本发明专利技术公开了一种番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术提供了产生番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株Pst10号，其保藏号为CGMCC No.10119。还提供了由上述的杂交瘤细胞株10号分泌产生的单克隆抗体。本发明专利技术所提供的番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与番茄细菌性叶斑病菌3个不同菌株均起反应，具有较好的广谱性。应用于番茄细菌性叶斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本发明专利技术研制的番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体可用于研制番茄细菌性叶斑病菌的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体及其 应用。
技术介绍
番前细菌性叶斑病菌（Pseudomonassyringaepv.tomato,Pst)是我国 进境检疫性有害生物，为革兰氏阴性菌，菌体短杆状，直或稍弯，单细胞，大小为 0. 1-1ymX1.5-4ym。该病菌主要为害番茄的叶、茎、花、叶柄和果实。该病自1933年首次 报道以来，在美国、英国、前苏联、加拿大、法国、南非、澳大利亚等26个国家和中国的吉林、 辽宁、黑龙江、河北、天津、甘肃、新疆、福建、广西、台湾等地有发生报道。病菌可在种子、病 残体、土壤和杂草上越冬，可随种子远距离传播。该病发生有逐年上升的趋势，对我国的番 茄生产构成严重的威胁。 番茄上细菌病害的快速检测和诊断是番茄健康生产的基础，以ELISA为代表的免 疫学检测方法是最重要的一类检测方法，广泛用于植物细菌病害的检测，而特异性强、灵敏 度高的单克隆抗体是各种免疫学检测方法的基础。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供一种番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株。 本专利技术提供的杂交瘤细胞株Pst10号，其保藏号为CGMCCNo. 10119。 由上述的杂交瘤细胞株Pst10号分泌产生的单克隆抗体也是本专利技术保护的范 围。 本专利技术的另一个目的是提供一种酶标抗体。 本专利技术提供的酶标抗体，为将上述的单克隆抗体用标记酶标记后形成的酶标抗 体，所述标记酶具体为碱性磷酸酯酶。 上述的单克隆抗体或上述的酶标抗体在制备番前细菌性叶斑病菌检测试剂盒中 的应用也是本专利技术保护的范围。 上述的单克隆抗体在制备检测番茄细菌性叶斑病菌的胶体金检测试纸条中的应 用也是本专利技术保护的范围。 含有上述的单克隆抗体或上述的酶标抗体的用于检测番茄细菌性叶斑病菌的试 剂盒也是本专利技术保护的范围。 含有上述的单克隆抗体用于检测番茄细菌性叶斑病菌的胶体金检测试纸条也是 本专利技术保护的范围。 本专利技术所提供的试剂盒中，还包括独立包装的包被抗体；其中，包被抗体为番茄细 菌性叶斑病菌的多克隆抗体；在本专利技术中，所述番茄细菌性叶斑病菌包被抗体具体为ACD Diagnostics公司的产品，其产品目录号为B264-C2。 本专利技术所提供的试剂盒中，还包括独立包装的如下1)_5)试剂中的至少一种： 1)包被缓冲液：将碳酸钠1. 59g，碳酸氢钠2. 93g和叠氮化钠0. 20g溶于水，用水 定容至1L;包被缓冲液的pH值为9. 6。 2)样品抽提缓冲液：将亚硫酸钠1. 3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于洗涤缓冲液 中，用洗涤缓冲液定容至1L。 3)洗涤缓冲液：将氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠1. 15g，氯化钾 0. 2g，吐温200. 5mL，叠氮化钠0. 2g溶于水中，用水定容至1L;所述洗涤缓冲液的pH值为 7. 4。 4)酶标抗体稀释缓冲液：将聚乙烯基吡咯烷酮20g和牛血清白蛋白2g溶于洗涤 缓冲液中，用洗涤缓冲液定容至1L。 5)底物溶液：将二乙醇胺97mL和对硝基苯磷酸二钠（现配现用）lg溶于水中，调 节pH值至9. 8,用水定容至1L。 上述试剂盒在定性或定量检测番茄细菌性叶斑病菌中的应用，也属于本专利技术的保 护范围。 