本发明专利技术公开MicroRNA-199a-3p在制备胃癌诊断试剂盒中的应用。本发明专利技术的优点在于：（1）提供的血清生物标志物具有高特异性和高敏感性的特点；（2）利用本发明专利技术制作的商品化试剂盒灵敏、安全、可靠、易操作，定量测定人血浆中Mir-199a-3p表达水平，有助于辅助胃癌诊断与早期诊断，和胃癌患者肿瘤负荷的判断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物科学领域，更具体地说，涉及微小RNA-199a-3p在制备胃癌诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
胃癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤，根据世界卫生组织(WHO) 2008年的统计(世界卫生组织年度统计，2008)，在全世界范围，胃癌病人的死亡率高居第二。在2006年WHO的统计中显示有接近950，000个新发病例，同时有约700，000人死于这一种疾病。在我国，每年胃癌新发患者数超过30万，死于胃癌的人数约16万，病死率居恶性肿瘤之首，严重威胁人民生命健康(陈竺，全国第三次死因回顾抽样调查报告，2008)。为降低死亡率，提高胃癌的疗效，关键是胃癌的“三早”工作，即早期发现、早期诊断及早期治疗。然而，由于绝大多数胃癌患者缺乏特异性的临床症状，故早期胃癌诊断率很低，手术率不足10%(吴云林:外科理论与实践，2005，10:401);术后病人的生存期也较短。目前，我国胃癌总体5年生存率为43.4%，术后病理分期(pathological ??Μ,ρΤΝΜ) 1、I1、II1、IV期患者的术后5年生存率分别为75.65%,58.73%,28.01%和8.42% (刘炳亚:中华胃肠外科杂志，2010，13:163)。因此，提高胃癌的早期诊断率非常重要。而一般体检和影像学检查作用有限，待能够发现和明确诊断时，往往已到了中、晚期，缺少预警价值。因此，从长远角度看，应致力于发现敏感性和特异性均较好的肿瘤标志物。此外，胃癌异质性大，预后及对治疗的反应性差别较大，对于临床评估预后以及对治疗反应性的预测与评价，均需良好的肿瘤标志物。理想的肿瘤标志物应符合以下条件:(1)敏感性高；(2)特异性高；(3)肿瘤标志物浓度和肿瘤大小、转移、恶性程度有关，能协助肿瘤分期和判断预后；(4)半衰期短，有效治疗后浓度很快下降，能较快反映体内肿瘤的实际情况；(5)存在于体液，特别是血液中，易于检测(刘炳亚:中华胃肠外科杂志，2010，13:163)。肿瘤血清标志物的研究一直是本领域的研究重点。现已有多种胃癌肿瘤标识物:如癌胚抗原(CEA)，存在于胃癌及其它腺癌患者的血清中，但对早期胃癌的诊断意义较小，主要用于胃癌治疗前后的动态观察(Lipkin MiCancer Research, 1988,48:235 ；Lipkin:JBCSupplymental, 1992，16:1) ;CA125、CA 19-9, CA50、CA724 以及 CA242 等部分糖抗原在部分胃癌患者中可升高，但其敏感性仅20?40% (Kodera Y:The Americanjournal of gastroenterology, 1996,91:49 ；Chou M:Di sease Markers, 2000, 16:105；Lai IR etal:Hepato_gastroenterology，2002，49:115 ；Edip U et al:Advances inTheray, 2008, 25:1075);还有研究发现肿瘤相关糖蛋白抗原-72 (TAG-72)对胃癌的敏感性为69%，特异性为84% (刘军等:实用医学杂志，1999，15:4);糖蛋白抗原MG7-Ag在血清中有40% -60%的阳性检出率，在胃癌组织中有80% -94%的阳性检出率(Ren JiCancer,2000,88:280);核小体组蛋白类抗原(ΙΡ0 — 38)作为胃癌诊断的敏感性为57.4%，特异性超过90% (Hao Y etal: JProteome Res, 2008，7:3668)以上这些指标均有利于早期胃癌的诊断。某些肿瘤基因，如DDC、c-myc、c-erb-2、p53以及nm23等对胃癌的发生、转移也有一定意义，但广泛应用于临床仍受限制(刘倩等，人民卫生出版社，2004)。由于现有的胃癌生物标识物在灵敏度和特异性上的缺陷，虽然在疗效监测、提示复发、判断预后和高危人群的普查中具有一定的价值，但目前仍不能用于胃癌的确诊。为了实现对胃癌的早期高灵敏性，高特异性的诊断，急需在分子水平上寻找到更敏感、更特异的胃癌生物标志物。本专利技术前期采用miRNA芯片和定量RT-PCR的方法，分析了 180例胃癌病人和80例健康对照的血浆标本，给出了候选血清生物标志物，以期早期诊断和有效治疗胃癌。microRNA(miRNA，或miR)是一类进化上保守的非编码小分子RNA，长度约为20_24nt，由DNA转录生成，但并不翻译成蛋白质。成熟的miRNA与Argonaute蛋白组成RNA诱导的沉默复合体(RNA-1nduced silencing complex, RISC),能与祀基因的 mRNA 3’端非翻译区(3，UTR)序列发生特异性结合，通过诱导靶基因mRNA降解或抑制其翻译导致靶基因沉默。占人类基因组I %的miRNA基因通过抑制它的靶基因，调控着成千上万个编码基因的mRNA，使各种蛋白的表达处在一个合适的水平。miRNA的调控作用于生命体发生、生长、发育、分化和死亡的各个过程。近年来，miRNA-199家族与肿瘤的关系引起了许多学者的高度重视。Garzon等对急性髓细胞样白血病血液样本进行研究，发现miRNA-199a的高表达与不良预后相关(Garzon R, Volinia S，Liu CG, et al.MicroRNA signatures associatedwith cyto -genetics and prognosis in acute myeloid leukemia.Blood 2008;111(6): 3183-3189.)。但也有研究发现miRNA_199a在大鼠口腔癌模型组织和人肝癌组织中表达下调在胃癌的研究中(Yu T, Wang XY, Gong RG, et al.The express1nprofile of microRNAs in a model of 7, 12-dimethyl-benz anthrance—induced oralcarcinogenesis in Syrian hamster.J Exp Clin), Song 等发现 miRNA_199a 在胃癌细胞系和组织中显著上调，通过MAP3K11基因促进胃癌细胞的增殖和转移，并与预后相关。(Song G, Zeng HZ, Li J, et al.miR-199a Regulates the Tumor SuppressorMitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase 11 in Gastric Cancer.B1l PharmBull 2010; 33(11): 1822-1827)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供MicroRNA-199a_3p在制备胃癌诊断试剂盒中的应用。为实现以上目的，本专利技术公开以下技术方案:MiCix)RNA-199a-3p在制备胃癌诊断试剂盒中的应用。本专利技术的优点在于:(1)提供的血清生物标志物具有高特异性和高敏感性的特点；(2)利用本专利技术制作的商品化试剂盒灵敏、安全、可靠、易操作，定量测定人血浆中Mir-199a-3p表达水平，有助于辅助早期诊断胃癌。【附图说明本文档来自技高网...
【技术保护点】
MicroRNA‑199a‑3p在制备胃癌诊断试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李琛，刘炳亚，李建芳，燕敏，朱正纲，俞焙秦，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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