本实用新型专利技术公开了一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存的冷冻试管，包括管体，管体顶部设有螺纹盖，管体底部设有钢块，管体长25cm，内径1.5cm，管壁厚度为0.05cm，管壁上遍布直径为0.2cm的小孔。本实用新型专利技术的冷冻试管，管壁上遍布小孔，能使精子快速冷冻，缩短了操作时间，尽可能地减少了操作对精子DNA完整性的影响。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存与复融方法，以及用于冻存的试管，涉及细胞生物学和医疗器械
技术介绍
精子DNA完整性检测，已越来越多的应用于临床检测，但毕竟属于临床应用较少的检测，如对新鲜精液的检测，难以实现批量检测。为实现批量检测精子DNA完整性，需将精子冻存，待收集到一定数量的标本后进行复融，然后批量检测。辅助生殖技术中的精子冻存和复苏，需在精液取出30分钟液化后再添加保护剂，保证有尽可能多的活动精子以利于受精。但是，操作时间过长，会导致部分精子的DNA损伤，而冷冻保护剂里保护精子膜不受损的甘油等成分也会对精子的DNA造成一定程度的损伤。大量研宄文献证明精子冻存技术会导致一定程度的精子DNA损伤，特别是对畸形精子DNA的损伤，这样冻存后再检测就不能真实反映冻存前精子DNA完整性情况。
技术实现思路
针对上述现有技术，本技术提供了一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存与复融方法，以及用于冻存的试管。本技术是通过以下技术方案实现的:一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存与复融方法，包括以下步骤:(I)将刚取出的患者精液立即轻轻吹打，取一麦管，先吸入5mm的精子DNA保护缓冲液，再吸入2mm的空气，然后吸入精液，约0.5ml，然后再吸入2mm的空气，再吸入5mm的精子DNA保护缓冲液，用加热法将麦管的液体进入端密封，然后将连接吸管端用木签(比如尖头木签)密封，然后装入冷冻试管内，旋紧冷冻试管螺纹盖，装入纱袋中，立即投入液氮罐中进行冷冻；所述冷冻试管的结构为:包括管体，管体顶部设有螺纹盖，管体底部设有钢块(目的是增加重量，使试管容易沉入液氮中)，管体的管壁上设有多个小孔(目的是:冷冻时，液氮可快速通过小孔进入试管内，对麦管内的精液进行快速冷冻)。优选的，所述冷冻试管的管体长25cm，内径1.5cm，管壁厚度为0.05cm，管壁上遍布直径为0.2cm的小孔。优选的，所述管体的材质为聚丙烯材料。 所述麦管为商品化麦氏冻存管。(2)进行精子DNA完整性检测前，将冷冻试管从液氮中取出，立即放入37°C水浴中，30秒后取出，打开试管封盖，取出所有冷冻麦管，用纸巾轻轻擦拭麦管，剪掉采用加热法密封的密封端，并将此端对准0.5离心管，拔掉另一端的木签，将精液从木签端采用吸管吹入离心管；将一个患者所有冻存复融精液混匀后，按体积比1:1的比例加入精子DNA保护缓冲液，混匀，洗涤精子，然后进行常规的精子DNA完整性检测。所述精子DNA保护缓冲液是通过以下方法制备得到的:取8.5克氯化钠、2.2克磷酸氢二钠以及0.2克磷酸二氢钠，溶解于蒸馏水中，定容至1000毫升，调pH值(氢氧化钠溶液或盐酸调整)为7.4，即为pH7.4的磷酸缓冲液；取300 μ I吐温-20以及0.1克维生素C，加入100毫升磷酸缓冲液中，混匀，即为精子DNA保护缓冲液。所述洗涤精子的方法如下:冻存复融精液和精子DNA保护缓冲液混匀后，置于10毫升离心管中，以2500转/分转速离心5分钟，弃上清，再加2毫升精子DNA保护缓冲液，混匀，制成精子悬液，待测。常规方法中，添加冷冻保护剂的主要目的是保护精子膜，以免影响精子的活动力。若不添加保护剂直接冻存精子，会损伤精子膜，精子不再运动，但精子核DNA并不会受损，不会影响精子DNA完整性检测。本技术的方法在精液取出后不经过液化过程，不添加精子冷冻保护剂，立即装入精子冻存麦管，缩短了操作时间，尽可能地减少了操作对精子DNA完整性的影响。复融过程中，通过迅速加入具有抗氧化剂成分的缓冲液并洗涤精子，尽快进行精子DNA完整性检测，就可以真实反映冷冻前精子DNA完整性的水平，从而实现精子DNA完整性检测的批量操作，进而实现规范化操作。