在本专利技术中，以上所有的番茄细菌性叶斑病菌均可具体为番茄细菌性叶斑病菌 (Pseudomonas syringae pv. tomato)ATCC BAA-871〇 实验证明，本专利技术所提供的番茄细菌性叶斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价 高，与番茄细菌性叶斑病菌的3个不同菌株均起反应，具有较好的广谱性。应用于番茄细菌 性叶斑病菌的免疫学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本专利技术研制的番茄细菌性 叶斑病菌的单克隆抗体可用于研制番茄细菌性叶斑病菌的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试 剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。 参据的生物材料（株）：Pst10号 科学描述：分泌番茄细菌性叶斑病菌单克隆抗体的细胞株 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 保藏机构简称：CGMCC 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 保藏日期：2014年12月11日 保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.10119【附图说明】 图1为单克隆抗体SDS-PAGE电泳 图2为单克隆抗体亲和常数确定【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 弗氏完全佐剂：Sigma公司，产品目录编号为F5881。 弗氏不完全佐剂：Sigma公司，产品目录编号为F5506。包被缓冲液：将碳酸钠1. 59g，碳酸氢钠2. 93g和叠氮化钠0. 20g溶于水，用水定 容至1L;包被缓冲液的pH值为9. 6。 洗涤缓冲液：将氯化钠8. 0g，磷酸二氢钾0. 2g，磷酸氢二钠1. 15g，氯化钾0. 2g，吐 温-200. 5mL，叠氮化钠0. 2g溶于水中，用水定容至1L;洗涤缓冲液的pH值为7. 4。 样品抽提缓冲液：将亚硫酸钠1. 3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于PBST中，用PBST 缓冲液定容至1L。 酶标抗体稀释缓冲液：将聚乙烯基吡咯烷酮20g和牛血清白蛋白2g溶于洗涤缓冲 液中，用洗涤缓冲液定容至1L。 碱性磷酸酯酶底物溶液：将二乙醇胺97mL和对硝基苯磷酸二钠（现配现用）lg溶 于水中，调节pH值至9. 8，然后用水定容至1L。 辣根过氧化物酶反应的显色液：1 % A液+10 % B液（A液：1 %的3, 3'，5, 5'-四甲 基联苯胺（Sigma，T8768-5G)溶于二甲基亚砜，（Sigma，D2650) ;B液：柠檬酸缓冲液中加入 0? 1 %的H202)。 辣根过氧化物酶标记的二抗：山羊抗小鼠IgG/HRP(购自北京中杉金桥生物技术 有限公司，商品目录号为ZB2305)。实施例1、小鼠杂交瘤细胞株的获得及番茄细菌性叶斑病菌单克隆抗体的制备番前细菌性叶斑病菌（Pseudomonassyringaepv.tomato):引自ATCC，其ATCC编 号为BAA-871。Balb/c小鼠：6_8周龄雌性小鼠，购自中国军事医学科学院。 SP2/0骨髓瘤细胞：本实验室保存。 -、动物免疫 1、细菌培养将番前细菌性叶斑病菌（Pseudomonassyringaepv.tomato)ATCCBAA-871 的菌 株，划线于NA培养基（酵母膏1. 0g，牛肉浸膏3. 0g，蛋白胨5. 0g，葡萄糖10. 0g，琼脂15. 0g， 双蒸水1000mL，调节pH至7. 2,湿热灭菌121°C，15min)平板上，28°C培养2-3d，用生理盐水 洗涤平板菌落至2mL离心管中，生理盐水洗涤2次，调浓度至108CFU/mL，为菌悬液，用于小 鼠免疫试验。 2、小鼠免疫 第一次免疫：取等体积的弗氏完全佐剂与步骤1获得的番茄细菌性叶斑病菌的菌 悬液，乳化完全后皮当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
杂交瘤细胞株Pst 10号，其保藏号为CGMCC No.10119。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：魏梅生，田茜，李桂芬，赵文军，孔君，马洁，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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