缓冲水溶液中检测亲和素的近红外荧光探针的制备方法，将SQ和二胺类物质加入到无水二氯甲烷溶剂中，室温下搅拌，制备得到中间产物；将制备得到的中间产物和三乙胺加入到无水N,N'-二甲基甲酰胺溶剂中混合，将溶有Biotin-NHS的无水N,N'-二甲基甲酰胺溶液逐滴加入到上述混合液中，室温环境下搅拌过夜，得到近红外荧光探针；本发明专利技术的制备方法简单，易于合成，制备的近红外荧光探针，能够克服现有的荧光探针性能上的不足之处，能够准确、灵敏地检测缓冲水溶液中检测亲和素，具有选择性好、灵敏度高等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及小分子巧光探针
，特别设及缓冲水溶液中检测亲和素的近红 外巧光探针的制备方法。
技术介绍
亲和素作为一种生物蛋白质，在肿瘤/癌细胞中出现的机率比在正常细胞出现的 机率要高很多，对亲和素的定性和定量检测相应地可作为肿瘤细胞诊断的重要依据之一。 此外生物素与亲和素之间的该种强亲和专一性相互作用，广泛用于生物分析领域，如酶联 免疫也就是化ISA法测定、生物分子识别、肿瘤细胞诊断等。因此，开发高灵敏和选择性地 检测亲和素的探针成为研究的焦点。 近年来，巧光探针由于其具有选择性好、灵敏度高、响应时间快、可实现原位检测 的优点，在生物分子检测方面得到很好的应用。但理想的亲和素巧光探针分子应该自身巧 光很弱或最好不发巧光，只有当亲和素存在下才发光，产生显著的巧光增强，实现高灵敏性 检测。 亲和素蛋白含有疏水性空腔，巧光探针如与亲和素通过疏水性相互作用，探 针分子可从水溶液进入疏水性空腔。作用前后染料所处环境发生改变，诱导巧光产生 。 虽然可W选择环境敏感的巧光探针分子来调控其自身巧光，实现显著巧光增强，但是 大多数染料不具有巧光环境敏感的特性。虽然大多数染料具有聚集诱导的巧光泽 灭（AC曲特性，可通过调控染料聚集降低探针分子的自身巧光，如罗丹明、巧光素与 生物素相连得到的亲和素巧光探针，可实现显著巧光增强，但该些巧光探针需要引 入合适的亲疏水基团来调控染料聚集，W期达到降低探针分子自身巧光的目的。因此需要复杂的有机合成，此外引入的该些基团可能会影 响探针与亲和素的特异性作用，最终影响检测结果。目前大部分亲和素巧光探针分子处于 短波长区，激发时会对生物组织产生损伤，在该检测区域生物体自发巧光也对检测产生严 重干扰，使其在实际应用中受到一定的限制。因此研究开发在缓冲水溶液中检测亲和素的 近红外巧光探针具有重要理论和实际应用价值。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供缓冲水溶液中检测亲和素 的近红外巧光探针的制备方法，能够克服现有的巧光探针性能上的不足之处，且具有合成 简单、检验灵敏准确的特点。 为了达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为： 缓冲水溶液中检测亲和素的近红外巧光探针的制备方法，将方酸菁染料（S曲和 二胺类物质加入到无水二氯甲烧溶剂中，室温下揽拌，制备得到中间产物SQ-n-NH2,其中，n为二胺类物质中C原子数量的一半；[000引将制备得到的中间产物SQ-n-NH2和S己胺加入到无水N，N' -二甲基甲酯胺溶剂 中混合，制备得到混合液A，其中，SQ-n-NH2、S己胺与无水N，N' -二甲基甲酯胺溶剂的摩尔 比为1 ;0. 19 ; 166 ;将溶有N-哲基班巧酷亚胺活化的生物素炬iotin-N服）的无水N，N' -二 甲基甲酯胺溶液逐滴加入到上述混合液A中，其中，溶有N-哲基班巧酷亚胺活化的生物素 炬iotin-N服）的无水N，N'-二甲基甲酯胺溶液与混合液A的摩尔比为1 ;160.8,室温环境 下揽拌过夜，得到近红外巧光探针。 具体的，将方酸菁染料（S曲和二胺类物质加入到无水二氯甲烧溶剂中，在氮气流 保护下，室温环境中揽拌，然后蒸除无水二氯甲烧溶剂后得到中间产物SQ-n-NH2,所述中间 产物SQ-n-NH2为粗品SQ-n-NH2,粗品SQ-n-NH2不经纯化直接用于下一步反应； 将制备得到的中间产物SQ-n-NH2和S己胺加入到无水N，N' -二甲基甲酯胺溶剂 中混合，制备得到混合液A，其中，SQ-n-NH2、S己胺与无水N，N'-二甲基甲酯胺溶剂的摩尔 比为1 ;0. 19 ; 166 ;将溶有N-哲基班巧酷亚胺活化的生物素炬iotin-N服）的无水N，N' -二 甲基甲酯胺溶剂逐滴加入到上述混合液A中，其中，溶有N-哲基班巧酷亚胺活化的生物素 炬iotin-N服）的无水N，N'-二甲基甲酯胺溶液与混合液A的摩尔比为1 ;160.8,在氮气流 保护下，室温环境中揽拌过夜，然后蒸除无水N，N'-二甲基甲酯胺溶剂后得到近红外巧光 探针粗产品；经硅胶柱分离得到深藍色固体，即得近红外巧光探针。 