本发明专利技术公开了一种新型血小板冻干处理液，由两部分组成：（1）血小板冻干预处理液，它是在基础缓冲液中加入海藻糖和PGE1；（2）血小板冻干缓冲液，它是在冻干预处理液的基础上加入血浆。本发明专利技术优选30%v/v～40%v/v血浆来代替人血清白蛋白，并取得了很好的效果，用它来代替昂贵的白蛋白作为血小板蛋白质类保护剂，经济实惠。本发明专利技术预处理液的渗透压为311.6mOsm，与血浆渗透压相近，不会对血小板产生不良影响。此外冻干缓冲液重量浓度为29%w/v，得到的冻干血小板外观尚可。本发明专利技术的冻干血小板可以在室温下稳定保存至少6个月，为下一步制备血小板止血药以及在手术中使用的血小板制品提供了便利和可能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血小板冻干干燥保存领域，具体涉及一种血小板冻干处理液。
技术介绍
血小板的冷冻干燥研宄开始于20世纪50年代，然而当时研宄结果并没有像人们 预期的那样成功。直到2001年，WolkersWF等再次对血小板进行了冻干保存的研宄，首次 使用海藻糖对血小板进行冻干前预处理，成功的冻干了血小板。前人对血小板冻干保存的 尝试预示着血小板冻干保存的可能性，冻干保存血小板成了研宄热点，国内亦有多家单位 对血小板进行了冻干研宄，但是目前已报道的冻干配方存在一些不足，如配方中蛋白质类 保护剂用人血清白蛋白，价格昂贵，且不易获取；也有用二甲基亚砜（dimethylsulfoxide， DMS0)预处理的，它有一定的毒性，且处理步骤繁琐等。目前依然没有一个公认的、稳定可靠 且经济的血小板冻干保存方法。 还应该注意血小板冻干缓冲液渗透压和浓度问题，目前冻干血小板的研宄都很少 提到这一点。冻干缓冲液渗透压过高或过低都对血小板不利。冻干缓冲液浓度是决定冻干 成败及冻干产品质量的一个重要因素。冻干工艺要求冻干缓冲液重量浓度（w/v)在4%~ 25%之间为宜，最佳浓度在10%~15%。如果缓冲液浓度太高，干燥时药液表面首先干燥， 形成结构致密的表层，该表层孔隙细小，透气性差，因此下面的水气难以穿过干燥层，因而 沿瓶壁上升，导致制品离壁、萎缩；或使水气在干燥层停留时间过长，干燥的表层制品重新 吸潮，导致制品塌陷，体积缩小；另外，浓度太高时，药液在干燥过程中容易结块，所得制品 外观不均匀；缓冲液浓度过低时，所得制品结构比较疏松、机械强度低，在包装及运输过程 中受到振动易萎缩或变成粉末，影响制品的外观，甚至会导致溶质随水汽一起飞走，导致冻 干失败。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种血小板冻干处理液； 本专利技术的另一目的在于提供一种血小板冻干处理方法。 本专利技术所采取的技术方案是： 一种血小板冻干处理液，由以下两部分组成： 1) 血小板冻干预处理液：由基础缓冲液加40~60mmol/L海藻糖和可逆性血小板激活 抑制剂，调节PH为6. 6~6. 8,过滤后制备得到； 2) 血小板冻干缓冲液：由基础缓冲液加40~60mmol/L海藻糖、可逆性血小板激活抑 制剂以及蛋白质类保护剂，调PH为6. 6~6. 8,过滤后制备得到。 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，基础缓冲液的组成成分为：55mm〇l/ LNaCl, 2.lmmol/LKC1,0. 7mmol/LCaCl2,1.lmmol/LMgS04,31mmol/LNaHC03,3. 4mmol/L梓 檬酸，6. 7mmol/L梓檬酸钠，15mmol/L乙酸钠，10. 7mmol/L葡萄糖。 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，海藻糖的浓度为50mmol/L。 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，可逆性血小板激活抑制剂为0. 8~ L2ug/mLPGEl或 5mmol/LL-Arg0 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，可逆性血小板激活抑制剂为lug/ mLPGElo 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，蛋白质类保护剂为2%v/v的BSA或30%v/v~40% v/v的血衆。 作为上述血小板冻干处理液的进一步改进，蛋白质类保护剂为30%v/v的血衆。 