本技术的方法，不需要添加精子冻存保护剂，不需要等精液液化而直接冻存，步骤简单，省时。冻存时采用0.5ml精子冷冻麦管，外套本技术特制的四周具有小孔的冷冻试管，能使精子快速冷冻。复融时添加具有抗氧化作用精子DNA保护缓冲液并洗涤精液，以减少操作过程中产生的精子DNA损伤，使精子DNA完整性检测真实反映冷冻前水平。【附图说明】图1:麦管吸入缓冲液和精液并封口的结构示意简图。图2:冷冻试管的结构示意图。其中，1、麦管；2、木签；3、缓冲液段；4、空气段；5、精液段；6、管体；7、螺纹盖；8、钢块；9、小孔。【具体实施方式】下面结合实施例对本技术作进一步的说明。实施例1用于精子DNA完整性检测的精子冻存与复融方法，包括以下步骤:(I)将刚取出的患者精液立即轻轻吹打，取一麦管，先吸入5mm的精子DNA保护缓冲液，再吸入2mm的一段空气，然后吸入精液，约0.5ml，然后再吸入2mm的空气，再吸入5mm的精子DNA保护缓冲液(所述5mm、2mm是指吸入麦管后空气或缓冲液所占据的长度)，用加热法将麦管的液体进入端密封，然后将连接吸管端用木签密封(如图1所示，麦管I的一端用木签2密封，从木签密封端开始，依次是5mm长的缓冲液段3、2mm长的空气段4、精液段5,2mm长的空气段4、5_长的缓冲液段3、加热法密封端)，然后装入冷冻试管内，旋紧冷冻试管螺纹盖，装入纱袋中，立即投入液氮罐中进行冷冻；所述冷冻试管的结构为:包括管体6，管体6顶部设有螺纹盖7，管体6底部设有钢块8 (目的是增加重量，使试管容易沉入液氮中)，如图2所示，管体6长25cm，内径1.5cm，管壁厚度为0.05cm,管壁上遍布直径为0.2cm的小孔9。所述管体6的材质可以为聚丙烯材料。(2)进行精子DNA完整性检测前，将冷冻试管从液氮中取出，立即放入37°C水浴中，30秒后取出，打开试管封盖，取出所有冷冻麦管，用纸巾轻轻擦拭麦管，剪掉采用加热法密封的密封端，并将此端对准0.5离心管，拔掉另一端的木签，将精液从木签端采用吸管吹入离心管；将一个患者所有冻存复融精液混匀后，按体积比1:1的比例加入精子DNA保护缓冲液，混匀，洗涤精子，然后进行常规的精子DNA完整性检测。所述精子DNA保护缓冲液是通过以下方法制备得到的:取8.5克氯化钠、2.2克磷酸氢二钠以及0.2克磷酸二氢钠，溶解于蒸馏水中，定容至1000毫升，调pH值(氢氧化钠溶液或盐酸调整)为7.4，即为pH7.4的磷酸缓冲液；取300 μ I吐温-20以及0.1克维生素C，加入100毫升磷酸缓冲液中，混匀，即为精子DNA保护缓冲液。所述洗涤精子的方法如下:冻存复融精液和精子DNA保护缓冲液混匀后，置于10毫升离心管中，以2500转/分转速离心5分钟，弃上清，再加2毫升精子DNA保护缓冲液，混匀，制成精子悬液，待测。【主权项】1.一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存的冷冻试管，其特征在于:包括管体，管体顶部设有螺纹盖，管体底部设有钢块，管体的管壁上设有多个小孔。2.根据权利要求1所述的冷冻试管，其特征在于:所述管体长25cm，内径1.5cm，管壁厚度为0.05cm，管壁上遍布直径为0.2cm的小孔。3.根据权利要求1所述的冷冻试管，其特征在于:所述管体的材质为聚丙烯材料。【专利摘要】本技术公开了一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存的冷冻试管，包括管体，管体顶部设有螺纹盖，管体底部设有钢块，管体长25cm，内径1.5cm本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于精子DNA完整性检测的精子冻存的冷冻试管，其特征在于：包括管体，管体顶部设有螺纹盖，管体底部设有钢块，管体的管壁上设有多个小孔。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽红，王秋菊，盖凌，刘蓓，许观照，张伟，孙林，李希合，王琳琳，蒋宝宏，王洪岩，
申请(专利权)人：张丽红，
类型：新型
国别省市：山东;37
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