一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物、方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物、方法和试剂盒。所述的专用引物的序列如SEQ ID NO.1所示。所述方法包括以下步骤：1)、提取生鲜肉和/或肉制品的基因组DNA；2)、以步骤1)所述的基因组DNA为模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物，进行PCR反应。所述的方法还可以包括以下的步骤：3)、构建步骤2)所述的PCR反应的扩增片段的电泳图谱；或4)、根据步骤3)所述的电泳图谱，鉴定梅山猪的生鲜肉和/或肉制品。利用所述专用引物及方法有效解决了梅山猪品种的鉴定问题，可以将其与其他品种猪肉或牛羊肉相区分。该鉴定方法操作简单、结果准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物、方法和试剂盒。
技术介绍
梅山猪原产于太湖流域的上海市嘉定、宝山、松江等区县和江苏的昆山、太仓等市县，是太湖猪中的典型代表，有肉质好、耐粗饲、抗病力强等优良特性。嘉定区的梅山猪品种其肌肉鲜嫩、肌纤维细而密，含水量较少，肌肉脂肪丰富，呈大理石状，俗称“五花肉”，风味醇厚，细腻酥软。随着人们生活水平的提高，对畜禽产品的质量要求越来越高，许多以追求高产为目的培育的外三元等品种在国内越来越不受欢迎，取而代之的是猪肉市场消费追求多样化、精细化、肉质高品质化。梅山猪因肉质鲜美、香甜浓香而受到上海市民青睐，尽管价格比较高却供不应求，导致市场上极易出现假冒梅山猪肉及其品牌或以次充好、以假乱真的销售行为。但目前尚没有鉴定梅山猪肉及其肉制品的方法可以有效地保护正宗梅山猪肉及其肉制品的质量品质和品牌形象。目前，制定了以活体猪为检测对象的鉴别梅山猪的地方性标准方法，但是对梅山猪宰杀后分割肉及其他肉制品就不能使用地方标准方法进行鉴定了。而传统的鉴别方法则通过测定猪胴体和肉质特征来评价生鲜肉及其肉制品品质，包括瘦肉率、嫩度、pH值、肉色等区别肉品质好坏。但由于饲养条件和猪个体存在差异，且对测试猪生长日龄和取样部位有具体要求，使得检测人员的工作十分不便并且使检测结果容易发生较大的误差，导致检测结果缺乏重复性和准确性。此外，由于肉质指标大多没有统一的数值范围，个体差异也比较明显，因此肉质指标也不能作为鉴定梅山猪的依据。目前，猪全基因组测序技术虽然可以鉴别不同品种、甚至不同个体的猪，但需要检测的基因数目很多，成本大，不可能在实际日常商业活动中推广。而若只检测不同品种猪个别基因，则不能区分转基因猪肉制品和纯种猪肉制品。DNA分子标记是基于基因组DNA序列丰富的多态性发展而来的一种遗传标记，可直接反映DNA水平上的差异，具有其它遗传标记所不具有的优点，如变异稳定丰富、信息量大、受环境因素影响小、不受取材部位、发育时期限制、可随时检测、操作方便等，故可以用于动植物等品种鉴定、遗传育种等领域，近年来得到了迅速的发展。ISSR是Zietkiewicz等于1994创建的一类在PCR反应基础上的DNA分子标记技术，它是根据基因组内广泛存在的微卫星序列设计的单一引物对基因组进行扩增的标记系统，它对两个序列相同但方向相反的简单重复序列(SSR)之间的区域进行扩增。ISSR技术和PCR技术联合使用具有很高的特异性和灵敏度且准确快速，近年来在品种鉴定、种质资源和遗传多样性研究中得到了广泛应用：申请号为201310209120.8的专利技术专利公开了利用ISSR分子标记技术鉴别四川白鹅真伪的方法。其中共用到3个ISSR标记，形成了11个鹅品种(系)DNA用三个遗传标记分别PCR扩增后的标准电泳图谱，用于鉴别被鉴定的鹅群是否是真正的四川白鹅。中国专利CN103484555A(公开日2014.01.01)公开了利用ISSR分子标记法对甘薯品种真实性进行鉴别的方法，成功构建的甘薯品种单一引物的ISSR指纹图谱，使得甘薯品种真实性的鉴定简便、快捷、重复性和稳定性好。中国专利CN102839219A(公开日2012.12.26)公开了一种霍乱弧菌流行株分子鉴定方法及其ISSR-PCR引物及试剂盒，通过提供对霍乱弧菌流行株具有特异性分子鉴定作用的1条ISSR-PCR引物来检测某一分离获得的霍乱弧菌菌株基因组DNA，进而确定该霍乱弧菌菌株是否为流行株。中国专利CN101956016A(公开日2011.01.26)一种适于水稻品种真实性鉴定的ISSR指纹图谱构建方法，提供一种快速、准确的水稻品种的ISSR指纹图谱构建方法及其应用。中国专利CN103215365A(公开日2013.07.24)公开了一种陆川猪及其肉制品的DNA分子鉴定方法，其中ISSR-PCR所用的引物为WM14、WM12和WM29。最终绘制了7张陆川猪及其肉制品的电泳图谱，建立了陆川猪及其肉制品的DNA指纹图谱，可作为区分鉴定陆川猪及其肉制品的依据。