烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇的检测方法技术

本发明专利技术公开了烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇（α-CBD）的检测方法。将样品进行预处理后，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器，利用其同分异构体β-CBD为外标相对定量，在210nm波长下进行检测，所述将样品进行预处理的方法为：称取适量待测烟草样品的粉末，置于具密封盖的玻璃离心管中，加入适量二氯甲烷，盖紧后进行超声萃取，取上清液离心处理再经0.45µm有机膜过滤，所得滤液转移至色谱瓶以备进样分析。本发明专利技术样品的超声提取和离心处理均在同一个离心管中完成，并进一步优化了提取条件，简化了实验操作步骤，减少了提取溶剂的挥发，测定结果的稳定性和准确性得到了良好的改善。

【技术实现步骤摘要】
烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇的检测方法
本专利技术涉及烟草检测
，更具体地，涉及烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇的检测方法。
技术介绍
类西柏烷类化合物主要存在于烟叶的角质层中，是烟草中一类重要萜类化合物。在调制和醇化过程中，类西柏烷类化合物大部分降解，可形成多种醛、酮等多种重要香气成分，其主要降解产物茄酮及其衍生物是烟草中含量最丰富的中性香味物质之一，对于改善烟草香吃味有很重要作用。α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(α-CBD)和β-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(β-CBD)是烟草表面化合物中主要的类西柏烷二萜，也是烟草表面其它类西柏烷二萜形成的主要前体物。Roberts等(1962)首先从调制后的白肋烟烟叶中分离定性了α-CBD和β-CBD，但在烘烤后的烟叶中含量下降。chang等(1976)证明鲜烟叶中具有相对较高含量的西柏三烯二醇，占叶鲜重的0.7％，占叶面总脂类物质的50％。一般红花烟草的所有类型都含有西柏烷类萜醇，以α-CBD含量最高，与β-CBD的比例接近3：1。α-CBD和β-CBD为差向异构体，α-CBD的绝对构型为(1S,2E,4S,6R,7E,11E)-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇，β-CBD的绝对构型为(1S,2E,4R,6R,7E,11E)-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇，结构如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示。目前西柏烷二萜醇的主要分析方法有气相色谱法和液相色谱法。行业标准方法采用气相色谱-质谱联用法测定烟草及烟草制品中的西柏烷二萜醇，该方法需要将西柏烷二萜醇衍生化为可气化的成分，衍生化过程较复杂，且未反应的衍生化试剂很可能使得质谱离子源被硅烷基覆盖，导致质谱信号发生改变，对结果的准确性具有一定影响。刘清梁等在《烟叶中重要化合物测定方法的研究》中公开采用液相色谱法、以20R人身皂苷Rh2为内标对烟叶中的西柏烷二萜醇进行相对定量，但是，该方法检测结果的稳定性和准确性还有待进一步提高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对液相色谱法、以20R人身皂苷Rh2为内标对烟叶中的西柏烷二萜醇进行相对定量检测的技术不足，提供一种烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(α-CBD)的检测方法，以α-CBD的差向异构体β-CBD为外标相对定量，并对样品的前处理方法进行了创造性的改进，实现了简化操作步骤、减少提取溶剂挥发的问题，并保证了较好的检测稳定性和准确性。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：提供一种烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(α-CBD)的检测方法，将样品进行预处理后，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器，在210nm波长下进行检测，以β-CBD为外标相对定量，所述将样品进行预处理的方法为：准确称取适量待测烟草样品的粉末(精确至0.0001g)，置于具密封盖的玻璃离心管中，加入适量二氯甲烷，盖紧后进行超声萃取，取上清液离心处理再经0.45μm有机膜过滤，所得滤液转移至色谱瓶以备进样分析。优选地，所述离心管的容积为10mL。进一步地，所述准确称取适量待测烟草样品的粉末的重量为0.5g。进一步优选地，所述待测烟草样品的粉末过过40目筛。进一步地，所述二氯甲烷的加入量为5mL。优选地，所述超声萃取的时间为10min，超声功率为320W。优选地，所述离心处理的条件为于4000r/min离心15min。进一步地，所述高效液相色谱-紫外检测器的条件为：WatersACQUITY超高效液相色谱仪，PDA检测器，WatersSymmetry4.6mm×250mm5μm色谱柱，检测波长为210nm，柱温为室温，进样量为10μL，流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度洗脱条件如下：优选地，所述所得滤液转移至色谱瓶以备进样分析，优选在6小时内完成色谱进样分析。