一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明专利技术的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明专利技术永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究。

【技术实现步骤摘要】
一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法
本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术涉及一种长白仔睾丸支持细胞永生系建立用培养液及使用培养液建立长白仔睾丸支持细胞永生系的方法和应用。
技术介绍
睾丸支持细胞(sertolicells，SCs)是位于睾丸组织生精小管内部一类具有强大分泌功能的细胞。它对生精细胞起到了支持和营养作用，有效的保证生精细胞的自我更新和精子发生的有序进行。睾丸SCs不仅是构成生精细胞的支架，而且可以将血液中的各类营养物质间接地传送给各级生精细胞。同时自身也能分泌转铁蛋白、胰岛素样生长因子、成纤维生长因子、胶质神经营养因子、干细胞分化因子、雄激素结合蛋白、硫酸糖蛋白1和2、转化生长因子α和β、白介素-1α和6等多种细胞因子，实现了生精细胞的自我更新和精子发生的有序进行。其中雄激素结合蛋白可以和雄激素相结合，在局部形成高浓度的雄激素环境时精子成熟的关键环节。SCs在睾丸组织内还构成了血睾屏障，也参与免疫调控。不仅有效的防止生精细胞自身抗原与机体接触而引发的免疫反应。同时自身高表达FASL蛋白，可与激活后的T淋巴细胞上的FAS结合，促使T淋巴细胞凋亡，因此产生了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液，其特征在于，所述培养液为：添加了12～18％FBS，50～60μMβ‑巯基乙醇，0.8～1.2％ITS，0.8～1.2％L‑谷氨酰胺，0.8～1.2％核苷酸，45～55μg/mL维生素C和0.8～1.2％双抗的DMEM培养基。

【技术特征摘要】
1.一种长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液，其特征在于，所述培养液为：添加了12～18％FBS，50～60μMβ-巯基乙醇，0.8～1.2％ITS，0.8～1.2％L-谷氨酰胺，0.8～1.2％核苷酸，45～55μg/mL维生素C和0.8～1.2％双抗的DMEM培养基。2.根据权利要求1所述的长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液，其特征在于，所述培养液为：添加了15％FBS，55μMβ-巯基乙醇，1％ITS，1％L-谷氨酰胺，1％核苷酸，50μg/mL维生素C和1％双抗的DMEM培养基。3.一种长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、取长白仔猪睾丸组织，机械法和酶消化法获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得...

【专利技术属性】
技术研发人员：张守全，白银山，冯美莹，卫恒习，李莉，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44