在原核细胞周质中产生多肽的方法技术

本发明专利技术报道了用于产生多肽的方法，所述方法包括约25℃下，在溶液中孵育(重悬)原核细胞约15分钟至约6小时的步骤，所述溶液包含约10mM至约95mM的Tris-HCl和约2mM至约6mM的EDTA，所述溶液的pH值约7至约10。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在原核细胞周质中产生多肽的方法本文报道了在原核细胞中产生多肽的方法，其中使用存在螯合剂的缓冲系统中的孵育步骤，在确定pH值和温度值下，从原核细胞周质中回收重组产生的多肽。
技术介绍
具有合适的信号序列时，重组产生的多肽可以被分泌到大肠杆菌细胞的周质间隙中(Joly,J.C.和Laird,M.W.,Periplasm编著，Ehrmann,M.,ASM印制,WashingtonD.C.,(2007)345-360)。在化学氧化环境中二硫键形成，由此有利于多肽在功能上的正确折叠。这些多肽从周质间隙中的选择性分离是所希望的，以避免来自大肠杆菌的宿主细胞蛋白(HCP)的污染。由此，有利于随后的多肽纯化。示例性分离方法是如Ren,G.等,J.ofBacteriology189(2007)2777-2786所描述的渗压冲击。使用该方法，溶解于TRIS缓冲液(pH为7.2)中的EDTA使原核细胞外膜去稳定，这使得蔗糖渗透到周质间隙。蔗糖是不能透过内膜的。之后通过离心除去TRIS-EDTA缓冲液中，将细胞迅速重悬于冰冷的蒸馏水中。由此水浸入充满蔗糖的周质间隙，通过周质体积的增加使不稳定的外膜崩解。添加氯化镁本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于产生多肽的方法，所述方法包括‑在约25℃下，在溶液中孵育(重悬)原核细胞约15分钟至约6小时，所述溶液包含约10mM至约95mM Tris‑HCl和约2mM至约6mM EDTA，所述溶液的pH值约7至约10，其中所述溶液基本上不含肽聚糖水解酶和糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.09.17 EP 12184738.81.用于产生多肽的方法，所述方法包括-在20-33℃下，在溶液中孵育原核细胞15分钟至6小时，所述溶液包含10mM至95mMTris和2mM至6mMEDTA，所述溶液的pH值7至10，其中所述溶液基本上不含肽聚糖水解酶和糖；-分离所述多肽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述pH值为8。3.根据权利要求1的方法，其特征在于所述孵育时间为30分钟。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·尚茨，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH