【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种转基因胰岛素的合成工艺,其特征在于,其工艺步骤如下:(1)提取目的基因:向牛肉膏蛋白胨培养基中加入适量血清,接种培养人体胰岛B细胞,控制培养温度为35℃,PH为7.0,用限制性内切酶获取胰岛B细胞内的产胰岛素的核苷酸序列,提取目的基因,备用;(2)培养工程菌:选用大肠杆菌作为工程菌,用肉汁培养基培养,接种与摇瓶培养基中,于35℃下振摇培养24h,调pH至5.0,而后放入恒温箱中培养,培养温度为35℃;(3)提取质粒:35℃培养平板中挑取一个直径2~3mm的单菌落,接种到10ml LB培养液35℃剧烈振摇培养16h,取4ml菌液到5ml离心管,8000rpm室温离心3min,去上清,放于面巾纸上吸干痕液,加350ul RNaseA的溶液,将5ml离心管置于拇指和食指间柔和地反复颠倒数次,将上清倒入柱状收集管中,将柱状管放到一个消过毒的1.5ml离心管中,加65ul灭菌水,室温放置2min,8000rpm室温离心3min洗提质粒;(4)基因重组:运用同种限制性内切酶切割步骤(3)提取的质粒的基因序列,再经过DNA聚合酶将步骤(1)提取的目的基因导入质粒基因中;(5)感受态细胞的制备:将 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:崔强军,张政,刘新亮,余炼,
申请(专利权)人:广西大学,
类型:发明
国别省市:广西;45
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