薄叶，将叶片中间肥厚的部分切成体积大约为3mm×3mm×10mm的小块，和形状统一规则的甘蓝块放入10ml管中；光照培养箱，饲养西花蓟马的环境条件：温度25℃，湿度60％-80％，光周期L:D＝14：8。2、挑选初羽化的雌虫在1.5ml离心管中放入三角滤纸和小甘蓝块，用毛笔挑取西花蓟马的蛹到1.5ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的小纱网盖上管盖。用镊子定期两天更换甘蓝和三角滤纸保证一管一头虫，饲养至羽化为成虫。3、产雄孤雌生殖待虫羽化为成虫，挑选雌虫依次在管盖给虫编号，更换新鲜的甘蓝，之后每天定时用镊子取出甘蓝，放在10ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的大纱网，拧紧管盖，10ml的离心管放入大块甘蓝和三角滤纸，将10ml的离心管对应1.5ml的离心管编号，记录日期，放入光照培养箱中饲养。每天定时观察记录，待虫孵化后定期2天更换新鲜的甘蓝和干燥的三角滤纸。4、近亲繁殖建立种群将初羽化的雄性后代随机挑选一头与对应的母代放入同一离心管中回交，并标记为回交亲本，记录日期。每天定期取出甘蓝放入10ml离心管中，同样放入更大块甘蓝，对应编号、记录日期，置于光照培养箱中饲养。每天观察记录，待虫孵化，每隔2天定时更换新鲜的甘本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法，由以下步骤组成：1)挑选初羽化的雌虫在1.5ml离心管的管盖抠出直径3mm的洞，高温灭菌后，在离心管中放入小三角滤纸和小甘蓝块，用毛笔挑取西花蓟马的蛹到1.5ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的小纱网盖上管盖，用镊子定期两天更换甘蓝和小三角滤纸保证一管一头虫，饲养至羽化为成虫；2)产雄孤雌生殖待虫羽化为成虫，挑选雌虫依次在管盖给虫编号，更换新鲜的甘蓝，之后每天定时用镊子取出甘蓝，放在10ml的离心管中，离心管的管盖抠出直径8mm的洞，离心管在使用前要经过高温灭菌，在管口铺一层裁剪好的大纱网，拧紧管盖，10ml的离心管放入大块甘蓝和大三角滤纸，将10ml的离心管对应1.5ml的离心管编号，记录日期，放入光照培养箱中饲养，每天定时观察记录，待虫孵化后定期2天更换新鲜的甘蓝和干燥的三角滤纸；3)近亲繁殖建立种群将初羽化的雄性后代随机挑选一头与对应的母代放入同一离心管中回交，并标记为回交亲本，记录日期，每天定期取出甘蓝放入10ml离心管中，同样放入更大块甘蓝，对应编号、记录日期，置于光照培养箱中饲养，每天观察记录，待虫孵化，每隔2天定时更换新鲜的甘蓝和干燥的滤纸；4)姊妹近亲繁殖待两性回交的后代羽化为成虫，选取一个雄性后代和一个雌性后代作为第二代姊妹近亲繁殖的对象，按照上述方法连续饲养十代，以备后续试验需要。...

【技术特征摘要】
1.一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法，由以下步骤组成：1)挑选初羽化的雌虫在1.5ml离心管的管盖抠出直径3mm的洞，高温灭菌后，在离心管中放入小三角滤纸和小甘蓝块，用毛笔挑取西花蓟马的蛹到1.5ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的小纱网盖上管盖，用镊子定期两天更换甘蓝和小三角滤纸保证一管一头虫，饲养至羽化为成虫；2)产雄孤雌生殖待虫羽化为成虫，挑选雌虫依次在管盖给虫编号，更换新鲜的甘蓝，之后每天定时用镊子取出甘蓝，放在10ml的离心管中，离心管的管盖抠出直径8mm的洞，离心管在使用前要经过高温灭菌，在管口铺一层裁剪好的大纱网，拧紧管盖，10ml的离心管放入大块甘蓝和大三角滤纸，将10ml的离心管对应1.5ml的离心管编号，记录日期，放入光照培养箱中饲养，每天定时观察记录，待虫孵化后定期2天更换新鲜的甘蓝和干燥的大三角滤纸；3)近亲繁殖建立种群将初羽化的雄性后代随机挑选一头与对应的母代放入同一离心管中回交，并标记为回交亲本，记录日期，每天定期取出甘蓝放入10ml离心管中，同样放入更大块甘蓝，对应编...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彬，郑长英，臧萌，孙启霞，姜培茹，李洪刚，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37