一种用于检测单增李斯特菌的电化学免疫传感方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测单增李斯特菌的方法，属于生物技术检测领域。本发明专利技术首先利用电化学活化金电极的表面，再浸入1％3-巯基丙酸的乙醇溶液中自组装形成单分子膜，经活化后，将捕获抗体结合到电极表面，采用夹心法引入酶放大信号，通过酶催化电活性物质的氧化还原得到电流响应信号，建立了一种以三电极为体系的电化学免疫传感器检测单增李斯特菌的方法，该方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性。由于检测体系小，节省试剂，显著降低了检测成本，且由于不受样品浊度的影响，在应用与实际样品的检测中具有很大的潜力。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种在电化学传感器工作电极表面制备免疫传感器的方法，其特征由以下步骤组成： (1)将金电极在2000目、3000目、5000目砂纸上打磨，超纯水洗，然后依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm Al2O3粉末在麂皮上抛光，超纯水洗； (2)将洁净的金电极在0.1M H2SO4溶液中进行循环伏安扫描(电压范围‑0.2V～1.2V，扫描速率50mV／s)清洗，直至得到稳定的循环伏安图；然后在0.05M H2SO4溶液中进行活化(电压范围‑0.2V～1.6V，扫描速率50mV／s)，直至在0.94V左右得到一平滑的还原峰，超纯水洗，氮气吹干； (3)将处理好的金电极置于2mL 1％3‑巯基丙酸的乙醇溶液中自组装，室温过夜，乙醇洗，超纯水洗，氮气吹干； (4)将组装好的电极置于0.4M EDC‑0.1M NHS的水溶液中室温活化30min，超纯水洗，氮气吹干； (5)在活化好的电极表面滴加10μL单增李斯特菌单抗溶液，37℃孵育1h，PBS洗，氮气吹干； (6)将结合了单抗的电极置于1mL1％OVA的PBS溶液，37℃封闭40min，PBS洗，氮气吹干；储于4℃备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高志贤，彭媛，程超男，宁保安，白家磊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12