多粘类芽孢杆菌dgnkzx004在口红花栽培方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）菌株dgnkzx004在口红花栽培方面的应用。所述菌株已于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCC M2014504。该菌株不仅对口红花叶斑病病原多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）具有显著、稳定的抑菌效果，还能够促进口红花的生长，因此，在口红花叶斑病防治及促生长方面具有非常重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
多粘类芽孢杆菌dgnkzx004在口红花栽培方面的应用
本专利技术属于生物
更具体地，涉及多粘类芽孢杆菌dgnkzx004在口红花栽培方面的应用。
技术介绍
花卉在生长过程中，可能遭遇到各种自然灾害，造成植物生长发育不良，甚至植物色泽暗淡，叶枯、花腐、器官畸形、茎干枯，从而降低了花卉产量和质量，造成严重的经济损失。引起花卉病害的主要原因有环境原因和病虫害原因。环境原因主要引起生理病害，是由于气候和土壤等条件不适宜引起的，常发生的生理病害有夏季强光照射引起的灼伤，冬季低温造成的冻害，水分过多导致烂根，水分不足引起叶片焦边、萎蔫，土壤中缺乏某些营养元素，出现缺素症等等。病虫害则是由病菌及病虫引起的。这些生物大多具有寄生力和致病力，并具有较强的繁殖力，能从感病植株通过各种途径蔓延到健康植株上去，在适宜的环境条件下生长、发育、繁殖、传播，周而复始，逐步扩大蔓延，因此，这类病害对花卉造成的危害最大。其中，真菌是没有叶绿素具有真核的低等生物，它以菌丝体为营养体，以孢子进行繁殖，是花卉病害中最主要的一类。花卉病虫害防治，必须遵循“预防为主，综合防治”的基本原则。预防为主，就是根据病虫害发生规律，针对薄弱环节和防治的关键时期，采取有效，可行的方法，在病虫害大量发生或造成危害之前，予以控制，使其不能发生或蔓延，保护花卉免受损失或少受损失。综合防治，就是从生产和生态的全局观出发，充分利用自然界抑制病虫害的各种因素，创造不利于病虫害发生的条件，采取各种必要的防治措施，以栽培技术防治为基础，根据病虫害发生发展的规律，因地制宜，合理应用生物、物理、化学等防治措施，有效地控制病虫害发生，将其造成的损失减少到最低水平。温室花卉病虫害生物防治，多是利用捕食性天敌、寄生性天敌、微生物农药、各种抗生素以及害虫性外激素等进行防治；物理防治则多使用覆盖薄膜、纱网阻隔、色板（膜、纸）诱杀等方法；化学防治使用化学药剂来抑制或杀死病虫或病菌。其中以生物防治的安全性和持久性最好，是一种绿色、安全、环保、有效的防治手段。生物防治是指利用自然界各种无害的生物或其代谢产物进行病虫害防治。生物防治通过生物间的相互作用来控制病虫害,其效果可能不能像化学农药那么快速、有效，但它们的防效是持久的、稳定的，且是环境友好的。目前生物防治的基本途径主要有：天敌昆虫的保护利用、昆虫性信息素与不育性的利用、生物农药的应用、拮抗微生物和害虫致病微生物的利用、转基因技术抗虫抗病等。其中，利用微生物对病害进行防治是一种很好的方式。微生物种类丰富、代谢途径多样，并能产生对自然界病害菌有拮抗作用的活性物质。多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）是土壤中常见的细菌，也是一类重要的病害生物防治微生物，有一些还具有刺激植物生长的特点。大量研究表明，有些多粘类芽孢杆菌除了可以直接抑制植物病原菌，还能通过产生抗菌物质如抗菌蛋白质或酶、诱导寄主的抗病能力等。对于多粘类芽孢杆菌诱导寄主的抗病能力机制的研究越来越受到重视，2004年童蕴慧等公开了利用多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）W3菌株处理番茄叶片，对灰霉病有明显的诱导抗病作用。而目前尚未见有多粘类芽孢杆菌抑制花卉病菌及应用于花卉栽培的报道和研究。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有口红花栽培技术的缺陷和不足，提供多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）菌株dgnkzx004在口红花栽培方面的应用。该菌株不仅对多主棒孢菌具有显著的抑制作用，还能够促进口红花的生长，可以很好地应用于口红花的栽培。本专利技术的另一目的是提供一种用于口红花生物防治和/或促生长的复合菌剂。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术提供了多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）菌株dgnkzx004在抑制多主棒孢菌（Corynesporacassiicola）方面的应用。本专利技术还提供了多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）菌株dgnkzx004在口红花栽培方面的应用，所述应用是应用于防治口红花叶斑病和/或促进口红花生长方面，尤其是应用于毛萼口红花的生物防治及促生长方面。