【技术实现步骤摘要】
【专利说明】—种将基因转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法
本专利技术涉及生物
，特别是指一种将如基因转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法。
技术介绍
定向的改造野生型菌株，使之适合不同环境、不同靶标的生物防治，无疑具有重要的理论和现实意义。因此近年来，人们开始热衷于利用分子生物学及分子遗传学的手段进行生防菌的遗传改良，改善它们对环境条件的适应性、扩大应用范围。芽孢杆菌表达系统中研究较成熟的菌株是枯草芽孢杆菌，但是由于其胞外蛋白酶活性很强，会大量降解外源蛋白，所以在构建工程生防菌株时造成较大的局限性；苏云金芽孢杆菌虽然胞外蛋白酶活性不高，但是野生菌株中含有大量的内生质粒，而这些内生质粒对外源基因的导入和表达带来较大的影响；短芽孢杆菌和短短芽孢杆菌则只有枯草芽孢杆菌的1.6%胞外蛋白酶活性(Udaka etal.1993)并且细胞壁较薄，内生质粒较少,所以成了生防菌株和外源蛋白表达系统构建中宿主细胞的重要选择。目前外源基因导入宿主菌的主要手段有感受态法、原生质体转化法和电击转化法。原生质体转化法虽然有较高的转化率，但由于短芽孢杆菌细胞壁的特殊结构(...
【技术保护点】
一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB‑5的化学转化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将短短芽孢杆菌HAB‑5在LB平板上活化，挑取单菌落接种于LB液体培养基中培养得短短芽孢杆菌HAB‑5菌液；(2)转接经步骤(1)培养的菌液到MD培养基中培养；(3)离心后倒去上清液，剩余悬浮菌体即得HAB‑5悬浮菌体溶液；(4)HAB‑5悬浮菌体溶液加入hpa1Xoo得混合菌液，200‑250rpm振荡培养；(5)加入混合菌液体积10倍的LB，200‑250rpm振荡恢复培养；(6)离心后除去上清液，即得含有hpa1Xoo基因的HAB‑5。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：缪卫国，汪惠，刘文波，政服丛，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;66
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