方酸菁染料（S曲和二胺类物质的摩尔比为1:1. 1。 二胺类物质主要包括；己二胺、了二胺和己二胺。 进一步的，所述中间产物SQ-n-NH2的分子式结构（机构式）为：【主权项】1. ，其特征在于，包括： 将方酸菁染料（S?和二胺类物质加入到无水二氯甲烷溶剂中，室温下搅拌，制备得到 中间产物SQ-n-NH2，其中，n为二胺类物质中C原子数量的一半； 将制备得到的中间产物SQ-n-NH2和三乙胺加入到无水N，N' -二甲基甲酰胺溶剂中混 合，制备得到混合液A，其中，SQ-n-NH2、三乙胺与无水N，N' -二甲基甲酰胺溶剂的摩尔比 为1 :0. 19 :166 ;将溶有N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素（Biotin-NHS)的无水N，N' -二 甲基甲酰胺溶液逐滴加入到上述混合液A中，其中，溶有N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素 (Biotin-NHS)的无水N，N'_二甲基甲酰胺溶液与混合液A的摩尔比为1 :160.8,室温环境 下搅拌过夜，得到近红外荧光探针。2. 根据权利要求1所述的，其 特征在于，包括： 将方酸菁染料（SQ)和二胺类物质加入到无水二氯甲烷溶剂中，在氮气流保护下， 室温环境中搅拌，然后蒸除无水二氯甲烷溶剂后得到中间产物SQ-n-NH2，所述中间产物 SQ-n-NH2为粗品SQ-n-NH2，粗品SQ-n-NH2不经纯化直接用于下一步反应； 将制备得到的中间产物SQ-n-NH2和三乙胺加入到无水N，N' -二甲基甲酰胺溶剂中混 合，制备得到混合液A，其中，SQ-n-NH2、三乙胺与无水N，N' -二甲基甲酰胺溶剂的摩尔比 为1 :0. 19 :166 ;将溶有N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素（Biotin-NHS)的无水N，N' -二 甲基甲酰胺溶剂逐滴加入到上述混合液A中，其中，溶有N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素 (Biotin-NHS)的无水N，N' -二甲基甲酰胺溶液与混合液A的摩尔比为1 :160. 8,在氮气流 保护下，室温环境中搅拌过夜，然后蒸除无水N，N'_二甲基甲酰胺溶剂后得到近红外荧光 探针粗产品；经硅胶柱分离得到深蓝色固体，即得近红外荧光探针。3. 根据权利要求2所述的，其 特征在于，包括： 将方酸菁染料（S?和乙二胺加入到无水二氯甲烷溶剂中，所述方酸菁染料（S?和乙 二胺的摩尔比为1:1. 1，在氮气流保护下，室温环境中搅拌，然后蒸除无水二氯甲烷溶剂后 得到中间产物SQ-NH2 (即SQ-n-NH2,n= 1)，所述中间产物SQ-NH2为粗品SQ-NH2，粗品SQ-NH2 不经纯化直接用于下一步反应； 将制备得到的中间产物SQ-NH2和三乙胺加入到无水N，N' -二甲基甲酰胺溶剂中混合， 制备得到混合液A;将溶有N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素（Biotin-NHS)的无水N，N'_二 甲基甲酰胺溶剂逐滴加入到上述混合液A中，所述SQ-NHJPN-羟基琥珀酰亚胺活化的生物 素（Biotin-NHS)的摩尔比可以为1:0. 3,所述三乙胺、加入SQ-NH#三乙胺的无水N，N'_二 甲基甲酰胺溶剂和加入N-羟基琥珀酰亚本文档来自技高网...
【技术保护点】
缓冲水溶液中检测亲和素的近红外荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：将方酸菁染料(SQ)和二胺类物质加入到无水二氯甲烷溶剂中，室温下搅拌，制备得到中间产物SQ‑n‑NH2，其中，n为二胺类物质中C原子数量的一半；将制备得到的中间产物SQ‑n‑NH2和三乙胺加入到无水N,N'‑二甲基甲酰胺溶剂中混合，制备得到混合液A，其中，SQ‑n‑NH2、三乙胺与无水N,N'‑二甲基甲酰胺溶剂的摩尔比为1：0.19：166；将溶有N‑羟基琥珀酰亚胺活化的生物素(Biotin‑NHS)的无水N,N'‑二甲基甲酰胺溶液逐滴加入到上述混合液A中，其中，溶有N‑羟基琥珀酰亚胺活化的生物素(Biotin‑NHS)的无水N,N'‑二甲基甲酰胺溶液与混合液A的摩尔比为1：160.8，室温环境下搅拌过夜，得到近红外荧光探针。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐勇前，孙世国，贺卿原，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。