一种血小板冻干处理液，由以下两部分组成： (1) 血小板冻干预处理液：包括 55mmol/LNaCl，2.1mmol/LKCl，0.7mmol/LCaCl2， I.lmmol/LMgS04, 31mmol/LNaHC03, 3. 4mmol/L朽1 樣酸，6. 7mmol/L梓樣酸纳，15mmol/L乙 酸钠，10. 7mmol/L葡萄糖，50mmol/L海藻糖，lug/mLPGEl;调节pH为6. 6~6. 8,过滤后制 备得到； (2) 血小板冻干缓冲液：包括 55mmol/LNaCl，2.lmmol/LKCl，0.7mmol/LCaCl2， I.lmmol/LMgS04, 31mmol/LNaHC03, 3. 4mmol/L朽1 樣酸，6. 7mmol/L梓樣酸纳，15mmol/L乙 酸钠，10. 7mmol/L葡萄糖，50mmol/L海藻糖，lug/mLPGE1，30%血衆；调节pH为 6. 6 ~6. 8， 过滤后制备得到。 一种血小板冻干处理方法，包括下列步骤： 1) 取血小板样品，离心弃上清液留沉淀，用与弃去上清同体积的血小板冻干预处理液 重悬血小板，37°C振荡水浴3h~6h，使血小板保持悬浮状态； 2) 水浴后，将血小板悬液再离心，弃上清液留沉淀，用与弃去上清同体积的血小板冻干 缓冲液重悬血小板； 3) 将预处理后的血小板悬液转移至冻干瓶中，于_80°C超低温预冻过夜，次日转入已 预冷的冻干机进行真空干燥，冷阱温度为_45±5°C，真空度为< 133mbar，真空干燥24h后 取出，将其密封后置于室温下保存； 其中所述血小板冻干预处理液及血小板冻干缓冲液如上所述。 本专利技术的有益效果是： 本专利技术公开了 一种血小板冻干处理液及冻干处理方法，即用基础缓冲液加50mmol/L海藻糖和IUg/mlPGEl对血小板冻干前水浴负载海藻糖，再用基础缓冲液加50mmol/L海 藻糖、Iyg/mlPGEl和30%v/v~40%v/v血衆重悬血小板后冻干，制备得到了可在室温 下稳定保存的冻干血小板。 本专利技术采用PGEl为可逆性血小板激活抑制剂，PGEl可有效抑制血小板聚集，降低 血栓素A2水平，还可抑制血小板活化，促进血栓周围已活化的血小板逆转；通过研宄发现PGEl对冻干后血小板回收率效果佳。 白蛋白是一种常用的蛋白质类冻干保护剂，由于人血清白蛋白比较昂贵，而且很 难得，本专利技术优选2%v/v的BSA来代替人血清白蛋白制备得到冻干血小板，可满足各种外 部的使用需求。如果是在手术输液中的使用，考虑到BSA是牛血清蛋白，在人体中使用可能 会存在排异或者过敏反应的风险，本专利技术优选30%v/v~40%v/v血衆来代替人血清白蛋 白，并取得了很好的效果。血浆是很常见且较廉价的原料，而且含有白蛋白等蛋白质，用它 来代替昂贵的白蛋白作为血小板蛋白质类保护剂，经济实惠。 本专利技术的血小板冻干处理液包括冻干预处理液和冻干缓冲液，其渗透压均为 311.6mOsm，与血浆渗透压（290~310m0sm)相近，不会对血小板产生不良影响。此外冻干 缓冲液重量浓度（w/v)约为29%;得到的冻干血小板外观尚可。 将本专利技术的冻干血小板分别置于_20°C、4°C和室温下保存Od~180d，发现保存时 间相同的情况下，冻干血小板复水化后血小板回收率、MPV、血小板相对聚集率以及血小板 激活后释放的生长因子TOGF-BB、TGF- 0和VEGF差异均无显著性，即冻干血小板在三种温 度下保存效果相当。 本专利技术的冻干血小板可以在室温下稳定保存至少6个月，为下一步制备血小板止 血药以及在手术中使用的血小板制品提供了便利和可能。【附图说明】 图1为透射电镜下血小板形态（40000X); 其中：a为冻干前血小板；b为复水化的冻干血小板。【具体实施方式】 英文缩略词如下： PGEl为前列腺素El，L-Arg为左旋当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血小板冻干处理液，由以下两部分组成：血小板冻干预处理液：由基础缓冲液加40～60 mmol/L海藻糖和可逆性血小板激活抑制剂，调节pH为6.6～6.8，过滤后制备得到；血小板冻干缓冲液：由基础缓冲液加40～60 mmol/L海藻糖、可逆性血小板激活抑制剂以及蛋白质类保护剂，调pH为6.6～6.8，过滤后制备得到。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：单桂秋，马静，耿文艳，张雅妮，吕品，程飚，
申请(专利权)人：广州军区广州总医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。