一种以鳞茎片为外植体构建大蒜微繁的方法技术

本发明专利技术公开了一种以鳞茎片为外植体构建大蒜微繁的方法。它是以大蒜鳞茎片为外植体，以MS+1.5mg/L2,4-D+0.5mg/LKT为愈伤组织诱导和继代培养基、以MS+5mg/L6-BA+1.0mg/LNAA为诱导不定芽分化培养基、增加以MS+1.0mg/LKT+1.0mg/LGA+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA为壮芽培养基的壮芽培养过程、以基础MS培养基为生根培养基的试管苗培养体系；试管苗经过室内和田间拱棚中两次练苗，冬前移栽到土壤中，翌年在第一代收获分瓣率高达94%再生地下鳞茎。该技术体系为优良品种大蒜种质扩繁提供了重要的保障。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种以鳞茎片为外植体构建大蒜微繁的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）外植体的获得：选取生长健壮、无病虫害、自然结束休眠后的大蒜蒜头，剥去外面鳞叶，用自来水冲洗20min，用 0.1%(w/w)升汞浸泡10min，无菌水冲洗3次，再在75%(w/w)酒精中浸泡5min，杀灭表面细菌，无菌水冲洗3次，再用滤纸吸干备用；（2）大蒜愈伤组织诱导：在超净台上将大蒜鳞茎切2mm厚薄片，接种到愈伤组织诱导培养基中，置人工气候箱中培养：日温 25℃，夜温 20℃，光照强度为1500 Lux，光照时间 14 h/d，6‑14天后在外植体上形成微小的愈伤组织颗粒，接种25‑30天后外植体上已经形成大量的愈伤组织颗粒；（3）愈伤组织继代及不定芽分化：将生长旺盛的愈伤组织切下，接种到新鲜的继代培养基中进行继代培养，25天之后愈伤组织增殖明显，在同样培养基上再继代一次，挑选生长状况良好的愈伤组织颗粒转移到不定芽分化的培养基上进行分化培养，经过10‑12天的分化培养，逐渐分化出生长健壮、颜色浓绿的不定芽；其中所述的愈伤组织诱导培养基、继代培养基指的是：MS+1.5mg/L 2,4‑D+0.5 mg/L KT；所述的不定芽分化的培养基指的是：MS+5mg/L 6‑BA+1.0mg/L NAA；（4）壮芽培养：将分化培养基中诱导出来的愈伤组织和嫩芽一起转移到壮芽培养基中进行25‑30d壮芽培养；所述的壮芽培养基指的是：MS+1.0 mg/L KT+1.0mg/L GA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L 6‑BA；（5）生根培养：将健壮、浓绿的不定芽转移到生根培养基中诱导生根，4周后不定芽长出数条实生根，形成完整的试管苗；所述的生根培养指的是不加激素的MS基础培养基；（6）试管苗经过室内和田间拱棚中两次练苗，冬前移栽到土壤中，翌年在第一代收获再生地下鳞茎把愈伤组织诱导的苗种植到大田土壤中，地上部分长苗，地下部分膨大形成蒜头—即地下鳞茎，由于愈伤组织苗为再生苗，所以由再生苗长成的蒜头即为地下再生鳞茎。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王振英，任春雪，王珍，范宝莉，刘晓颖，彭永康，陈宏，
申请(专利权)人：天津师范大学，
类型：发明
国别省市：天津;12