一种采用高速逆流色谱从海刀豆中分离多酚单体的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，包括以下步骤：(1)将海刀豆用加速溶剂萃取法提取，得粗提物；(2)选取高速逆流色谱的溶剂系统；(3)将粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂系统的下相溶解，得高速逆流色谱分离样液；(4)采用高速逆流色谱分离样液，收集各流分；(5)将各流分采用高效液相色谱分析，通过高效液相色谱的保留时间定性，收集与粗提物主要成分保留时间一致的流分即为多酚单体。该方法将加速溶剂萃取ASE与高速逆流色谱HSCCC联用实现海刀豆中多酚单体的分离纯化，其精密度和重现性相对传统的分离纯化方法得到了提升。且操作简单、耗时短、适用范围广、对环境污染小、易于工业推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海刀豆提取
，具体涉及一种采用高速逆流色谱从海刀豆中分 离制备多酚单体的方法。
技术介绍
海刀豆（Canavalia maritime)属于豆科刀豆属，在我国沿海滩涂有广泛分布， 其主要成分为黄酮类、多酚类、黄烷类、留醇类化合物，具有抗肿瘤、细胞毒性、溶血脂等作 用。2, 3, 4-三羟基-6-甲氧基-6-氧代-5-己酸是分 布于海刀豆中的主要活性物质，是一种多酷单体，其分子式为C24H 18N2O4, ChemSpider ID : 8771037 (http://www. chemspider. com/Molecular-Formula/C14H16012)，结构式如下：【主权项】1. 一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征包括以下步骤： (1) 选取海刀豆，采用加速溶剂萃取法提取后，获得海刀豆粗提物； (2) 选取高速逆流色谱的溶剂体系； (3) 将步骤（1)获得的海刀豆粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂体系的下相溶 解，得到高速逆流色谱分离样液； (4) 采用高速逆流色谱分离步骤（3)的样液，并收集各流分； (5) 将步骤（1)获得的海刀豆粗提物用高效液相色谱分析，确定最大色谱峰的保留时 间； (6) 将步骤（4)收集的各流分采用高效液相色谱分析，收集与步骤（5)中最大色谱峰的 保留时间一致的流分，即为多酚单体。2. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（1)中采用加速溶剂萃取法提取时，萃取溶剂为体积百分含量为50~90%的甲 醇，萃取温度为50~130°C，萃取压力为10. 3MPa~20. 6MPa，循环次数为1~5次，每次萃 取时间为5~25min，萃取池容积为10~66mL。3. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤⑵中高速逆流色谱的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中正己烷-乙 酸乙酯-甲醇-水的体积比为2:5:2:5。4. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（4)中采用高速逆流色谱分离时，分离条件为：流速为I. 0~3. OmL/min，转速为 700 ~900rpm/min，检测波长为 283nm。5. 根据权利要求1-5任一项所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法， 其特征是：步骤（4)中采用高速逆流色谱分离时，以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动 相。6. 根据权利要求1-5任一项所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法， 其特征是：步骤（5)~（6)中高效液相色谱分析的条件为：Athena C18-WP，4.6mmX250mm， 5 ym ;流动相为甲醇-0. 2%冰醋酸，二者的体积比为20 :80 ;检测器88232UV紫外检测仪， 检测波长283nm ;流速lmL/min ;柱温30°C ;进样量20 y L。7. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（6)中多酚单体的纯度大于95%。【专利摘要】本专利技术公开了一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，包括以下步骤：(1)将海刀豆用加速溶剂萃取法提取，得粗提物；(2)选取高速逆流色谱的溶剂系统；(3)将粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂系统的下相溶解，得高速逆流色谱分离样液；(4)采用高速逆流色谱分离样液，收集各流分；(5)将各流分采用高效液相色谱分析，通过高效液相色谱的保留时间定性，收集与粗提物主要成分保留时间一致的流分即为多酚单体。该方法将加速溶剂萃取ASE与高速逆流色谱HSCCC联用实现海刀豆中多酚单体的分离纯化，其精密度和重现性相对传统的分离纯化方法得到了提升。且操作简单、耗时短、适用范围广、对环境污染小、易于工业推广。【IPC分类】C07C67-48, C07C69-84, C07C67-56【公开号】CN104744260【申请号】CN201510167203【专利技术人】邓建朝, 李来好, 杨贤庆, 牛改改, 吴燕燕, 戚勃, 马海霞, 胡晓, 荣辉, 黄卉, 赵永强, 王锦旭 【申请人】中国水产科学研究院南海水产研究所【公开日】2015年7月1日【申请日】2015年4月9日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征包括以下步骤：(1)选取海刀豆，采用加速溶剂萃取法提取后，获得海刀豆粗提物；(2)选取高速逆流色谱的溶剂体系；(3)将步骤(1)获得的海刀豆粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂体系的下相溶解，得到高速逆流色谱分离样液；(4)采用高速逆流色谱分离步骤(3)的样液，并收集各流分；(5)将步骤(1)获得的海刀豆粗提物用高效液相色谱分析，确定最大色谱峰的保留时间；(6)将步骤(4)收集的各流分采用高效液相色谱分析，收集与步骤(5)中最大色谱峰的保留时间一致的流分，即为多酚单体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓建朝，李来好，杨贤庆，牛改改，吴燕燕，戚勃，马海霞，胡晓，荣辉，黄卉，赵永强，王锦旭，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院南海水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44