本专利技术的有益效果是：本专利技术打破现有技术以及作为本领域长期使用的标准方法的禁锢，从提取容器着手，简单易行地解决了高效液相色谱方法-紫外检测器内标法检测西柏烷二萜醇中结果不稳定、准确性不高的技术难题。进一步地，本专利技术优化了样品预处理中的提取工艺，在科学确定提取容器的基础上，对提取溶剂、提取时间等细节进行了进一步改进，保证了检测结果的稳定性和准确性。本专利技术超声提取和离心均在一个容器内完成，简化了实验操作步骤，减少了提取溶剂的挥发，测定结果的稳定性和准确性得到了进一步地良好的改善。附图说明图1烟草样品中α-CBD色谱图及标准样品色谱图。图2样品溶液稳定性(图中，*表示含量变化大于5％，**表示含量变化大于10％)。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术。以下实施例仅为示意性实施例，并不构成对本专利技术的不当限定，本专利技术可以由
技术实现思路
限定和覆盖的多种不同方式实施。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、化合物和设备为本
常规试剂、化合物和设备。实施例11.仪器WatersACQUITY超高效液相色谱仪、PDA检测器(美国Waters)；WatersSymmetry4.6mm×250mm5μm色谱柱；检测波长：210nm；柱温：室温；进样量：10μL；流动相：A：水B：乙腈；梯度洗脱条件如表1所示：表1梯度洗脱条件2.试剂二氯甲烷(分析纯，市购)；α-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇(纯度98.9％，购于美国LKTLaboratories公司，但并不因此限定本专利技术范围)、β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇(纯度>99.5％，购于美国LKTLaboratories公司，但并不因此限定本专利技术范围)。3.溶液配制α-CBD和β-CBD标准品均为10mg/支装，由于α-CBD不太稳定，且在室温下呈熔融蜡状，无法准确称量，因此α-CBD溶液为粗略配制，用于定性。由于α-CBD和β-CBD是同分异构体，性质接近，本专利技术利用外标法以β-CBD的量半定量测定α-CBD的量。β-CBD标准溶液的配制：准确称量约10mgβ-CBD，置于10mL棕色容量瓶中，加入二氯甲烷溶解并稀释至刻度，该溶液为储备液。分别准确移取50μL、100μL、200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL的储备液至10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶液稀释至刻度，此7个标准溶液为系列标准溶液。标准样品与烟草样品色谱图见附图1所示。4.样品处理本专利技术通过分析总结：由于二氯甲烷等溶剂的沸点低、挥发性强，锥形瓶和容量瓶在超声时，瓶与瓶塞间的空隙较大，给溶剂挥发提供了有利条件，给检测结果带来了较大的误差和不稳定性。再结合大量实验对比，本专利技术创造性地采用离心管(具密封盖)作为提取用容器，并在此提供部分对比试验结果如下：样品处理方法一：参照标准《烟草及烟草制品西柏烷二萜醇的测定气相色谱-质谱联用法》(YC/T470-2013)的方法进行样品处理，采用的提取容器为锥形瓶。样品处理方法二：参照现有文献《烟叶中重要化合物测定方法的研究》中刘清梁的方法进行样品处理，采用的提取容器为容量瓶。样品处理方法三(本专利技术方法)：准确称取0.5g烟末(精确至0.0001g)，置于10mL玻璃离心管中，加入5mL二氯甲烷，拧紧离心管盖，超声萃取10min，取上清夜于4000r/min离心15min，然后用0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟草中α‑2, 7, 11‑西柏烷三烯‑4, 6‑二醇的检测方法，其特征在于，将样品进行预处理后，采用高效液相色谱‑二极管阵列检测器，利用其同分异构体β‑CBD为外标相对定量，在210nm波长下进行检测，所述将样品进行预处理的方法为：称取适量待测烟草样品的粉末，置于具密封盖的玻璃离心管中，加入适量二氯甲烷，盖紧后进行超声萃取，取上清液离心处理再经0.45µm有机膜过滤，所得滤液转移至色谱瓶以备进样分析。

【技术特征摘要】
1.一种烟草中α-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇的检测方法，其特征在于，将样品进行预处理后，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器，利用其同分异构体β-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇为外标相对定量，在210nm波长下进行检测，所述将样品进行预处理的方法为：称取适量待测烟草样品的粉末，置于具密封盖的玻璃离心管中，加入适量二氯甲烷，盖紧后进行超声萃取，所述超声萃取的时间为10min，超声功率为320W；取上清液离心处理再经0.45μm有机膜过滤，所得滤液转移至色谱瓶在6小时内完成色谱进样分析；所述高效液相色谱-二极管阵列检测器的条件为：WatersACQUITY超高效液相色谱仪，PDA检测器，WatersSymmetry4.6mm×250mm5μm...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖燕华，吴君章，陈森林，
申请(专利权)人：广东中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广东;44