但国内外还未见利用分子鉴定方法鉴定梅山猪及其肉制品的方法，建立可以区分梅山猪制品及其他品种猪肉制品的方法，以此来解决涉及梅山猪及其肉制品的假冒销售纠纷，从而有效保护梅山猪地方品种的市场地位和品牌形象。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术中缺乏DNA分子鉴定方法鉴别梅山猪及其肉制品的鉴定方法的缺陷，提供一种操作简单、结果准确、快速高效、利于实际应用的鉴定梅山猪或其肉制品的方法和该方法中所应用的专用引物及试剂盒，所述的方法能够快速、准确地鉴定梅山猪。本专利技术提供一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，命名为梅山1。本专利技术提供一种鉴定梅山猪或其肉制品的方法，包括以下步骤：1)、提取生鲜肉和/或肉制品的基因组DNA；2)、以步骤1)所述的基因组DNA为模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物，进行PCR反应。其中，步骤1)所述基因组DNA提取的方法为本领域常规的方法，较佳地为利用SDS提取缓冲液提取，所述SDS提取缓冲液包括100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、50mmol/LEDTA和250mmol/L NaCl；更佳地为取100mg生鲜肉和/或肉制品，放入研磨器加1000μL蒸馏水，研磨3-5min，取100μL研磨液，加入1mL DNA提取缓冲液，所述提取缓冲液为10mmol/L Tris-HCl，0.1mol/L EDTA，0.5％SDS提取缓冲液，然后再加入25μL蛋白酶K，使终浓度达到100μg/mL，混匀，50℃水浴3小时；用等体积的酚抽提一次，2500r/min离心收集水相，用等体积的酚、氯仿和异戊醇的混合物抽提一次，所述酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1，2500r/min离心收集水相；用等体积的氯仿和异戊醇的混合物抽提一次，所述氯仿和异戊醇的体积比为24:1；加入等体积的5mol/L的LiCl，混匀，冰浴10min；2500r/min，离心10min；转移上清加入等体积的异丙醇，室温10分钟；2500r/min，离心10min后弃上清；加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(pH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇-20℃静置20分钟；室温12000r/min离心5分钟后弃上清；将DNA溶于适量100μL TE中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物，其特征在于，所述专用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物，其特征在于，所述专用引
物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种鉴定梅山猪或其肉制品的方法，其特征在于，所述的方法包括
以下的步骤：
1)、提取生鲜肉和/或肉制品的基因组DNA；
2)、以步骤1)所述的基因组DNA为模板，利用核苷酸序列如SEQ ID 
NO.1所示的引物，进行PCR反应。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括以下的
步骤：
3)、构建步骤2)所述的PCR反应的扩增片段的电泳图谱；或
4)、根据步骤3)所述的电泳图谱，鉴定梅山猪的生鲜肉和/或肉制品。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述提取基因组
DNA的方法为利用SDS提取缓冲液提取。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR反应
的反应体系为模板DNA 2ng/μL、引物0.4μmol/L、2×Taq PCR Master Mix
12.5μL、ddH2O补足25μL；和/或，所述PCR反应的反应程序为95℃预变性
2min，95℃变性30s，54.6℃退火30s，72℃延伸1min，循环40次，72℃再
延伸10min。
6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：史子学，马志永，张国平，朱建忠，王勃，陈建生，陆林根，卫金良，唐赛涌，费琼慧，于庆华，魏建超，刘珂，李蓓蓓，邵东华，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，上海市嘉定区农业委员会，上海市嘉定区梅山猪育种中心，
类型：发明
国别省市：上海;31