上述多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）菌株dgnkzx004于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCCM2014504，也已在申请号为201410630169.5的专利中公开。本专利技术提供了一种用于口红花生物防治和/或促生长的复合菌剂，是以多粘类芽孢杆菌菌株dgnkzx004的菌体为有效活性成分，配合甲壳素制备得到。溶剂可以为水或者多粘类芽孢杆菌菌株dgnkzx004的液体培养基等。从更适宜保存的角度考虑，使用dgnkzx004的液体培养基更有利于菌株的生存和繁殖。所述复合菌剂中多粘类芽孢杆菌dgnkzx004的终浓度为108～109CFU/mL，甲壳素的体积百分浓度为0.5～2%。优选地，所述复合菌剂中多粘类芽孢杆菌dgnkzx004的终浓度为7～8×108CFU/mL，甲壳素的体积百分浓度为1%。本专利技术通过长期大量的实验研究发现，多粘类芽孢杆菌dgnkzx00及其复合菌剂不仅对引起口红花叶斑病的多主棒孢菌具有明显、稳定的抑菌效果，还能够促进口红花的生长。因此，在口红花的生物防治及促生长方面具有重要的应用价值，能获得很好的效果，其中对毛萼口红花的效果最为突出。本专利技术上述的多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）菌株dgnkzx004是本专利技术人从东莞农业科学研究中心果园土壤中采集分离所得，已于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCCM2014504。具体地，本专利技术人在荔枝果园，选用对角线法和棋盘法采样。确定取土地点后，除去上面的枯枝落叶层以及地表5cm左右的浮土；之后用铲斜向下（离地表5～15cm深度的土壤）切取一片片的土壤样品。每个取样点取5～15个样，将取好的土样在灭菌牛皮纸上混合，四分法获取所需土壤的量。编号，记录采集信息：每一采样地的采集地点、采集日期、采集深度等。将各采样点混合土样各称取10g，放入盛有100mL无菌水（制备1：10土壤悬液）并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min，使土样与水充分混合并分散，此为原稀释液；再用1mL无菌吸管吸取1mL稀释后的土壤溶液注入盛有9mL无菌水的试管中，用吸耳球多次吹吸充分混匀，此为10-1稀释悬液；依次类推将土样梯度稀释成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6的土壤稀释悬液，重复3次。多次吹吸混匀所制备好的稀释液，取10-2、10-4、10-6三个梯度的稀释液，用无菌移液管吸取（吸取前再次吹吸，确保稀释液均匀）0.2mL加到已凝固的LB平板上，然后用涂布棒迅速将菌液均匀涂开。待菌落长出，挑取菌落形态差异明显的单菌落进入平板划线分离，划线分离3次进行纯化并进行革兰氏染色镜检。上述LB平板就是由改良LB液体培养基加入琼脂制备而成；所述改良LB液体培养基的成分：蛋白胨15g，葡萄糖20g，酵母提取物5g，NaCl10g，水1000mL，pH6.8，121℃灭菌20min。所述菌株dgnk本文档来自技高网...

【技术保护点】
多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）dgnkzx004在抑制多主棒孢菌方面的应用，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌dgnkzx004于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCC M 2014504。

【技术特征摘要】
1.多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）dgnkzx004在抑制多主棒孢菌方面的应用，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌dgnkzx004于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCCM2014504。2.多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）dgnkzx004在防治口红花叶斑病方面的应用，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌dgnkzx004于2014年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号是CCTCCM2014504。3.一种用于防治口红花叶斑病的复合菌剂，其特征在于，所述菌剂包括多粘...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐匆，郑芝波，
申请(专利权)人：东莞市农业科学研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44